专利名称：雌核发育白鲫鱼的培育方法
技术领域：
本发明涉及鱼类的培育，具体涉及鱼类的雌核发育。
背景技术：
雌核发育技术在鱼类提纯育种、探讨鱼类的性别决定和鱼类单性养殖等方面具有重要的作用。国内外关于鱼类雌核发育研究已有不少的报道，如鲤鱼、草鱼、鲢鱼、虹鳟、罗非鱼、红鲫、白鲈鱼的雌核发育的研究均有报道。一般雌核发育鱼的培育是采用鱼类单倍体卵子经遗传物质灭活的精子激活，再经过染色体的加倍处理，形成主要依靠卵子的遗传物质来发育的二倍体后代。用来激活卵子的精子，一般是异源精子，虽然异源精子经过灭活处理，但是存在“异精效应”，这种“异精效应”对雌核发育后代可能产生好的作用。在鱼类提纯育种中，一般认为1代雌核发育鱼的纯合效应能够相当于多代鱼的自交提纯的效应，因此在雌核发育的后代中可获得遗传纯度高、抗逆性强、生长速度快等优势的个体。日本白鲫(Carassius auratus cuvieri)属于鲤科、鲤亚科的鱼类，是鲫鱼中生长速度最快的二倍体鲫鱼(2n＝100)之一，常被用来作为杂交育种的亲本之一，但是在抗逆能力与肉质方面尚不够理想；而团头鲂(Megalobrama amblycephala)属于鲤科、鲌亚科的二倍体鱼类(2n＝48)，与日本白鲫相比，属于不同的亚科鱼类，但其肉质鲜嫩。如何使生长速度快的白鲫在遗传纯度、抗逆能力、肉质等方面性状得到改良是值得研究的问题。
发明内容
本发明旨在通过白鲫的雌核发育技术进一步改良白鲫的性状。
本发明是通过以下技术方案实现上述发明目的的雌核发育日本白鲫的培育方法，将经紫外线灭活的团头鲂精子与日本白鲫的成熟卵子混合后，经2～3分钟将被激活的卵子置于0～4℃温度条件下冷休克处理30～40分钟，然后将胚胎在20～21℃水温下孵化，孵化出的鱼苗放入池塘中养殖。
下列结合附图进一步详述本发明。
图1雌核发育二倍体白鲫外形图2雌核发育二倍体白鲫染色体(2n＝100)本发明利用紫外线灭活的团头鲂的精子激活日本白鲫的卵子。挤出达到性成熟的雄性团头鲂的精液于培养皿中，用Hank’s液稀释精液，Hank’s液与精液的比例为4∶1，稀释的精液在培养皿中以薄层分布，把盛精液的培养皿放在垫有冰袋的摇床上(旋转速度为30～40转/分)，并置于2支功率分别为15瓦的紫外灯下照射处理，紫外灯与精液的距离为10～12厘米，照射时间为30分钟。Hank’s液配方如下KCL 0.40g，NaCL 8.00g，NaHCO30.35g，KH2PO40.06g，Na2HPO4·7H2O 0.09g，Na2HPO4·12H2O 0.10g，MgSO4·7H2O 0.10g，MgCL2·6H2O 0.10g，CaCL20.14g，Glucose 1.00g；加蒸馏水配至1升。
照射过的精液与日本白鲫的成熟卵子混合，并用干净的鸡毛充分搅拌，把卵子平铺到盛有清水培养皿中，2分钟后，将卵子在0～4℃温度条件下冷休克处理30～40分钟。然后胚胎在20～21℃水温下孵化。观察实验鱼的胚胎发育情况，并记录胚胎发育至原肠胚的百分比和孵化率的情况。孵化出的鱼苗在池塘中养殖。至1年后检测实验鱼的性成熟情况。
通过肾细胞直接制片法对实验鱼的体细胞染色体数目进行检测。肾细胞直接制片法的方法为在18～22℃水温下培育实验鱼1～3天后，对实验鱼注射PHA 1～3次，每次剂量为2～8μg/克体重，间隔时间为12～24小时，在解剖取材前2～6小时，注射秋水仙素，剂量为2～4μg/克体重。取出肾组织，在生理盐水下剪碎肾组织，0.075mol/L KCL低渗处理，在20℃温度下低渗40～60分钟；用冰醋酸∶甲醇(1∶3)固定肾细胞1～3次；在冰冻载玻片上滴片；Giemsa染液染色。
上述日本白鲫卵子在雌核发育过程中，有80％～85％的胚胎能发育到原肠胚，20％～25％的胚胎能发育到脱膜，卵子发育到胚胎脱膜的时间为80～100小时。脱膜后2天的幼鱼放到池塘中养殖。在外形上，雌核发育白鲫与普通日本白鲫基本相似，没有明显的团头鲂的外形特征(见图1)。染色体检测结果表明雌核发育日本白鲫为二倍体(2n＝100)(见图2)，他们经1年饲养，可达到性成熟，其产生的成熟卵子与日本白鲫精子受精，可以产生大量后代。
作为对照组的日本白鲫(♀)×团头鲂(♂)的胚胎的受精率为85％～90％，孵化率为60％～65％，从受精到胚胎孵化脱膜的时间为78小时左右。染色体检测表明他们是三倍体(3n＝124)。在外形上，日本白鲫(♀)×团头鲂(♂)后代兼有日本白鲫和团头鲂的特征，如他们的身体类似白鲫，而头部类似团头鲂。
用本技术获得的大量的可存活的雌核发育后代，不仅日本白鲫的抗逆能力、遗传纯度提高，肉质改善，而且表明团头鲂精子是激活鲫鱼卵子进行雌核发育的理想材料。
权利要求
1.一种雌核发育日本白鲫的培育方法，其特征在于经紫外线灭活的团头鲂精子与日本白鲫的成熟卵子混合，经2～3分钟将被激活的卵子置于0～4℃温度条件下冷休克处理30～40分钟，然后将胚胎在20～21℃水温下孵化，孵化出的鱼苗放入池塘中养殖。
全文摘要
本发明涉及鱼类的雌核发育技术。将经紫外线灭活的团头鲂精子与日本白鲫的卵子混合，被激活的卵子经冷休克处理，孵化出雌核发育的日本白鲫，雌核发育的日本白鲫不仅生长速度快，而且遗传纯度与抗逆能力提高，肉质改善。
文档编号A01K61/00GK1709045SQ200510031688
公开日2005年12月21日 申请日期2005年6月10日 优先权日2005年6月10日
发明者刘少军, 刘筠, 周工健, 罗凯坤, 孙远东, 张纯 申请人:湖南师范大学