专利名称：包含乳蛋白的猪精子稀释培养基的制作方法
技术领域：
本发明涉及在家畜人工授精的准备过程中提高和/或保持精细胞活力的方
法。Ax4t精(AI)在家畜繁 沐改善的哺乳动^r^殖中已经广^l皮齢。 与直接交酉"目比，AI提供了许多优点。例如，从单个雄性动物收集的精子可以 用于向多个雌性动物授精，从而减少了维^fW所需的雄性动物的数量。AI也 ^t^歹姊予更大的控制，这导致更大的繁殖率和更宽的且更有效率的基因或遗 传决定的棒性的传播。为了得到AX^fr的良好效果，从雄性动物收集的精子 首^^体夕H^存，然后对选賴雄性动物实;^fr。因此，AX4t精的繁歹誠 功高;1W^于在体外^"理的长时间内賴"^液4^人满意的储^存。
通常，用于^^^精的精子在^^]合适的液###^养^##^#^存。 稀，养基的种类和储存温度与稀，养基中精细胞活力的提高和/或j械具
有密切的联系，因而也与^t精能力密切相关。所用精子的工艺要求可育嫩照 树的不同而不同。牛4^1t要料目对^^l的精细胞，并且合适的样品可以被 i2ii4冷冻并储存持久的时期而并不会负面影响样品的繁殖力。相反，猪精子不
能以这种方式处理，因为向雄^t顺要更多数量的精细i^更大量的糈;^戈
稀##液。^"^^it常^^"^适的液^^W养U^ft^释，并且^HP到约17 r的储存温度。培养基足以将样品的体积3t加到其原始^P、的约5至20倍，并 且提供#^^錄性物质以提高和/或##精细胞的活力。因为精细胞的代谢不 負a妓分^y卬制，所以^fr液储^^UL天^，精细胞活力纽絲的丧失。 因此，^AX^t精中，^^储存超iti天的稀W^液会面临低^^率的问题。 猪精子能^^存W目对短的时间内，对用于AI的猪精细胞的^^I和分J1A生了 相当大的限制。
本发明提供了包^#精细1&^###^养基的改善后的组#。许多用于 提高和/或##猪精细胞活力的特定的液*养基制剂是已知的，或者在商业上 能够4寻到。-"#^，稀#^养基制剂以固体形式(辦'J)提供，并JL^于水后 ^J I。 ^iM^页域中可以发^W示准的制剂。例如，丄Gadea综述了关于^AX^: 精过程中^f^J的猪糈液稀躲养基的最新知识。讨论了有效的新鲜糈液稀躲养基的要求，并且比较了目前可以得到的稀释培养基(参见
http: //www. engorinix. co『i/semen—extenders_used_in—e一articles—87 P0R-htm)。猪精细^NW养Uf常包含盐类、能量源(例如葡萄糖)、 一种或 多种抗生素和至少一种緩冲剂(例如4-(2^^乙④-l-哌溱乙^t^( HEPES)) 以使得到的溶液具有6至7. 5之间的pH值。额外的组分可能^己二胺四乙酸 (EDTA)和牛血清清蛋白(BSA)。得到的物质的^^,当溶于水时，将产生具 有220至380毫渗透^f"之间的渗透压力的溶氣
牛血清清蛋白(BSA)是一种广狄用于组*中以提高和/或##精细胞 妁活力的蛋白质。BSA稳定7K^液中的高分子，并皿广^^用于细皿养l BSA敬^i午多有毒物质并JU惑定稀辨养基的pH值。BSA的特性使它成为特 别适于提高和/或^#精细1^舌力的^^性物质。然而，BSA的^^]具有两个主 狄吾、。首先，BSA是从牛血清中分离^m的。由于某些牛产品的Y^，最值 得注意的是iL^制品，与牛海绵稀病(BSE)的U有关，因此，它絲了潜 在的威胁。其次，BSA的分离和提纯是高成本方法，并且不能始终产生具有可靠 质量和性能的产品。因此，BSA的^4^H^相对较高，并踊成了猪精细^#释 培养基成本的主要部分。迄今为止，在猪精细1&#躲养基的应用中没有BSA 的^的^f锁。为AI工业:^供^i至、济的并且^il合的BSA卩戈，;^^发明的 主要目的。
