[0062] 日间精密度为:将每天吸烟数量频率保持一致的吸烟者血液在实施例2的相同条 件下每天测定1次，共7天，计算7次测定结果的相对标准偏差，可得NNK和NNAL的RSD在 5.2 % -6.0 %范围内；说明在不同时间内测定，方法精密度仍然良好。
[0063] 测定时每样称取相同样品4份，其中1份不加标准品，另3份分别加入已知量的NNK 和NNAL(添加量分别为0.03、0.06、0.09ng;样品按选定的样品前处理条件处理，并按选定仪 器条件进样分析，通过加标样品测出量减去未加标样品测出量(本底），再除以标准加入量 计算回收率。得TSNAs的回收率在73.5 %~82.9 %之间，说明方法回收率很高。
[0064] 实施例5
[0065]采用实施例2的方法对吸烟者血液中的NNK和NNAL进行测定，结果见表2。从分析结 果可看出，尽管采用了超高灵敏的分析方法和装置，但只有混合型卷烟吸烟者血液中的烟 草特有亚硝胺浓度在分析方法的定量限以上，烤烟型卷烟抽吸者血液中的烟草特有亚硝胺 含量大部分仍然在定量限以下。无论是混合型卷烟抽吸者还是烤烟型卷烟抽吸者，其血液 中的烟草特有亚硝胺含量均远低于对人体产生危害的浓度水平。
[0066] 表2:代表性样品中TSNAs含量测定结果
[0068]备注：表示含量低于定量限 [0069] 实施例6
[0070] 所测定样品为混合型卷烟重度吸烟者的血液样品，取血液样品50mL于IOOmL的试 管中，加入含氘带NNK和NNAL内标(浓度为50ng/L)的二氯甲烷IOmL;用高速匀浆机20000转/ min漩祸震荡5min，静置分层后，取下层清液(二氯甲烧层）I.OmL，经0.25μηι滤头过滤后，供 下一步液相色谱分离用。样品通过进样器进入高效液相色谱仪，实验条件同实施例2,把 7.6- 8.6min流出馏分转入第一在线浓缩装置21中，收集NNK，把9.8-11. Omin流出馏分转入 第二在线浓缩装置22中，切割馏分在两个在线浓缩装置中均浓缩到小于200yL尾管中。浓缩 好后，进入气相色谱分析装置，启动气相色谱升温进行气相色谱分析。测定结果表明，该血 液样品总NNK含量为4.04ng/L，NNAL含量为3.86ng/L。
[0071] 实施例7
[0072] 所测定样品为混合型卷烟轻度吸烟者的血液样品，取血液样品50mL于IOOmL的试 管中，加入含氘带NNK和NNAL内标(浓度为50ng/L)的二氯甲烷IOmL;用高速匀浆机20000转/ min漩祸震荡5min，静置分层后，取下层清液(二氯甲烧层）I.OmL，经0.25μηι滤头过滤后，供 下一步液相色谱分离用。样品通过进样器进入高效液相色谱仪，实验条件同实施例2,把 7.6- 8.6min流出馏分转入第一在线浓缩装置21中，收集NNK，把9.8-11. Omin流出馏分转入 第二在线浓缩装置22中，切割馏分在两个在线浓缩装置中均浓缩到小于200yL尾管中。浓缩 好后，进入气相色谱分析装置，启动气相色谱升温进行气相色谱分析。测定结果表明，该血 液样品总NNK含量为2.93ng/L，NNAL含量为1.87ng/L。
[0073] 实施例8
[0074] 所测定样品分别为烤烟型卷烟重度吸烟者、烤烟型卷烟重度吸烟者和电子烟吸烟 者的血液样品，分别取血液样品50mL于IOOmL的试管中，加入含氘带NNK和NNAL内标(浓度为 50ng/L)的二氯甲烷IOmL;用高速匀浆机20000转/min漩涡震荡5min，静置分层后，取下层清 液(二氯甲烷层）1.OmU经0.25μπι滤头过滤后，供下一步液相色谱分离用。样品通过进样器 进入高效液相色谱仪，实验条件同实施例2，把7.6-8.6min流出馏分转入第一在线浓缩装置 21中，收集NNK，把9.8-11. Omin流出馏分转入第二在线浓缩装置22中，切割馏分在两个在线 浓缩装置中均浓缩到小于200yL尾管中。浓缩好后，进入气相色谱分析装置，启动气相色谱 升温进行气相色谱分析。测定结果表明，上述3类吸烟者血液中均没有NNK和NNAL检出。
