培养基中，按照同一浓度的不同聚合度琼胶寡糖 (DP3、DP5、DP8)添加至培养基中，培养条件为无氧环境下，4°C，静置培养，每隔3天取样至显 微镜下观察活菌数量，如表1所示。
[0037] 表1不同聚合度琼胶寡糖提高保加利亚乳杆菌在低温贮藏下菌活力
[0038]
[0039]结果表明，在江蓠菜琼胶寡糖(DP3)的条件下，对保加利亚乳杆菌在低温贮藏下的 保护作用最好。
[0040] 实施例3:不同浓度江蓠琼胶寡糖对提高保加利亚乳杆菌在低温贮藏下菌活力的 影响
[0041] 利用以上制备寡糖方法制备出不同浓度的琼胶寡糖，将其添加至已发酵达到〇D600 值为1.2的保加利亚乳杆菌的MRS培养基中，将聚合度3的不同浓度的琼胶寡糖（1 g/L、3g/L、 5g/L、7g/L、10g/L)添加至培养基中，培养条件为无氧环境下，4°C，静置培养，每隔3天取样 至显微镜下观察活菌数量，如表2所示。
[0042]表2不同浓度江蓠琼胶寡糖提高保加利亚乳杆菌在低温贮藏下菌活力
[0043]
[0045]结果表明，在江蓠菜琼胶寡糖浓度为l-10g/L条件下，对保加利亚乳杆菌在低温贮 藏下具有保护作用，而在5g/L的条件下，对保加利亚乳杆菌在低温贮藏下的保护作用最好。 [0046]实施例4:不同聚合度琼胶寡糖对保加利亚乳杆菌在固态菌剂制备中的作用 [0047]利用以上制备寡糖方法制备出不同聚合度的琼胶寡糖添加至已发酵达到OD 6qo值 为1.2的保加利亚乳杆菌的菌液中，将浓度为5g/L的不同聚合度琼胶寡糖(DP3、DP5、DP8)添 加至混合液中，通过利用喷雾干燥机制备固态菌剂，喷雾干燥机工作参数为麦芽糊精添加 量25%，进风温度130°(：，进风速度4111 3/1^11，进料速率70〇1111711，空气压力0.310^。称取制备 的固态菌剂lg进行涂布平板测定活菌数，如图1所示。
[0048]结果表明，提高固态菌剂菌活力的制备中聚合度3-8均有效果，但最优寡糖聚合度 为3〇
[0049 ]实施例5:不同浓度琼胶寡糖对保加利亚乳杆菌在固态菌剂制备中的作用 [0050]利用以上制备寡糖方法制备出不同浓度的琼胶寡糖添加至已发酵达到OD600值为 1.2的保加利亚乳杆菌的菌液中，将聚合度为5的不同浓度琼胶寡糖（lg/L-10g/L)添加至混 合液中，通过利用喷雾干燥机制备固态菌剂，喷雾干燥机工作参数为麦芽糊精添加量25%， 进风温度130°C，进风速度4m 3/min，进料速率700mL/h，空气压力0.3MPa。称取制备的固态菌 剂lg进行涂布平板测定活菌数，如图2所示。
[0051] 结果表明，提高固态菌剂菌活力的制备中浓度l-10g/L均有效果最优寡糖浓度为 5g/L〇
[0052] 实施例6:琼胶寡糖提高保加利亚乳杆菌在胃肠模拟液中耐受性作用工艺流程 [0053]利用以上制备寡糖方法制备出聚合度3-8的琼胶寡糖，将已发酵达到OD600值为1.2 的保加利亚乳杆菌的菌液与不同浓度琼胶寡糖混合，再与胃肠液按l :l(v/v)混合，培养条 件为37 °C水浴加热反应3h，静置培养，从0时每隔45min取样进行稀释涂布平板，平板培养条 件为无氧环境下，在42 °C生物培养箱静止培养2天，数菌落数量，最优条件如图3及图4所示。 [0054]结果表明，提高消化道耐受性能力中最优寡糖添加量是聚合度为3和浓度为5g/L。 [0055]在本发明中，平均聚合度3-8和浓度l-10g/L江蓠菜琼胶寡糖具有提高保加利亚乳 杆菌液体和固态菌剂制备在保藏过程中活力的作用。本发明首次利用江蓠菜琼胶寡糖对益 生菌培养成分进行添加或替换，使保加利亚乳杆菌在低温贮藏下减缓了菌体的死亡，提高 了保加利亚乳杆菌的活性。本发明延长了保加利亚乳杆菌的保藏时间，且琼胶寡糖作为益 生元对保加利亚乳杆菌在低温、消化环境下的保护作用大大增强，从而提高了产品益生菌 的品质和经济价值。本领域的普通技术人员能从本发明公开内容直接导出或联想到的所有 变形，均应认为是本发明的保护范围。