本发明涉絲波态猪精细^"辨养基中，主要作为BSA替代物的来自牛 乳的蛋白质的应用。吝'L^白是相对便宜的并且广^^可得到的蛋白质来源。乳 蛋白是多种蛋白质集合的名称，可以从乳汁或乳清中分离，所述乳清是从牛乳 制itA干酪中一种的副产品。它一to^;UL疫-球蛋白、P-專U求蛋白、a-乳白 蛋白、血清清蛋白^i午多其它蛋白质的';^^;,它们的天然形iU:可溶的。在 精f"^辦养基中^^)IL^白已经由MR,E. J. Cassou在1953年描述了 (专利 FR1043684 )。 Cassou描述了使用脱脂乳稀释乳牛精子。在更新近的时期有 Batellier等的广泛研究(Theriogenology 48 (1997) pp 391-410; patent EP 0969850B1 )。这些研究主要涉及乳汁的S^白组分在马精^NW养基中的应 用。在更近的日械L. de Backer en S. Poncelet的成果(专利NL 1024129A )。 在这些专利中，描述了在马精子稀，养基中脱脂乳粉(由Nestl6生产的 Gloria牌)的应用。絲，MT. Pellicer-Rubio等的研究描述了包含山羊精
5子稀释培养基的乳汁的应用(HT. Pellicer-Rubio， T. Magallon and Y. Corabarnous. Biology of ^production 57 (1997) 1023—1031 )。与上述实例 相反，(歸旨)乳汁或絲白(天^^白)i^殳有成功地用于在17 。C^M^猪 精细胞。虽然已经才te了^^1 (，旨)乳汁或^"白^i显^^猪精细胞。但是 并^M^页^功地广^用。
已知乳汁的^Mt组分对精子活力既有益又有害。近年所做的研究表明, 白，乳汁的主M白，在^4培养基中显示出对精子具有保护的作用。作为卵 黄蛋白以翻以的方式，終白减少了脂质结^白絲的成员(所谓的BSP蛋
白，诱导胆固醇^l脂A^子^ji除去)对精子的结合以;^r子脂质的丧失，
同时在储存期间##精报动4沐活力。絲白^HM絲期间防止BSP蛋白 对精子膜的不利影响(A. Bergeron, Y.Brindle， P. Blondin， P.Manjunath， Biology of ^production 77, (2007) ppl20-126; A. Bergeron, P. Manj皿ath. Molecular Reproduction and Development. Volume 73， 2007， pp 1338 - 1344 )。 令人惊讶地，Batellier等发5^'L清蛋白浓缩物、乳汁孩&虑液^_滤、液在4或 15。C储存48和96h^斷氐了种马精子的存活率(R Batellier， M Magistrini, J. Fauquant， E. Palmer. Theriogenology 48 (1997) pp. 391-410)。因此， 乳汁血清蛋白或乳清蛋白的4t^ ^4页域不可能具有那些用途。
尽管在5'C或左右，包含乳汁或包^蛋白的稀W"养M功应用于个别物 种，例^^马和/^HS但是vMv4U殳有^il过猪精细皿态稀，养基的刻以成 功应用。猪精细胞与许多其它物种的精细胞非常不同，因为它们极端易受^ 克损害。因此，不能假设能够应用于某^乳动物的精^# #基也可以
适用于所有哺乳动物，所以;M贞域^M^A员可以容易^Mf成功的稀糾养狄
一个树转用到另一^Wt。与许多其它哺乳动物相比，猪精细餘l^h具有 不同的磷脂组，。低胆固醇/磷脂比率和胆固醇在膜内不对称的分布使猪精细 胞变4寻对^^温度非常敏感，导 渗透性增加和受^^作用的丧失。因此，
一次射出的糈液'lfe^HP到i5x:或^p至低于i5x:导致活力的丧失。为了a
这种4^克，粉子的做法是#^稀#^1一^出的精液保留在15匸以上几个小
时以诱导*性。在实践中，桥液被收絲隔离罐中以狄与更冷的表面接触，
