专利名称：外引百合卡萨布兰卡试管鳞茎的诱导方法
技术领域：
本发明属于生物技术领域，具体地涉及一种外引百合卡萨布兰卡(Lilium oriental hybrid“Cass Blanca”)试管鳞茎的诱导方法。
背景技术：
外引百合卡萨布兰卡(Lilium oriental hybrid“Cass Blanca”)，花瓣纯白，具有浓郁的香气，作为鲜切花有较长的扦瓶寿命(20天左右)，深受人们喜爱。中国的种球来源主要靠从国外引进，不仅花费大量外汇，且引进种质1-2年便失去商品价值。据统计，20世纪90年代末，中国年进口3000万头种球，其中百合占1/3以上，而云南年产百合400万枝，所用百合的种球量占全国一半多。国内外许多科技工作者通过筛选优种优株，试管脱毒和组培快繁已成功。但存在问题是快繁苗移栽成活率不高，且试管苗从定植到商品花产出的周期较长。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术存在的上述缺点，提供外引百合试管鳞茎诱导方法，节约种植成本。
为了实现本发明的目的，本发明提供了如下的技术方案外引百合卡萨布兰卡试管鳞茎的诱导方法，取卡萨布兰卡鳞片诱导产生的不定芽用自来水冲洗后，75％酒精擦洗，然后用0.1％升汞消毒8分钟，后用无菌水冲洗4-5次，5分钟/次，再用无菌纸吸干材料上的水分，切口处切掉2-3mm，接种，培养室温度27±2℃，光照强度2000Lx，光照时间12h/d，鳞茎形成的培养基为MS NAA0.03mg/L，蔗糖含量为9％，不加琼脂的液体静置培养，鳞茎增殖培养基采用MS Kt10mg/L、NAA0.01mg/L，pH值5.8；当鳞茎直径达1cm左右时，取出种植在已消毒过的基质上，浇透定根水，覆盖塑料膜保湿并防止阳光直射，在移苗3天后通风透气，待试管苗长出新叶，除去覆盖保湿的塑料膜。
具体实施例方式为了更好地理解本发明的实质，下面将结合本发明的实施例进一步对本发明进行说明，但本发明的内容并不局限于此。
实施例11材料与方法1.1材料本实验所用材料为外引百合“卡萨布兰卡”鳞片诱导产生的不定芽。
1.2方法1.2.1外植体消毒外引百合“卡萨布兰卡”鳞片诱导产生的不定芽用自来水冲洗后，75％酒精擦洗，然后用0.1％升汞消毒8分钟，后用无菌水冲洗4-5次，5分钟/次，再用无菌纸吸干材料上的水分，切口处切掉2-3mm，接种。
1.2.2培养条件培养室温度27±2℃，光照强度2000Lx，光照时间12h/d，最适鳞茎形成的培养基为MS NAA0.03mg/L(单位下同)，蔗糖含量为9％，不加琼脂的液体静置培养。鳞茎增殖培养基采用MS Kt10 NAA0.01。pH值5.8。
2结果2.1蔗糖浓度对试管鳞茎形成的影响基本培养基采用MS NAA0.03、附加不同浓度的蔗糖，每瓶接入约0.4cm直径的不定芽10个，每处理设3个重点。综合分析(从鳞茎大小、根系发达程度等)后，认为MS NAA0.03 S9％为最适合试管形成鳞茎的培养基(见表1)。
表1 蔗糖浓度对鳞茎形成的影响糖浓度(％)30天鳞茎直径(cm) 60天鳞茎直径 生长状况20 0.5-0.8 0.6-1.5 叶长3cm根+10 0.5-1 0.6-1.5 叶长2.5cm根90.8-1 0.8-1.5 叶长3cm根-60.5-0.8 0.6-1 叶长2cm根-40.5-0.8 0.6-1 叶长2cm根-30.5 0.6-1 叶长3cm根-注“根+”为根系发达长2cm以上；“根”为根长1cm左右；“根-”为根长1cm以下。
2.2糖的种类对鳞茎形成的影响试验用培养基为MS NAA0.03，糖浓度为9％，糖种类包括单糖(葡萄糖、半乳糖)，二糖(乳糖、白糖、蔗糖和麦芽糖)，以及多糖(糊精)。试验结果表明(见表2)蔗糖和白糖均适宜试管鳞茎的诱导，但在含白糖的培养基上，百合根系是丛生状，一定程度上影响了鳞茎生长，而在蔗糖培养基上鳞茎经两个月培养最大直径可达2cm。
2.3各种添加物对试管鳞茎生长的影响为了寻找只使鳞茎形成和生长，而抑制根和叶生长的培养基，我们设计了该组试验(见表3)效果较好的培养基是MS NAA0.03 TA5 S9％的培养基。
2.4不同植物激素对试管鳞茎形成的影响在本组试验中，观察到MS KT10 NAA0.1有利于鳞茎增殖(见表4)，再生小鳞片呈丛生状。经统计，1个鳞茎含有的小鳞片数达到100多个片。
