专利名称：悬浮培养雷公藤细胞制备的杀虫剂及方法
技术领域：
本发明属于一种生物农药加工与生物防治领域，具体地说是涉及由悬浮法培养雷公藤植物细胞而生产加工雷公藤杀虫剂的一种方法。
雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook.F.)是雷公藤为卫予科雷公藤属木质藤本植物，分布于我国南方福建、江西、浙江、湖北、湖南、广东、台湾等省，是珍贵的药用植物。雷公藤用途极广，其根心部分用于医药，根皮及地上枝叶用于生产生物农药，剩余的残渣可加工成有机肥，具有很高的经济价值。雷公藤也是植物源农药的极佳植物，可开发为生物农药。《神农本草经》谓除气疥骚，杀虫鱼，生山谷。《本草纲目》谓根尤毒。浸水如雄黄色，气极臭。园圃中渍以杀虫，用之颇及，其叶亦毒，与断肠草无异。雷公藤根皮为我国民间传统的杀虫药物，粉碎物或提取物对菜青虫、小菜蛾等多种农林果树害虫有强烈的胃毒，可造成拒食或起麻醉作用，是我国江、浙一带菜园中广泛使用的杀虫剂。把雷公藤开发为生物农药，可以用于无公害蔬菜、有机茶、无公害水果、GAP药材等的生产，从而获得“安全、优质、真实、可控”的食品。但目前以雷公藤为原料制造植物杀虫剂的报道甚少，仅西北农林科技大学无公害农药研究服务中心罗都强等报道了以雷公藤根为原料，配制出一种植物性杀虫剂。但由于对雷公藤长期的不合理采挖，野生雷公藤资源受到极大破坏另一方面此法以雷公藤的根为原料，可利用部分少，加上一次性采挖，不利于资源的可持续利用。尹作鸿等从雷公藤的茎、叶诱导愈伤组织，并进行了固体组织培养；夏志林等从雷公藤组织细胞悬浮培养物中分离出25个化合物，其中经组织培养产生的雷公藤内酯二醇比原植物含量高36倍；曹华兴等提出采用悬浮法培养雷公藤植物细胞而生产雷公藤总生物碱的方法。大量研究成果证明，植物细胞离体培养具有全能合成原生植株的药用有效成份的特征，这是本专利的实验基础和理论基础。用悬浮培养雷公藤植物细胞而生产雷公藤杀虫剂的制备方法未见报道，悬浮法细胞培养雷公藤植物细胞而制备雷公藤杀虫剂与用雷公藤根为原料制备杀虫剂相比更适于规模化、工业化生产，且不受资源的限制。
本发明的目的在于采用雷公藤植物细胞的悬浮法组织培养，工业化生产雷公藤植物性杀虫剂，利用现代技术使雷公藤的药物成份从原始的自然界生长的原生植物中获得，转化为从工业化生产的雷公藤高产细胞株中获得，从而制备雷公藤杀虫剂。
本发明的具体实施过程如下一种植物杀虫剂的制备，其特征在于应用植物悬浮培养细胞生产雷公藤(Tripterygium wilfordiiHook.F.)杀虫剂。即本发明的杀虫剂以悬浮法细胞培养雷公藤植物细胞为原料，经一定的加工过程，可以制成可湿性杀虫粉剂、乳剂、水乳剂、微乳剂。
一、雷公藤植物细胞悬浮培养1、原生植株来源，本专利涉及的药用植物卫矛科植物雷公藤优良无性系由福建省泰宁县杉阳山地开发有限公司等单位提供。
2、雷公藤植物细胞悬浮培养，采用摇瓶培养或玻璃通气机械搅拌式反应器进行悬浮培养。
二、雷公藤悬浮培养获取细胞预处理1、雷公藤细胞悬浮培养后，获取雷公藤悬浮培养干细胞，并将干细胞粉碎至1～6mm的粗粉碎物后用高能粉碎机粉碎至95％过300目筛，获取粉剂备用。
2、雷公藤细胞悬浮培养后，也可经细胞悬浮培养后获取的悬浮细胞用300目筛过滤，过滤液抽真空浓缩至原液量的10％，得到雷公藤细胞浓缩原液备用。
三、雷公藤杀虫剂的配制1、悬浮法细胞培养的雷公藤植物细胞经一定的加工过程，与农药助剂及填料可配配成雷公藤可湿性杀虫粉剂，其各有效成份的重量百分比例为雷公藤悬浮培养干细胞10～30％