并iLI^的稀释是在35-37。C朋稀辨养絲树释，^贿子W转至 17TC。在17匸进^##^子的进一步储存，在该温度下精子的代谢(^f氐，il^:延长储存时间的必^H^。低于12'C的储存对运动，li^膜的在体外的完整)"生具 有消^fel^^ (P. Vyt. Thesis. Examination and storage of liquid porcine semen. Faculty of Veterinary Medicine, Ghent University 2007)。
本发明涉及来自牛乳的蛋白，特别是来源于乳清的蛋白的应用，所述应用 主要目的是在氣态猪精细^##^养基中作为BSA的替换物。l'L^白(既不是 酪蛋白也不是来自乳汁或乳清的其它蛋白)在BSA如上所ii^挥自身作用以及 其^f戈BSA的功能的应用^f戈BSA的用途，对于猪精细^r辨养U^史有报 道。令人惊讶地，我们发现源于乳清的蛋白的一种特歹衫且分在液^#辨养基 中^E见出提高和/或^^猪精细^力相关的积淑特性。该源于乳清的蛋白的特 歹衫且分名为Porex,以便于简略描iie Porex在关于提高和/或###精细# 力方面显示出超过BSA的^^性能，正如絲细胞储存期间的运动性所示，并 且^^:猪产仔率所示，以狄重要的同窝仔大小。
Porex由乳清，物产生。关于本发明的Porex生产是通#中等##下膜 滤法进行的。本领域中有几种方法来分离和纯化水溶除的乳汁或乳清蛋白。这 些方法中，过滤AX^斤周知的并且广泛应用的4支术(Rombaut et al. J. Dairy Sci. 90 (2007) pp 1662-1673)。液#^匕品^±>應乂页域的技权员可以容易地应 用现有的过滤4支术。为了制造Porex，首先^^具有200賴来孔径的薄膜滤器对 乳清棘物进行#>虑。iiyt许所有较小的生物活性蛋白通过，而截获了来自微 生物或变性蛋白的^f射可孩M立。得到的生物活性蛋白通it^滤进^^一步纯化。 ^;虑的特征为具有Mi々3000至100， 000道尔顿的衬量截获范围(MWCO)。使 用10， 000道尔顿的MWCO制造Porex。具有10， 000道尔顿^^圣的itifl器允许来 自乳清的矿物质和專t^过，而生物活性蛋白被进一步浓缩。然后喷雾干;^ 缩蛋白。制备适于本发明的Porex的乡树必^Ht是在乳清处理过程中4橫pH 械当温度。在孩G虑之前，将乳清棘物在66XM橫3^4中。船斷&显度并 ^^在22'C。以这种方法纯化的Porex主要由p-孝U求蛋白、a-乳白蛋白械 巨^^赋。另外，Porex还包含少量在乳汁中以^Wf多的ia^存在的富絲白， 例如乳铁传递蛋白和乳it!U膽酶。这些蛋白在4條的液^"精细^NW养 基中起重要作用。Porex的进一步重JMt征是缺少游离或M合的脂肪和矿物 质。Porex仅包含极少量的与蛋白结合的脂肪和矿物质。
上述制造Porex的方法产生高度纯化的^W沐非变性天然蛋白产品，其可溶于水，高达30克每100毫升。一^^析表明，干燥的Porex包含97。/。的蛋 白、2. 3 %的灰'絲0. 3 %的脂肪。蛋白组分包含46 ± 3 %的p -享L球蛋白，16 土2o/o的a-乳白蛋白和26±2%的糖巨肽。10%的剩^^且分包含，许多其它蛋 白之中的牛血清清蛋白、乳铁传递蛋白和乳it!U緣酶。
本发明提供包^"精细胞稀，养基的改善的组合物，所述培养基包含 Porex， ^P!r有通it^t蛋白的协同作用j錄精细胞的功能。这些蛋白其中之一 是结合了树^4糊质的P-孝U求蛋白，所述物质其中包^^午多金属和發u7]^生分 子例如长鄉旨肪酸、类维生素A、类固醇和胆固醇。n'U求蛋白的结^^性可 以在除去氧^^旨质方面给予帮助，否则##^#氧^^豫:1^"损害精细 。 存在于Porex中的另一种蛋白是a-乳白蛋白。该蛋白具有抗菌和"^^化寸錄， 并JL^^^属。糖巨肽具有抗病毒和抗菌'^t。牛血清清蛋白能够可i^ki^合 树物质。它还能够齡自由基并且使多种有毒亲腾l"生代谢物失去活性。清蛋 白具有对脂肪酸、血色素、胆红素的高度亲合力，并财小的带负电荷的絲 ^^具有广泛的亲合力。它与p比喷磷酸酯(pyridoxyl phosphate )、半M 酸、谷胱甘#多种金属形成^#加賴。乳铁传递蛋白是纟綠妙白，^'J 多重效果，包括作为抗糸&物剂。乳过氧化物酶已经确定作为抗微生物剂。已 经证明它对多种微生物具有杀菌和抑菌作用。这些蛋白的协同作用可育將到存 在于乳清中的许多其它蛋白的帮助。