表2.糖的种类对鳞茎形成与生长的影响糖种类 培养90天鳞茎直径(cm) 生长状况葡萄糖 1 叶长4cm根细半乳糖 0.4叶长1cm无根乳糖 0.4叶长2cm根-白糖 1-1.5 叶长8cm根丛生状蔗糖 1-1.5以上 叶长1.5cm根-麦芽糖 0.4叶长褐化糊精 0.4叶长8cm无根.玻璃化表3 不同添加物对鳞茎形成的影响添加物(mg/L) 90天鳞茎直径(cm)生长状况CCC(矮壮素)2 0.7 根-TIBA(三碘苯甲酸)20 1.2 无根ABA(脱落酸)2 0.5 根-Gln(谷氨酰胺)501 根+BR-120(油菜素内脂)50 0.5 苗稍壮根-TA(三十烷醇)5 1.2-2 苗壮根-
表4 植物激素对鳞茎形成的影响培养基(mg/L) 60天鳞茎直径(cm)MS NAA0.03 1-1.5MS NAA0.1 0.8-1MS IAA2 0.5MS IAA3 0.7MS Kt10 NAA0.1 0.8-1.5MS Kt10 NAA10.8-1MS Kt8 NAA1 0.8-1.5MS Kt6 NAA1 0.6-1.5MS Kt5 NAA1 0.6-1.5MS Kt4 NAA1 0.6-1.2MS Kt3 NAA1 0.5-1MS Kt0.2 IBA0.5 0.5-1MS BA2 NAA2 0.62.5试管鳞茎的移植试验中所得百合试管鳞茎已具有根和叶片，可以省去生根培养这一环节。当鳞茎直径达1cm左右时，便可取出种植在已消毒过的基质上，浇透定根水，注意保湿(覆盖塑料膜)和防止阳光直射，在移苗3天后要注意通风透气，待试管苗长出新叶，可除去覆盖保湿的塑料膜，粗放管理，移植成活率90％以上。
3讨论本发明提供外引百合试管内诱导鳞片产生的不定芽形成直径1cm左右小鳞茎的技术，以及糖的种类与量、植物激素等因子对形成试管鳞茎的影响。基本培养基为MS，在试验范围内，蔗糖是最佳碳源，其含量9％，配合使用NAA0.03mg/L，对百合芽形成试管鳞茎最有利。MS Kt10 NAA0.1有利鳞茎增殖。百合常规繁殖可用种子(有性繁殖)或用鳞茎(无性繁殖)。前者的弊端是有些百合不结种子(种子产生困难或很少)，种子萌发后长出的实生苗变异大，而且，由种子形成商品所需的周期很长。后者因鳞茎含水量高，贮藏困难(鳞茎易烂)。组培鳞茎诱导和生长的成功可克服以上问题。本发明曾在10月种植直径为1cm的试管鳞茎，8个月后开花。
百合属球根花卉，试管无性繁殖最终目标是形成新的子鳞茎。试管鳞茎形成与生产，克服了东方百合天然种植子球形成少的缺陷。影响鳞茎形成的主导因子是蔗糖浓度，其次是植物激素种类与组合。诱导试管鳞茎最适培养基为MSNAA0.03 S9％，鳞茎增殖培养基为MS Kt10 NAA0.1。培养基中添加ABA2mg/L，有利百合鳞茎的离体保存，继代周期可达一年。另外用半乳糖代替蔗糖培养鳞茎，也达到延长百合鳞茎继代周期的作用。本试验鳞片诱导不定芽，和鳞茎的诱导与生长，均采用液体静置培养，这为试管鳞茎用大型培养器的扩大培养提供了依据。
权利要求
1.外引百合卡萨布兰卡试管鳞茎的诱导方法，其特征在于取卡萨布兰卡鳞片诱导产生的不定芽用自来水冲洗后，75％酒精擦洗，然后用0.1％升汞消毒8分钟，后用无菌水冲洗4-5次，5分钟/次，再用无菌纸吸干材料上的水分，切口处切掉2-3mm，接种，培养室温度27±2℃，光照强度2000Lx，光照时间12h/d，鳞茎形成的培养基为MS NAA0.03mg/L，蔗糖含量为9％，不加琼脂的液体静置培养，鳞茎增殖培养基采用MS Kt10mg/L、NAA0.01mg/L，pH值5.8；当鳞茎直径达1cm左右时，取出种植在已消毒过的基质上，浇透定根水，覆盖塑料膜保湿并防止阳光直射，在移苗3天后通风透气，待试管苗长出新叶，除去覆盖保湿的塑料膜。
全文摘要
本发明提供外引百合试管内诱导鳞片产生的不定芽形成直径1cm左右小鳞茎的方法，以及糖的种类与量、植物激素等因子对形成试管鳞茎的影响。基本培养基为MS，在试验范围内，蔗糖是最佳碳源，其含量9％，配合使用NAA0.03mg/L，对百合芽形成试管鳞茎最有利。MSKt10NAA0.1有利鳞茎增殖。
文档编号A01H4/00GK1460410SQ0313514
公开日2003年12月10日 申请日期2003年6月4日 优先权日2003年6月4日
发明者龙春林, 程汉英, 罗吉凤, 张长芹, 杨锦, 王俐 申请人:中国科学院昆明植物研究所