/min、 4°C)除去沉淀蛋白；上清液中加入无水乙醇至终体积分数75%，4°C静置12h，离心去沉淀， 去离子水溶解，离心去沉淀；上清液去离子水透析3d，每8~IOh换水一次，收集透析液。即 得到乳杆菌胞外多糖的水溶液。
[0025] 乳杆菌胞外多糖含量的测定采用苯酚-硫酸法，用葡萄糖作标准曲线。葡萄糖标 准曲线的制作：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，用蒸馏水准确定容至100mL，得到Img/ mL的葡萄糖液，摇匀后准确吸取IOmL该溶液，用蒸馏水稀释定容至100mL，即得100 μ g/mL 的葡萄糖标准液。准确移取苯酚6mL，蒸馏水定容至100mL，即得6%苯酚溶液。分别吸取 0mL、0. lmL、0. 2mL、0. 3mL、0. 4mL、0. 5mL葡萄糖标准液置于洁净的试管中，加蒸馏水至2mL 在冰水浴中加入0. 5mL，6%的苯酚溶液，震荡摇匀后缓慢逐滴加入2mL浓硫酸，摇匀后加塞 置沸水浴加热20min，取出室温冷却10min。采用紫外-可见分光光度计于490nm波长处 测定吸光度。以葡萄糖标准品的质量浓度作横坐标，吸光度作纵坐标绘制标准曲线，并得 出回归方程。取0. 5mL多糖溶液（质量浓度为lmg/mL)于试管中，替代标准品溶液，后续 操作一样，平行3次，测定每个样品吸光度，并取平均值。葡萄糖标准曲线回归方程为y = 0. 0043x(R2= 0. 9970) 〇
[0026] EPS产量的测定：收集透析液测定终体积，然后全部定容至20mL，混合均匀并计算 稀释度；取其中500 μ L，加入500 μ L的蒸馏水、6%的苯酚500 μ L和浓硫酸2mL，振荡摇匀 后加塞置沸水浴加热20min，室温冷却IOmin后测定吸光度A49tinm值；最后换算至原透析液 中EPS的浓度。
[0027] 结果表明，植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum)具有较强的生产胞外多糖的 能力，其胞外多糖产量高达383. 2 μ g/mL。
[0028] 实施例4、植物乳杆菌ZWQ-9产生胞外多糖最佳条件 分别针对乳酸菌的初始发酵培养基（MRS肉汤和BHI肉汤培养基）、培养基的碳源种类 (葡萄糖、乳糖、半乳糖、蔗糖）、发酵液的初始pH值（3. 9、4. 9、5. 9、6. 9、7. 9、8. 9、9. 9)、发酵 温度（25°(：、30°(：、37°(：、42°(：)、发酵时间（2411、4811、6011、7211)及发酵接种量（1:50、1 :100、 1:200、1:300、1:400、1:500、1:600)等影响乳酸菌胞外多糖产量的因素进行了探索。
[0029] 结果表明，该乳酸菌最优的产生胞外多糖的条件为：MRS肉汤培养基，碳源为半乳 糖或乳糖，发酵培养基的初始PH为6~8之间，发酵温度为30°C，发酵时间为48h，发酵接 种量为1:50。在该条件下发酵产生的胞外多糖浓度高达498. 4g/L。
[0030] 实施例5、植物乳杆菌ZWQ-9胞外多糖的应用：生产高EPS酸奶制品， 酸奶的生产是产胞外多糖的乳酸菌最重要的商业应用领域，很多人研究了乳酸菌胞外 多糖发酵剂对酸奶的物理性质的影响。含有胞外多糖的发酵剂可以为乳制品提供黏度、稳 定性和保水性，使产品具有良好的口感、质地和风味。多年来欧洲的各公司研究了很多乳酸 菌胞外多糖的特性，生产出一系列具有特殊性能的发酵产品。乳品制造者还利用含有胞外 多糖的发酵剂来控制酸奶的脱水收缩。尤其在很多国家动物或植物来源的稳定剂禁止添 加，乳酸菌胞外多糖普遍应用于酸奶中。另外，该发酵剂还可以满足当今消费者对产品的低 糖、低脂、和少放食品添加剂的要求。Hassan等发现嗜酸链球菌中只要含有荚膜多糖就可以 增加酸奶的黏性。Rawson和Marshall也发现产黏多糖的乳酸菌能够增加产品的黏性，但是 不一定能增加产品的紧实程度和弹性。该研究还发现在破坏性实验中用不产黏的嗜酸乳杆 菌和产黏的德氏乳杆菌发酵的酸奶黏度恢复比由两株产黏的发酵剂发酵的酸奶快。Adapa 发现利用产黏多的嗜酸乳链球菌可以减轻酸稀奶油的脱水收缩问题。并且这样的酸稀奶油 还具有较高的黏度、黏着力和胶体性质，从而可以得到产品的纤维状质地。