填料50～75％农药助剂5.0～15％可湿性粉剂中采用的填料可以是滑石粉、硅澡土、膨土、白碳黑中的一种或多种，农药助剂可以是十二硫基硫酸钠、木质素黄酸钠、辛基磷酸钠、分散剂N、脂肪醇聚氧乙烯基乙醚、羧甲基纤维素等的一种或多种混合物。
雷公藤可湿性粉剂的配制方法是A、将悬浮法培养的雷公藤干细胞粉碎至1～6mm的粗粉碎物。
B、将步骤A所得的粉碎物用高能粉碎机粉碎至95％过300目筛，和填料、农药剂按比例充分混合后即配制成雷公藤杀虫粉剂。
2、悬浮法培养的雷公藤悬浮液经一定的加工，其浓缩液可配制雷公藤杀虫乳油、水乳剂及微乳剂，这三种剂型中各组份的重要百分比例为1)、乳油悬浮法培养的雷公藤悬浮浓缩液 10～40％溶剂 50～75％乳化剂10～20％乳油剂中的溶剂选用二甲苯、甲醇、乙醇、异丙醇、乙酸乙酯中的一种或多种；乳化剂选用辛基酚聚氧乙烯醚、壬基酚聚氧乙烯醚、十二烷基苯磺酸钙、十八醇聚氧乙烯醚磷酸酯等的一种或多种混合物。
乳油的配配方法是首先将雷公藤悬浮培养过滤液进行浓缩，浓缩液和乳化剂、溶剂按比例混合均匀即得雷公藤杀虫乳油。
2)水乳剂悬浮法培养的雷公藤悬浮浓缩液 10～30％水40～60％溶剂 10～25％乳化剂5.0～15％共乳化剂 1.0～5％水乳剂中的溶剂选用二甲苯、乙醇、乙酸乙酯中的一种或多种；乳化剂选用烷基聚乙二醇醚、烷基苯基聚乙二醇醚、聚氧乙烯山梨醇糖醇酐酯、聚氧乙烯脂肪酸酯等的一种或多种混合物；共乳化剂选用丁醇、异丁醇、十二烷醇-1、十四烷醇-1、十八烷醇-1等链烷醇类的一种或多种。
水乳剂的配制方法是将雷公藤悬浮培养过滤液进行浓缩，浓缩液与溶剂、乳化剂和共乳剂加在一起，在常温下高速搅拌，即可得雷公藤杀虫水乳剂。
3)微乳剂悬浮法培养的雷公藤悬浮浓缩液10～30％水 50～70％乳化剂 10～20％微乳剂中采用的乳化剂有苯乙酚聚氧乙烯醚、聚乙烯苯乙基酚醚油酸酯、联苯酚聚氧乙烯醚、壬基酚聚氧乙烯醚等的一种或多种混合物。
微乳化剂的配制方法是先将乳化剂溶于水，在搅拌情况下向其中滴加雷公藤悬浮法培养的过滤浓缩液，在40～50℃恒温搅拌1h，冷却至室温即可得到雷公藤杀虫微乳剂。
四、本发明实例实例1称取雷公藤悬浮培养干细胞10kg，粉碎至95％过300目筛，将该细粉与40kg膨润土、40kg白碳黑、5kg辛基磷酸钠、5kg分散剂N充分混合后即可得雷公藤可湿性杀虫剂。该粉剂200-1500倍液可防治菜青虫、小菜蛾、粘虫等害虫，防治效果达90％以上，残效期8～15d。
实例2称取雷公藤悬浮培养过滤浓缩液15kg，与异丁醇40kg、二甲苯35kg、辛基酚聚氧乙烯醚10kg充分混合，即可配制得到雷公藤杀虫乳油。该制剂50～600倍，可有效地防治菜青虫、小菜蛾等害虫。
实例3称取雷公藤悬浮培养过滤浓缩液15kg，与二甲苯10kg、乙醇5kg、烷基聚乙二醇醚15kg、异丁醇5kg、蒸溜水50kg，在常温下以7000r/min搅拌5min，即得雷公藤水乳剂。该制剂50～500倍液可有效防治各种蔬菜、瓜果、果树及茶叶等害虫，也可防治蚊子、苍蝇等卫生害虫。
实例4将苯乙烯酚聚氧乙烯醚15kg、联苯乙酚聚氧乙烯醚5kg和蒸溜水65kg混合均匀，在45℃高速搅拌下滴加入雷公藤悬浮培养过滤浓缩液15kg，恒温下再搅拌30min，冷却后即得雷公藤杀虫微乳剂。该制剂50～600倍可防治蔬菜、瓜果及果树等的主要害虫，对水产养殖中的寄生虫也特别有效。
权利要求
1.一种植物杀虫剂及其制备方法，其特征在于应用雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook.F.)新长出的原生植物茎、叶或成熟、饱满的种子作为外植体进行悬浮培养，获取悬浮培养细胞，生产雷公藤杀虫剂。即本发明的杀虫剂以悬浮法细胞培养雷公藤植物细胞为原料，经一定的加工过程，可以制成可湿性杀虫粉剂、乳剂、水乳剂、微乳剂。