【主权项】
1. 一种琼胶寡糖作为保护剂保藏保加利亚乳杆菌的方法，其特征在于:包括以下步骤： 步骤一、制备琼胶寡糖:将江蓠清洗除杂，烘干，加入江蓠重量30倍的水使江蓠充分溶 胀，置于80°C的水浴中加热2h;高压灭菌，121°C灭菌20min;将江蓠趁热挤胶，用滤布包裹江 蓠，并利用压力机挤压，收集挤胶滤出的多糖溶液，冷却、烘干、粉碎成颗粒，即得江蓠粗多 糖；将冷却的粗多糖溶解水中，制成浓度为5g/L的多糖溶液，加入琼胶酶处理；加酶量为 15% (v/v)，酶活为300U/mL;酶解20-1280min，以制备寡糖溶液，冷冻干燥，或真空干燥成固 体粉末，制得聚合度为3-8的琼胶寡糖； 步骤二、菌种培养:制备MRS培养基，琼胶寡糖作为碳源，接种保加利亚乳杆菌OD600值为 0.8的菌液，接种量为2 %，无氧环境下，42 °C，静置培养2-3天； 步骤三、液体菌保藏:在〇D_值为1.2保加利亚乳杆菌液体中，添加浓度为l-10g/L且聚 合度为3-8的琼胶寡糖，放置4 °C下贮藏； 步骤四、固体菌剂保藏:在0D6QQ值为1.2保加利亚乳杆菌液体中，添加浓度为5g/L且聚 合度为3的琼胶寡糖，喷雾干燥制备固体菌剂，喷雾干燥条件为:麦芽糊精添加量25%，进风 温度130°C，进风速度4m3/min，进料速度700mL/h，空气压力0.3Pa，制备固体菌剂，制备好的 固体菌剂放置在常温或-20°C贮藏。2. 如权利要求1所述的一种琼胶寡糖作为保护剂保藏保加利亚乳杆菌的方法，其特征 在于:所述步骤一中，酶解时间为20min，制得聚合度为8的琼胶寡糖。3. 如权利要求1所述的一种琼胶寡糖作为保护剂保藏保加利亚乳杆菌的方法，其特征 在于:所述步骤一中，酶解时间为80min，制得聚合度为5的琼胶寡糖。4. 如权利要求1所述的一种琼胶寡糖作为保护剂保藏保加利亚乳杆菌的方法，其特征 在于:所述步骤一中，酶解时间为1280min，制得聚合度为3的琼胶寡糖。5. 如权利要求1所述的一种琼胶寡糖作为保护剂保藏保加利亚乳杆菌的方法，其特征 在于:所述步骤二中，MRS培养基的组成为:牛肉蛋白粉10g、鱼肉汁10g，酵母浸出汁粉5g，琼 胶寡糖20g，醋酸钠5g，梓檬酸二铵2g，吐温80 0 . lg，硫酸镁0.58g，硫酸猛0.28g，蒸溜水 1000ml; 121 °C高压灭菌15min，调节pH6 · 2-6 · 4。
【专利摘要】本发明公开了一种琼胶寡糖作为保护剂保藏保加利亚乳杆菌的方法，包括以下步骤：步骤一、制备琼胶寡糖；步骤二、菌种培养：制备MRS培养基，琼胶寡糖作为碳源，接种保加利亚乳杆菌OD600值为0.8的菌液，接种量为2％，无氧环境下，42℃，静置培养2-3天；步骤三、液体菌保藏：在0D600值为1.2保加利亚乳杆菌液体中，添加浓度为1-10g/L且聚合度为3-8的琼胶寡糖，4℃下贮藏；步骤四、固体菌剂保藏：在0D600值为1.2保加利亚乳杆菌液体中，添加浓度为5g/L且聚合度为3的琼胶寡糖，喷雾干燥制备固体菌剂。本发明具有提高保加利亚乳杆菌液体和固态菌剂制备在保藏过程中活力的作用，可用于乳酸菌发酵企业及乳制品生产企业，以生产高活性乳酸菌制品以及高耐藏性的乳制品。
【IPC分类】C12P19/14, C12P19/00, C12R1/225, C12N1/04
【公开号】CN105647808
【申请号】
【发明人】林坤城, 肖安风, 郭东旭, 郑毅, 洪清林, 嵇海峰, 姜泽东, 倪辉, 吴昌正
【申请人】福建省绿麒食品胶体有限公司, 集美大学
【公开日】2016年6月8日
【申请日】2016年2月25日