本发明提供包^"精细麟，养基的改善的组合物，所述培养基包含 Porex，其超ij保护其中精细胞的作用，尤其是对抗多种有毒物质并对^^化。 有/Ut有4^质可肯M员害精细胞。它们是来自死亡精细胞和其它细胞例如细菌 和白细胞的代谢产物、由细菌产生的有毒产物、微量重金属和自由差^例如活性 綠活性氮。
^子发生期间，在射精并悬浮在稀#^养基之后，以凡g引入雌性生殖 道^，精细J!&^育W史自由基(活'Iil^活性氮)损害。在一次射出的桥液 中，在稀辦养基中以^^雌性生殖道中，来自雄性生殖器官的精细胞面临新 的生物化学环境，其中存在不同的氧化体系。Porex^j^JL^旨精细胞防治氧 化的作用。最重要的，Porex通过包含p-孝L^蛋白和乳itlU⑩酶的A^t蛋白 的^IU旨用，防止细^M^且^i氧4匕。
细菌和细菌毒素主要来自于阴茎包皮，来自于^"^t理或来自于稀释剂制备中使用的水。并且，用于制备稀，养基的化学品并不是完全隔离细菌和细 菌污染物的。取决于物种，细菌通过直接作用于精子或通过酸^i^境，对精子 品质具有有害影响，即斷腿动性、细舰亡和聚集。猪精细胞非常容易被细 菌'f錄毒的产物攻击。与许多其它哺乳动物相比，猪精细^^膜中具有不同的 磷脂组合物，这也使它们对细菌毒素動。敏感。亲水f生毒素可以^口容易的通
ii^itA细胞。最值得注意的是，由于猪精细胞的这种异常特征，猪精子运动
性抑制^^^^了用于^N^员害毒素的特歹iM^測^(D. Hoornstra， M A. Andersson， R. Mikkola， R S. Salkinoja-Salonen. Toxicology in Vitro, 17 (2003)， pp 745-751 )。 BSA由于吸收来自稀，养基的代谢细菌产物而被认为
对其中幸存的精子具有积^ l影响。同样地，但是由于不同蛋白的存在而可能更 加有效，Porex防jh^t精细胞受到来自细菌毒素的作用。
本发明提供包含对猪精细胞有用的精细l^养基的组合物。通过运动性测 定，并ib t^4页域技^A员来iX^明确地是按照工业定位中的;U^莫AI，通过 母猪产仔率和每窝产仔数，显示出提高了储M子的活力。
为了#^说明，本发明的组* 过以下在^^^晴的猪精细^4页域中 良好的用途^^fiH兑明。下面是通过实施本发明的方法的实施例的方式进行的 描述。那些与^"AX^t樹目关的人员了解制备培养基、^^计^^纖助分析 测定j的和渐进的运动性、^^#^*##^液以^1#^"4^方面的4支术。进一 步的必JM言息通过下列三个实施例给出。
液，养基中组分的^^J^hW^量数的方M示。^^域技#员 能够3S^，本发明的培养基能够以任何体积制备，并JL^发明并不意味着局限 于以-"fH^ 、制备的培养基。进一步的，本发明并不奮M局限于给出的制剂。 其它包^[S可数量的Porex或^f可分离自乳汁或Porex的蛋白，并非,白， 的制剂也可以应用。
实施例1. 猪精"f^辨养絲过将980毫升的水加入到27. 4克葡萄糖、 8克柠^^钠、2.4克EDTA、 1. 2克重碳酸钠、0.4克氯化钾、0. 6克庆大霉素、 9克HEPES和l克Porex的組合中制备。该组*名为Porex稀，养l作 为参考-与市售稀，养勤目比4捐^fi4接受的稀，养基Bel tsvi 1 le解冻液 (BTS )。 BTS培养絲过将980ml水加AJl] 36. 4克葡萄糖、6克柠#^_钠、1. 25 EDTA、 1. 25重碳酸钠、0. 75克氯化钾和0. 6 M大霉素的组合中制备。桥M12头随才;1^#^|性成^/>猪收集。^^Porex稀，养J^BTS^^^"子，并 JL^H^f释后在l、 3、 5、 9天评怙一般运动.'^M^ii^动性。