2.根据权利要求1所述的杀虫剂，是经细胞悬浮培养后，获取雷公藤悬浮培养干细胞，并将干细胞粉碎至1～6mm的粗粉碎物后用高能粉碎机粉碎至95％过300目筛，获取粉剂备用。
3.根据权利1所述的杀虫剂，也可经细胞悬浮培养后获取的悬浮细胞用300目筛过滤，过滤液抽真空浓缩至原液量的10％，得到雷公藤细胞浓缩原液备用。
4.根据权利要求1、2所述的杀虫剂，其特征在于雷公藤悬浮培养干细胞可与填料、农药助剂配制成可湿性粉剂，各组分的重量百分比例为雷公藤悬浮培养干细胞 10～30％填料 50～75％农药助剂 5.0～15％可湿性粉剂中采用的填料可以是滑石粉、硅澡土、膨土、白碳黑中的一种或多种，农药助剂可以是十二硫基硫酸钠、木质素黄酸钠、辛基磷酸钠、分散剂N、脂肪醇聚氧乙烯基乙醚、羧甲基纤维素等的一种或多种混合物。
5.根据权利要求1、3所述的杀虫剂，其特征在于悬浮法培养的雷公藤悬浮液经浓缩可与溶剂、乳化剂配制成乳油，其各组分的重要百分比例为悬浮法培养的雷公藤悬浮浓缩液 10～40％溶剂 50～75％乳化剂 10～20％乳油剂中的溶剂选用二甲苯、甲醇、乙醇、异丙醇、乙酸乙酯中的一种或多种；乳化剂选用辛基酚聚氧乙烯醚、壬基酚聚氧乙烯醚、十二烷基苯磺酸钙、十八醇聚氧乙烯醚磷酸酯等的一种或多种混合物。将上述比例的浓缩液和乳化剂、溶剂在混配釜中混合均匀即得雷公藤杀虫乳油。
6.根据权利要求1、3所述的杀虫剂，其特征在于悬浮法培养的雷公藤悬浮液经浓缩可与水、乳化剂、共乳化剂配制成水乳剂，其各组分的重要百分比例为悬浮法培养的雷公藤悬浮浓缩液 10～30％水 40～60％溶剂 10～25％乳化剂 5.0～15％共乳化剂 1.0～5.0％水乳剂中的溶剂选用二甲苯、乙醇、乙酸乙酯中的一种或多种；乳化剂选用烷基聚乙二醇醚、烷基苯基聚乙二醇醚、聚氧乙烯山梨醇糖醇酐酯、聚氧乙烯脂肪酸酯等的一种或多种混合物；共乳化剂选用丁醇、异丁醇、十二烷醇-1、十四烷醇-1、十八烷醇-1等链烷醇类的一种或多种。将上述比例的浓缩液和溶剂、乳化剂和共乳剂加在一起，在常温下高速搅拌，即可得雷公藤杀虫水乳剂。
7.根据权利要求1、3所述的杀虫剂，其特征在于悬浮法培养的雷公藤悬浮液经浓缩可与水、乳化剂配制成微乳剂，其各组分的重要百分比例为悬浮法培养的雷公藤悬浮浓缩液 10～30％水 50～70％乳化剂 10～20％乳化剂中采用的乳化剂有苯乙酚聚氧乙烯醚、聚乙烯苯乙基酚醚油酸酯、联苯酚聚氧乙烯醚、壬基酚聚氧乙烯醚等的一种或多种混合物。将乳化剂溶于水，在搅拌条件下向其中滴加雷公藤悬浮法培养的悬浮浓缩液，在40～50℃恒温搅拌1h，冷却至室温即可得到雷公藤杀虫微乳剂。
全文摘要
一种雷公藤杀虫剂及其制备方法，其特征在于应用雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook.F.)悬浮培养细胞经一定加工，可以制成雷公藤可湿性杀虫粉剂、乳剂、水乳剂、微乳剂等剂型雷公藤杀虫剂。本发明的杀虫剂生产工艺简单、不受资源限制、成本低廉、药效显著、高选择性、低毒害、低残留，同时害虫不易对其产生抗药性，符合目前生物农药的发展方向，在蔬菜、瓜果、果树及各种经济树种等植物害虫防治中具有广泛的推广应用前景。本方法生产的雷公藤杀虫剂具有生产周期短、药物成分含量高，生产过程不污染环境等优点，并有利于维持自然界雷公藤资源的持续生长与持续利用。
文档编号A01N63/00GK1675999SQ20041005913
公开日2005年10月5日 申请日期2004年8月13日 优先权日2004年8月13日
发明者洪伟, 吴承祯 申请人:洪伟, 吴承祯