【主权项】
1. 一种液相色谱馏分可在线连续切割检测的液相-气相二维色谱，其特征在于，其包括 液相色谱分析装置（16)和位于其下游的气相色谱分析装置(20);所述液相色谱分析装置 (16)与气相色谱分析装置(20)之间设有至少两个在线浓缩装置，所述在线浓缩装置用于将 所述液相色谱分析装置（16)按保留时间切割的多段流出馏分依次或交替进行浓缩后再分 别进样到所述气相色谱分析装置(20)中。2. 根据权利要求1所述的液相-气相二维色谱，其特征在于，所述在线浓缩装置包括依 次流体连通的以下组件:第一物料进出口（3)、溶剂蒸发装置和第二物料进出口（9);其中， 所述溶剂蒸发装置包括馏分收集仓(6)、密闭式插入所述馏分收集仓(6)内部的柱塞杆 (4)和位于所述馏分收集仓(6)外壁的控温加热装置(5);其中所述柱塞杆(4)能在待浓缩样 品对其浮力或其自身重力的作用下沿所述馏分收集仓(6)内壁上下移动;所述柱塞杆(4)具 有连通所述第一物料进出口（ 3)和所述馏分收集仓(6)的贯穿式通道； 所述第一物料进出口（3)上设有与其交叉的溶剂排出管（1)，在两者的交叉处设有第一 控制阀（2)，所述第一控制阀（2)控制切割馏分由所述第一物料进出口（3)的输入和浓缩时 挥发的溶剂经所述溶剂排出管（1)的排出； 所述第二物料进出口（9)上设有用于控制浓缩后样品输出的第二控制阀（8)，所述馏分 收集仓(6)和所述第二控制阀(8)之间具有一段尾管(7)，用于储存浓缩后样品。3. 根据权利要求2所述的液相-气相二维色谱，其特征在于，所述液相色谱分析装置 (16)与气相色谱分析装置(20)之间设有数控十通阀（15);所述数控十通阀（15)的第一接口 供所述液相色谱分析装置(16)的流出馏分流入;第三和第八接口分别连接第一在线浓缩装 置(21)的第一物料进出口（3)和第二物料进出口（9)，第五和第十接口分别连接第二在线浓 缩装置(22)的第一物料进出口（3)和第二物料进出口（9)，用两个在线浓缩装置对所述液相 色谱分析装置(16)按保留时间连续切割的流出馏分分别进行在线浓缩;第六接口连接至第 二流动相容器(18)，所述第二流动相用于将在线浓缩后的含待测组分的流出馏分带入所述 气相色谱分析装置(20)中；第四接口用于抽真空和排出溶剂;第九接口连接至所述气相色 谱分析装置(20)的进样口；第二接口与第七接口直接用管线连接。
【专利摘要】本实用新型涉及一种液相色谱馏分可在线连续切割检测的液相-气相二维色谱，其包括液相色谱分析装置(16)和位于其下游的气相色谱分析装置(20)；所述液相色谱分析装置(16)与气相色谱分析装置(20)之间设有至少两个在线浓缩装置，所述在线浓缩装置用于将所述液相色谱分析装置(16)按保留时间切割的多段流出馏分依次或交替进行浓缩后再分别进样到所述气相色谱分析装置(20)中。本实用新型还涉及使用该液相-气相二维色谱的分析方法及应用。本实用新型的装置和方法可将经液相色谱分离的每一段馏分都可切割进入到气相色谱中，实现全二维色谱分析模式，用以解决现有技术中灵敏度低、对转入气相色谱进样口的溶剂量有限制、对组分不能连续切割等问题。
【IPC分类】G01N30/84, G01N30/20, G01N30/46
【公开号】CN205280676
【申请号】CN201521073879
【发明人】申钦鹏, 刘春波, 杨光宇, 尤俊衡, 李忠, 何沛, 王昆淼, 王晋, 张凤梅, 朱瑞芝, 司晓喜, 刘志华, 缪明明
【申请人】云南中烟工业有限责任公司
【公开日】2016年6月1日
【申请日】2015年12月22日