~^_运动性1^据如下。对BTS来说，在稀释后l、 3、 5、 9天，得到的具有 to的-^^运动性的精细胞的。/。-寿命分别为71. 4、 70. 4、 68. 9、 47. 9。对Porex 稀辦养J^M兌，在稀释后1、 3、 5、 9天，具有^J^动性的精细胞的。/。-寿 ^^分别为85. 0、 82.9、 80. 5和69. 6。
洋斤i^运动性iyt^下。对BTS来i兌，在稀释后l、 3、 5、 9天，具有to的 渐般动性的精细胞的％-寿命分别为42. 3、 37.8、 36.2、 24.3。对Porex^r释 培养JJM兌，在稀释后1、 3、 5、 9天，具有^"渐般动性的精细胞的％-寿 命分别为76. 4、 73.4、 68. 5和57. 5。
实施例2. 该实施例涉及商业AI站进ff^;^t、稀#^舶己，以及在8 个不同养猪农场的Al。猪精"^i^W养^ii过将980毫升的水加入到27. 4克葡 萄糖、8克柠#^钠、2. 4克EDTA、 1. 2克重碳酸钠、0. 4克氯化钾、0. 6克庆 大霉素、9克HEPES和1克乳汁Porex的组合中制备。在4星期时间内(2006. 5 ) >^自5个不同^t (Pietrain， York, Dalpo， Primeur， Hampshire)的28 头性成^>猪收集精子。4狄Porex精^#料养1_###子，并且向890头 #^授精。得到的平均母猪产仔率为92.0%，并且得到的平均每窝产仔^ 13.8。
实施例3. 该实施例涉及商业AI站进^^i糸睛、稀#射己，以及在8 个不同##"^的AI。猪精^##^养基是通过将980毫升的7jc加AJ！) 27. 4 克葡萄糖、8克柠#^钠、2. 4克EDTA、 1. 2克碳^H钠、0. 4克氯化钾、0. 6 克庆大霉素、9克HEPES和1克Porex的组合中制备。在4星期时间内(2006. 6 ) ^MJJ^自5个不同## (Pietrain, York, Dalpo， Primeur， Hampshire)的28 头性成齡猪收集精子。朋Porex稀W养UNW子，并且向930头麟 麟。得到的平均母猪产仔率为91.0%，并且得到的平均每窝产仔IM; 13. 5。
与实施例1相比，实施例2和3为4^贞域才i^A员提供了更多决定性信息， 因为母猪产仔率和每窝产仔^bi猪行业中的经济W:。因为母猪产仔率^窝 产仔数才娥农场管理的不同而变化，比较了相同條的稀,养基。得到的每 窝产仔数比使用如实施例1中描述的标准BTS稀#^养1^斤得到的每窝产仔数 高0. 6。与使用BTS稀^^养勤目比，使用Porex稀，养基而得到的平均母猪产仔率高了 4%。
在上述实施例所描述的工作^^，从2006年7月1日到2007年12月25 日期间，使用实施例2和3中描述的Porex稀，养^iJi行了 80. 000次授精。 得到94. 0%的平均母猪产仔率和14.1的平均每窝产仔数。猪出生成活的数目为 平均13.4。猪出生成活的数目是絲业中最重要的经济指标。在荷兰4^J标准 稀^^养基(BTS )的猪出生成活数目可以从由Agrovision出版的以Pigmanager
软件为基础的数据中获得 (http: 〃丽.agrovision. nl/f iles/ksp20062007website01 pdf )。从2006年 7月1曰到2007年6月30曰期间，得到的母猪产仔率为86%、每窝产仔妙 13.1，并且猪出生成活率为12. 5。 it^明与广泛^^J的BTS相比，Porex稀释 培养基;l^p经济的稀辦养基。
