一种粪肠球菌琼脂培养基及其应用
【专利说明】
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技术领域
本发明为微生物领域，特别涉及一种粪肠球菌琼脂培养基及其应用。
[0002]
【背景技术】
微生物培养(microculture)是生物培养的中的一种。所培养的微生物主要有病毒、细菌、放线菌、真菌等。微生物培养需要用到培养基，根据微生物的不同种类和生活习性来配制特定的培养基。微生物培养成功的关键在于无菌操作，如果培养器具和培养基不能彻底灭菌、培养的过程中有杂菌污染是很容易失败的。
[0003]肠球菌(Enterococcus)属肠球菌属，是人类和动物肠道正常菌群的一部分，通常在引起腹腔和盆腔感染所分离的混合菌丝中发现，既往认为肠球菌是对人类无害的共栖菌，但近年研究已证实了肠球菌的致病力。在需氧革兰阳性球菌中，它是仅次于葡萄球菌的重要院内感染致病菌，肠球菌亦可引起院外感染。肠球菌不仅可引起尿路感染、皮肤软组织感染，还可引起危及生命的腹腔感染、败血症、心内膜炎和脑膜炎等。
[0004]溶血性链球菌，需氧或兼性厌氧菌，营养要求较高，普通培养基上生长不良，需补充血清、血液、腹水，大多数菌株需核黄素、维生素B6、烟酸等生长因子。最适生长温度为37°C，在20-42°C能生长，最适pH为7.4-7.6。在血清肉汤中易成长链，管底呈絮状或颗粒状沉淀生长。在血平板上形成灰白色、半透明、表面光滑、边缘整齐、直径0.5-0.75mm的细小菌落，不同菌株溶血不一。
[0005]粪肠球菌，根据最新分类原则，粪链球菌又叫粪肠球菌。应用C多糖抗原，根据兰氏(Lancefield)血清学分类,可将链球菌分成许多群。粪链球菌属于D群。D群链球菌分肠球菌和非肠球菌两类。前者包括粪链球菌(S.faecal is)、屎链球菌(S.faecium)和坚忍链球菌(S.durans)，后者有牛链球菌(S.bovis)和马肠链球菌(S.equinus)。
[0006]其营养要求低，在普通营养琼脂上也可生长。能在10°C或45°C pH 9.6或含6.5%NaCl肉汤培养基中生长，并能耐65°C 30分钟。它可利用精氨酸为能源，发酵山梨醇，不发酵阿拉伯糖。在简单的培养基上生长不需叶酸。DNA-DNA杂交结果显示，肠球菌与链球菌属同源程度低，故有学者建议另立肠球菌属，与人类有关者为粪肠球菌(E.faecalis)和屎肠球菌(E.faecium)。
[0007]培养基(Medium)是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料，一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐(包括微量元素)以及维生素和水等。有的培养基还含有抗菌素和色素，用于单种微生物培养和鉴定。培养基由于配制的原料不同，使用要求不同，而贮存保管方面也稍有不同。一般培养基在受热、吸潮后，易被细菌污染或分解变质，因此一般培养基必须防潮、避光、阴凉处保存。对一些需严格灭菌的培养基(如组织培养基)，较长时间的贮存，必须放在3?6°C的冰箱内。由于液体培养基不易长期保管，现在均改制成粉末。
[0008]培养基根据化学分类为天然培养基、组合培养基和半组合培养基；根据物理分类为液体培养基、固定培养基和脱水培养基；根据微生物分类为选择性培养基、鉴别培养基。
【发明内容】
[0009]本发明克服现有技术中的不足，提供一种粪肠球菌琼脂培养基及其应用。
[0010]本发明运用生物化学，微生物学及无机、有机、分析化学和荧光技术的原理，对不同的碳源、氮源、无机盐类、维生素、生长促进剂等诸类营养组分的组合进行筛选，对培养基的PH值、离子强度、氧化-还原电势、表面张力、气体环境等物化因子进行了比较，研究出了本发明的培养基。