[0031] 实施例6、植物乳杆菌ZWQ-9胞外多糖的应用：生产高EPS的Mozzarella干酪制 品，当产胞外多糖的乳酸菌应用被局限在酸奶和其他发酵乳中时，一些企业已经将产黏菌 株应用到提高干酪的质地上。这方面的应用之所以被限制，是因为胞外多糖经常聚集在干 酪乳清中，导致乳清的黏度增加，使膜过滤的效率下降，蛋白质浓缩和干燥过程延缓。但是 当今人们肥胖症发病率增加，人们更欢迎含脂肪少的食品，这促使厂家开发和生产脱脂、低 脂及无脂的干酪。Mozzarella干酪是比萨饼专用干酪，以其光滑的质地，良好的拉伸性能， 和熔融性为特点。如果生产脱脂、低脂及无脂的原料乳生产，Mozzarella干酪就会变得坚 硬和橡胶感，需要在较高的温度下才可以融化，在冷却过程中很快失去柔韧性，这些物性特 征与干酪的湿度水平有关。观察这些干酪的微观结构发现在全脂和半脱脂Mozzarella干 酪中，大多数的水分保存在蛋白质基质中间的脂肪球形成的水道中。在低脂Mozzarella干 酪中，能够破坏蛋白质基质的脂肪球很少，形成的水道变得很窄，只能容下很少的水滞留， 使这些干酪的湿度较低，形成坚硬、橡胶状的质地，融化性和拉伸性能较差。有研究表明，产 荚膜多糖的发酵剂可以用来提高Mozzarella干酪的湿度、成品率、改善溶解特性，并且不 会影响乳清的黏性。
[0032] 实施例7、植物乳杆菌ZWQ-9胞外多糖的应用：应用于生产面食制品， 近年来，国内也开始研究乳酸菌在中国传统主食馒头中的作用。乳酸菌协同酵母发酵 制作馒头时，在面团发酵过程中，乳酸菌代谢过程中能进行一系列的反应，可以产生风味物 质，如乳酸、醋酸、乙醇、蛋白质降解产物及羰基化合物等，从而使蒸制出的馒头具有良好的 风味，并能延缓老化，延长馒头的货架期。Galle等人的研究表明：乳酸菌胞外多糖可以代 替亲水胶体，改善生面团的切削加工性和流变学特性，诸如面包的体积、质构和保质期等。 而国外也研究发现，乳酸菌胞外多糖对面包的质构、风味等可以起到很好的改善作用，并能 延长面包的货架期。从小麦酸面团中分离出的乳酸菌如明串株菌属、魏斯氏菌属和乳杆菌 属等代谢都能够产生胞外多糖。Kati Katina等人的研究发现在含有魏斯氏菌的酸面团中 添加适量的蔗糖，发酵一段时间后能在发酵面团中检测到高分子聚合糖苷，这种高分子聚 合糖苷能够显著的影响面团的粘性，能够增大面包的体积，在储藏过程中延缓面包硬化。
[0033] 实施例8、植物乳杆菌ZWQ-9胞外多糖的应用：作为益生元应用于食品， 益生元是一类非消化性的物质，但可作为底物被肠道正常菌群利用，能选择性刺激结 肠内一种或几种细菌生长，对宿主健康起到有益作用。目前公认的益生元有果寡糖、半乳 寡糖、大豆寡糖、异麦芽寡糖、木寡糖和乳醇寡糖等。现在用乳酸菌产生的胞外多糖作为 益生元的报道还很少，但乳酸菌胞外多糖具有不可消化性，这使之作为益生元成为可能。 Looijesteijn等对发现lactis subsp. cremoris NZ4010产生的胞外多糖的不可消化性 进行了研究。对老鼠进行体内试验，饲料中含胞外多糖，发现在老鼠粪便中的胞外多糖几 乎是100%，由此表明胞外多糖在肠道中没有消化。Stingel等在研究几种产胞外多糖的 乳酸菌的生物降解过程中，也表明胞外多糖降解率低。Vincent等还发现Streptococcus macedonicus Scl36 含有三糖结构单元 β -D-GlcpNAc-(1-3)-β -D-Galp-(1-4)-β -D-G1 cp。该结构相当于在胞外多糖内部结构中含有N-四糖基乳糖和N-新四糖基乳糖。上述糖 片断已经在人乳中低聚糖中发现，对婴儿的健康非常重要。
[0034] 实施例9、植物乳杆菌ZWQ-9胞外多糖的应用：乳酸菌产生的胞外多糖还有其他的 免疫功能，如T-淋巴细胞的增殖、提高吞噬细胞活性和促进细胞特殊物质（如γ-干扰素 和Ia-白细胞）的生成。另外，乳酸菌胞外多糖在生物合成过程中，控制糖链的长度，在细 胞内合成的低聚糖、短链糖具有不可消化性、产生的热能少，并刺激结肠中重要的益生菌如 双歧杆菌的生长。
【主权项】
1. 一种植物乳杆菌（/banter?) ZWQ-9,该菌株的保藏编号为CCTCC No :M 2015453。2. 根据权利要求1所述的植物乳杆菌ZWQ-9,其特征在于：所述的植物乳杆菌ZWQ-9 的16S rRNA基因序列如SEQ ID NO. 1所示。3. -种权利要求1或2所示的植物乳杆菌ZWQ-9,在保健功能性食品或药品或饲料或 饲料添加剂或化妆品中的应用。
【专利摘要】本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种植物乳杆菌及其应用<b>。</b>一种植物乳杆菌（<i>Lactobacillus？plantarum</i>）ZWQ-9，该菌株的保藏编号为CCTCC？No：M？2015453。所述的植物乳杆菌ZWQ-9？的16S？rRNA基因序列如SEQ？？ID？？NO.1所示。植物乳杆菌ZWQ-9，在保健功能性食品或药品或饲料或饲料添加剂或化妆品中的应用。CCTCC NO:M201545320150714
【IPC分类】C12N1/20, A23C9/123, A23K1/16, A61P37/02, A61K35/747, A23L1/30, C12R1/25, A61P35/00, A61K8/99
【公开号】CN105176875
【申请号】
【发明人】任晓镤, 李明杨, 许倩, 牛希跃, 侯旭杰
【申请人】塔里木大学
【公开日】2015年12月23日
【申请日】2015年10月10日