与本发明实施方式一致，我们已纟^^Mit^包含Porex的培:^基中^^释, 能够提高和/或##猪精细胞的活力，因此可以在持久的时期内提高和/或## 精细胞的麟能力。从而，通过"f捐商标名为Porex的乳汁血清蛋白替换BSA 我们已^i见了更经济和M的^NW^^基。
结论
虽然在上面仅仅详细描述了本发明的示范性实施方案，但是^4页域技^A 员#^容易，解，可能进^i午多修改而实质上并^W离本发明的新颖的教导 和优点。因此，如同下文权矛J^求中所定义的那样，所有这类修改桐旨定被包 ^^M^发明的范围之内。
权利要求
1、包含液态猪精细胞稀释培养基的组合物，所述培养基旨在保持和/或提高精细胞的活力，所述组合物包含名为Porex的牛乳蛋白组分，所述Porex的产生基于在此描述的乳清。
2、 权矛]^求1的组杨，其中细M马细胞。
3、 权矛J^^1的组^，其中细 _牛细胞。
4、 权矛J^求1的组^/,其中细^^绵羊细胞。
5、 ；^Uf'J^求1的组杨，其中细^IA细胞。
6、 拟，^"求1的组杨，其中细^_哺乳动物细胞。
7、 包含液态猪精细麟辨养基的组她所述培养基旨在##^/或提 高精细胞的活力，所i^且^;包含分离自牛乳的蛋白， 白(^卜。
8、 |^"求7的組*，其中细^_马细胞。
9、 ^U'漆求7的组杨，其中细^1牛细胞。
10、 权矛漆求7的组^，其中细M绵羊细胞。
11、 权矛J^"求7的组讀，其中细I^A^胞。
12、 权矛]^求7的组*,其中细^1哺乳动物细胞。
13、 包含氣态猪精细麟鰣养基的组她所述培养基旨在##^/錄 高精细胞的活力，所i^且^包含分离自哺乳动物乳汁的蛋白，絲白ft^卜。
14、 权矛J^求13的组^，其中细^1马细胞。
15、 权矛J^"求13的组杨，其中细1^|_牛细胞。
16、 权矛J^求13的组^7，其中细M绵羊细胞。
17、 权矛J^求13的组^，其中细l^l:Aiw胞。
18、 权矛漆求13的组^，其中细l&^:哺乳动物细胞。
19、 包含名为Porex的牛吝'1^白组^组*，所述Porex的产^^于在 述的乳清，所必且綠旨在培养和柳繁殖性猪细戯细麟诸M胚。
20、 权矛]^求19的组擔，其中细^i马细胞。
21、 权矛j^求19的组杨，其中细^1牛细胞。
22、 权矛澳求19的组^/,其中细M绵羊细胞。
23、 权矛]^求19的组杨，其中细J^lAiffl胞。
24、 权矛J^求19的组合物，其中细胞是哺乳动物细胞。
25、 包含分离自牛乳的除了*白"卜的蛋白的组^7，所iil且^/旨在 培养和翻繁殖性猪细贼细鰣诸如猪胚。
26、 W慎求25的组^7，其中细贼马细胞。
27、 权舰求25的组邮，其中细紋牛细胞。
28、 权矛J^求25的组^ ，其中细M绵羊细胞。
29、 权矛J^"求25的组^，其中细I^^Aiw胞。
30、 权禾'J^求25的组^;，其中细^1哺乳动物细胞。
31、 包含分离自哺乳动物乳汁的除了絲白"卜的蛋白的组^7,所iii且 姊旨絲养和細繁殖性猪细贼细麟诸械胚。
32、 权矛J^求31的组^ ，其中细M马细胞。
33、 权矛j^求31的组^，其中细J^1牛细胞。
34、 ^U'J^求31的組^，其中细M绵羊细胞。
35、 ^U'J^求31的组^，其中细^AJw胞。
36、 权矛漆求31的组^;，其中细^_哺乳动物细胞。
全文摘要
本发明公开了来自乳汁的蛋白质组分在猪精子稀释培养基中的应用。包含该蛋白质组分的组合物显示出改善的并且更加经济的特性。本发明主要涉及猪精子的稀释培养基，所述培养基旨在保持和/或改善猪精细胞的活力并且应用于猪的人工授精。然而，可以预料，本发明在其它物种的繁殖技术或方法诸如人工授精和体外受精中将是有用的。
文档编号A01N1/02GK101610669SQ200880001920
公开日2009年12月23日 申请日期2008年1月3日 优先权日2007年1月9日
发明者B·M·范登博格 申请人:Imv技术股份有限公司