[0011]本发明所采用的技术方案为:
一种粪肠球菌琼脂培养基，所述培养基的组分包括23.6g/L肉浸液肉汤、10.0g/L酵母浸粉、1.0g/L乳糖、20g/L麦芽糖、0.45g/L柠檬酸铁铵、0.015g/L溴甲酚紫、0.58g/L叠氮化钠、0.2g/LTTC ,13.0 g/L 琼脂，pH 值为 7.0-7.4。
[0012]在以上方案的基础上，所述的肉浸液肉汤为每升肉浸液肉汤中含有牛肉粉3.0g、氯化钠5.0g、月示胨12.0g、磷酸氢二钾2.0g。
[0013]本发明还公开了一种粪肠球菌琼脂培养基的应用，用于粪肠球菌的选择性分离。
[0014]月示胨和酵母浸粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源；乳糖是大肠菌群可发酵的糖类；叠氮化钠可抑制革兰氏阴性菌；溴甲酚紫和TTC作为指示剂；琼脂是培养基的凝固剂。
[0015]取本品70.0g，加热溶解于1000ml蒸馏水中，煮沸5分钟，冷至50°C左右，倾入无菌平皿，备用。
[0016]本发明的有益效果:
1、培养基组方简单，制备操作方便，成本低，利于推广应用；
2、菌生长迅速，变异率低；
3、便于观察，分析。
[0017]【具体实施方式】实施例1:
一种粪肠球菌琼脂培养基，所述培养基的组分包括23.6g/L肉浸液肉汤、10.0g/L酵母浸粉、1.0g/L乳糖、20g/L麦芽糖、0.45g/L柠檬酸铁铵、0.015g/L溴甲酚紫、0.58g/L叠氮化钠、0.2g/LTTC ,13.0 g/L 琼脂，pH 值为 7.0-7.4。
[0018]所述的肉浸液肉汤为每升肉浸液肉汤中含有牛肉粉3.0g、氯化钠5.0g、月示胨12.0g、磷酸氢二钾2.0g。
[0019]月示胨和酵母浸粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源；乳糖是大肠菌群可发酵的糖类；叠氮化钠可抑制革兰氏阴性菌；溴甲酚紫和TTC作为指示剂；琼脂是培养基的凝固剂。
[0020]取本品70.0g，加热溶解于1000ml蒸馏水中，煮沸5分钟，冷至50°C左右，倾入无菌平皿，备用。
【主权项】
1.一种粪肠球菌琼脂培养基，其特征在于所述培养基的组分包括23.6g/L肉浸液肉汤、10.0g/L酵母浸粉、1.0g/L乳糖、20g/L麦芽糖、0.45g/L柠檬酸铁铵、0.015g/L溴甲酚紫、0.58g/L 叠氮化钠、0.2g/LTTC ,13.0 g/L 琼脂，pH 值为 7.0-7.4。
2.根据权利要求1所述的种粪肠球菌琼脂培养基，其特征在于所述的肉浸液肉汤为每升肉浸液肉汤中含有牛肉粉3.0g、氯化钠5.0g、月示胨12.0g、磷酸氢二钾2.0g。
3.一种根据权利要求1所述的粪肠球菌琼脂培养基的应用，其特征在于用于粪肠球菌的选择性分离。
【专利摘要】本发明为微生物领域，特别涉及一种粪肠球菌琼脂培养基，所述培养基的组分包括23.6g/L肉浸液肉汤、10.0g/L酵母浸粉、1.0g/L乳糖、20g/L麦芽糖、0.45g/L柠檬酸铁铵、0.015g/L溴甲酚紫、0.58g/L叠氮化钠、0.2g/LTTC、13.0g/L琼脂，pH值为7.0-7.4。所述的肉浸液肉汤为每升肉浸液肉汤中含有牛肉粉3.0g、氯化钠5.0g、月示胨12.0g、磷酸氢二钾2.0g。本发明培养基组方简单，制备操作方便，成本低，利于推广应用；菌生长迅速，变异率低；便于观察，分析。
【IPC分类】C12R1-01, C12N1-20
【公开号】CN104651254
【申请号】CN201310599778
【发明人】刘汉斌
【申请人】刘汉斌
【公开日】2015年5月27日
【申请日】2013年11月25日