一种琼脂培养基及其制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种琼脂培养基及其制作方法，主要用于红藻组织培养过程中愈伤组织的诱导，每升PES培养基中添加蔗糖20～40g、琼脂5～10g、抗坏血酸5～10mg、维生素E10～15mg、IAA1～4mg、ZT1～4mg；红藻为石花菜、凝花菜、江蓠、龙须菜、角叉菜、蜈蚣藻中的任意一种；采用先分装琼脂再高压灭菌的方式不但可以避免琼脂受热不均造成糊底的现象发生，也可以避免分装时的二次污染。
【专利说明】一种琼脂培养基及其制作方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种琼脂培养基及其制作方法，尤其是一种用于红藻组织培养过程中诱导愈伤组织形成的琼脂培养基。
【背景技术】
[0002]琼脂也称“琼胶”，又名洋菜、冻粉，燕菜精，洋粉，是从石花菜、江蓠等红藻植物提制的多糖，其主要成分为多聚半乳糖的硫酸脂。琼脂因其有特殊的凝胶性质，已被广泛使用于食品、医药、化工、纺织、国防、科研等领域。琼脂早已被美国食品药物管理条例列为公认安全的产品，获准作为食品添加剂作为专题载入食品化学品药典之中。1973年联合国粮农组织和世界卫生组织评价认为琼脂每人每日每公斤体重允许摄入不加限制，所以琼脂是安全的、不加限制使用的食品添加剂。
[0003]琼脂所具有凝胶化特性不但已被各种食品生产所利用，而且在微生物培养基上也得到了广泛的应用。目前市售的琼脂培养基主要应用于微生物的培养、分离或鉴定，主要是通过加热煮沸分装的方式制备，长时间的加热煮沸过程中琼脂如果搅拌不均匀极容易糊底，并且煮沸后分装的方式也很难避免细菌的污染。
【发明内容】
[0004]针对现有技术存在的缺陷，本发明所要解决的技术问题是提供一种新型的琼脂培养基，主要用于红藻组织培养过程中愈伤组织的诱导，先分装琼脂再高压灭菌的方式不但可以避免琼脂受热不均造成糊底的现象发生，也可以避免分装时的二次污染。
[0005]为了解决上述技术问题，本发明的技术方案如下:一种琼脂培养基，其组成成份及质量数为:每升PES培养基中:蔗糖20~40g、琼脂5~10g、抗坏血酸5~10mg、维生素E10 ~15mg、IAAl ~4mg、ZTl ~4mg。
[0006]优选的，所述的培养基其组成成份及质量数为:每升PES培养基中:蔗糖25g、琼脂6g、抗坏血酸 8mg、维生素 E llmg、IAA 2mg、ZT lmg。
[0007]优选的，所述培养基用于红藻组织培养中愈伤组织的诱导。
[0008]优选的，所述的红藻为石花菜、凝花菜、江蓠、龙须菜、角叉菜、蜈蚣藻中的任意一种。
[0009]本发明还提供一种琼脂培养基的制作方法，包括如下步骤:将25g蔗糖、Smg抗坏血酸、Ilmg维生素E、2mg IAA和ImgZT溶解于IL PES培养基中，将其pH调为7.2~7.8、盐度调为28~30后分装于数个三口锥形瓶中，将6g琼脂平均添加到每一个锥形瓶中，封口膜封口后于高压锅中高温高压灭菌20min，将锥形瓶取出置于平面冷却至琼脂凝固即可。
[0010]本发明所述的PES培养液主要用于红藻培养，其中添加的IAA和ZT配合使用，可以有效的促进红藻外植体脱分化形成愈伤组织。
[0011]本发明所述的制备方法，采用先分装琼脂再高压灭菌的方式，高压灭菌锅可以快速的升温升压从而可以避免琼脂受热不均造成糊底的现象发生，也可以避免分装时的二次污染。
【具体实施方式】
[0012]以下通过实施例进一步阐述本发明的有益效果:
实施例1:
一种琼脂培养基，其组成成份及质量数为:每升PES培养基中:蔗糖25g、琼脂6g、抗坏血酸 8mg、维生素 E llmg、IAA 2mg、ZT lmg。
[0013]将蔗糖、抗坏血酸、维生素E、IAA和ZT溶解于IL PES培养基中，将其pH调为7.2~7.8、盐度调为28~30后分装于20个三口锥形瓶中，将6g琼脂平均添加到每一个锥形瓶中，每个锥形瓶中添加0.3g琼脂，封口膜封口后于高压锅中高温高压灭菌20min，将锥形瓶取出置于平面冷却至琼脂凝固即可。 [0014]实施例2:
一种琼脂培养基，其组成成份及质量数为:每升PES培养基中:蔗糖20g、琼脂5g、抗坏血酸 5mg、维生素 E IOmg、IAA lmg、ZT lmg。
[0015]将蔗糖、抗坏血酸、维生素E、IAA和ZT溶解于IL PES培养基中，将其pH调为7.2~7.8、盐度调为28~30后分装于20个三口锥形瓶中，将5g琼脂平均添加到每一个锥形瓶中，每个锥形瓶中添加0.25g琼脂，封口膜封口后于高压锅中高温高压灭菌20min，将锥形瓶取出置于平面冷却至琼脂凝固即可。
[0016]实施例3:
一种琼脂培养基，其组成成份及质量数为:每升PES培养基中:蔗糖40g、琼脂10g、抗坏血酸 8mg、维生素 E 15mg、IAA 4mg、ZT 4mg。
[0017]将蔗糖、抗坏血酸、维生素E、IAA和ZT溶解于IL PES培养基中，将其pH调为
7.2~7.8、盐度调为28~30后分装于20个三口锥形瓶中，将IOg琼脂平均添加到每一个锥形瓶中，每个锥形瓶中添加0.5g琼脂，封口膜封口后于高压锅中高温高压灭菌20min，将锥形瓶取出置于平面冷却至琼脂凝固即可。
[0018]实施例4:
一种琼脂培养基，其组成成份及质量数为:每升PES培养基中:蔗糖30g、琼脂7g、抗坏血酸 6mg、维生素 E 12mg、IAA 3mg、ZT 2mg。
[0019]将蔗糖、抗坏血酸、维生素E、IAA和ZT溶解于IL PES培养基中，将其pH调为
7.2~7.8、盐度调为28~30后分装于20个三口锥形瓶中，将7g琼脂平均添加到每一个锥形瓶中，每个锥形瓶中添加0.35g琼脂，封口膜封口后于高压锅中高温高压灭菌20min，将锥形瓶取出置于平面冷却至琼脂凝固即。
[0020]检测愈伤组织诱导效率的实验:
(1)配置普通培养基:将ILPES培养液中添加7g琼脂，将其pH调为7.2~7.8、盐度调为28~30后加热至煮沸，煮沸过程中不断搅拌避免琼脂糊底，加热煮沸后带琼脂完全溶解后，于无菌操作台中分装于20个锥形瓶中，封口膜封口后待琼脂冷却；
(2)接种:将石花菜、凝花菜、江蓠、龙须菜、角叉菜、蜈蚣藻的叶状体清洗干净后，于2%浓度的碘化钾溶液中浸泡2-5min后清洗干净，将外植体切成0.2-0.5cm的切段，接种于普通培养基和实施例1-4所得的培养基中，每个培养基接种5块，每个品种每种培养基接种100块，于温度18~20°C、光强1000~3000LX、光周期8~12h下培养至愈伤组织形成；
(3)实验结果如表1所示:
表1:不同种类培养基对红藻愈伤组织诱导率的影响
【权利要求】
1.一种琼脂培养基，其特征在于，其组成成份及质量数为:每升PES培养基中:蔗糖20~40g、琼脂5~10g、抗坏血酸5~10mg、维生素E 10~15mg、IAAl~4mg、ZTl~4mg。
2.根据权利要求1所述的琼脂培养基，其特征在于，其组成成份及质量数为:每升PES培养基中:鹿糖25g、琼脂6g、抗坏血酸8mg、维生素E Ilmg、IAA 2mg、ZT lmg。
3.根据权利要求1所述的琼脂培养基，其特征在于，所述培养基用于红藻组织培养中愈伤组织的诱导。
4.据权利要求1或权利要求3所述的琼脂培养基，其特征在于，所述的红藻为石花菜、凝花菜、江蓠、龙须菜、角叉菜、蜈蚣藻中的任意一种。
5.一种琼脂培养基的制作方法，其特征在于，包括如下步骤:将25g蔗糖、Smg抗坏血酸、Ilmg维生素E、2mg IAA和lmg ZT溶解于IL PES培养基中，将其pH调为7.2~7.8、盐度调为28~30后分装于数个三口锥形瓶中，将6g琼脂平均添加到每一个锥形瓶中，封口膜封口后于高压锅中高温高压灭菌 20min，将锥形瓶取出置于平面冷却至琼脂凝固即可。
【文档编号】C12N5/04GK103667172SQ201310555416
【公开日】2014年3月26日 申请日期:2013年11月11日 优先权日:2013年11月11日
【发明者】苏建丽 申请人:青岛文创科技有限公司