高产泌乳奶牛蛋白饲料及其制备方法

专利名称：：高产泌乳奶牛蛋白饲料及其制备方法
技术领域：
：本发明涉及一种动物饲料，尤其涉及一种高产泌乳奶牛的蛋白饲料，本发明还涉及该蛋白飼料的制备方法，属于奶牛飼料领域。
背景技术：
：从改善饲料加工工艺角度研究高能高蛋白植物性饲料原料祠喂高产奶牛对牛乳脂中多不饱和脂肪酸(PolyunsaturatedFattyAcids,简称PUFAs)含量的影响是未来奶牛营养和乳品科学研究的重点。PUFAs是一类重要的营养物质，n-3系列和n-6系列PUFAs在反刍动物体内发挥着重要的作用，包括脂类代谢、心血管功能调节、免疫调节、对骨质形成的调控等各个方面。研究表明，反刍动物体内瘤胃孩i生物在氢化PUFAs过程中形成的重要中间产物共轭亚油酸(ConjugatedLinoleicAcids,简称CLA)具有抗击动月永粥样石更化、抗癌、降低血液和肝脏中胆固醇含量、抑制脂肪沉积等多种生物学活性；可提高飼料转化率，提高动物生产性能，有效改善乳品品质。因此乳脂中PUFAs的含量及结构尤其CLA含量是衡量奶牛乳品品质的重要指标。全脂大豆富含多不饱和脂肪酸，是n-3系列和n-6系列PUFAs最经济的来源之一。生大豆内由于含有胰蛋白酶抑制因子、尿素酶、血球凝集素等不利于动物消化的抗营养因子，不适宜直接飼喂反刍家畜。膨化全脂大豆(ExtrudedFull-fatSoybean,简称EFFSB)是目前最灵活、最普遍、经济上最有吸引力的热处理技术之一，因此，对稚龄的反刍动物和泌乳前期母牛，是一种既经济又方^更的营养来源。动物养殖业被认为是环境污染的重要来源之一。利用血清或乳中尿素氮含量以及乳蛋白含量评估奶牛群体能量和蛋白质:f聂入状况在欧洲(Nagel，1994)、美国(Hutjens和Barmore，1995)、日本(0ugi,1994)和台湾省(H丽ang等，2000)进行了大量研究和应用。蛋白饲料是所有日粮组成中成本最高的，在基础曰粮中添加适量的膨化全脂大豆，既可以避免蛋白质饲喂过量，减少氮的排放，又能最大限度的增加氮的利用效率，在降低饲料成本的同时，还能促进奶牛的生长，提高牛奶的品质。
发明内容本发明以膨化全脂大豆为原料进行奶牛补飼试验，通过测定乳脂中PUFAs的相对含量，摸索出奶牛基础日粮中膨化全脂大豆最适添加量，进而为改善曰粮中PUFAs的组成，为通过营养调控提高乳产品质量提供科学依据。本发明的目的提供一种高产泌乳奶牛蛋白饲料，按干物质计算，该奶牛蛋白饲料含有7.5-22.5wt。/。的膨化全脂大豆(EFFSB),余量为奶牛基础日粮(TMR);优选的，该奶牛蛋白詞料含有15wt。/。的膨化全脂大豆(EFFSB)，余量为奶牛基础曰粮(TMR);其中，所述的基础日4泉可以由精料和粗料4安照6.5:3.5的重量比例所组成；所述的精料可以由玉米、麸皮、棉粕等组成；所述的粗料可以由玉米秸秆、东北羊草、苜蓿草或青贮等组成。将膨化全脂大豆掺入到精料中与粗料混合均匀即得本发明的奶牛蛋白饲料；本发明首先通过试验发现添加膨化全脂大豆能够明显改善牛乳中长链不饱和脂肪酸的含量，能够显著提高奶牛产奶量及乳脂率、乳蛋白。这与膨化全脂大豆富含不饱和脂肪酸有关，同时也说明调整日粮结构能够通过PUFAs含量改善牛乳品质。添加膨化全脂大豆能够提高多不饱和脂肪酸C18:2中CLA的含量，即能够提高C18:l在A9脱氬酶作用下的转化作用，但A9脱氬酶对C18:1的转化作用有一定的范围，膨化全脂大豆对改善牛乳品质特别提高功能性CLA含量有一定的添加剂量范围，也说明膨化全脂大豆对牛乳品质的改善必须在一定的添加比例，不是添加越多越好。本发明在奶牛正常的饲养条件下(TMR)额外补饲膨化全脂大豆，结果发现添加膨化全脂大豆对奶牛增产具有明显的功效，-f旦膨化全脂大豆达到一定的添加量后对奶牛的增产效果有限甚至有下降的趋势，这可能与膨化全脂大豆除了富含脂肪酸外还具有优质的蛋白质有关，过量添加会导致营养过剩。添加膨化全脂大豆能够明显提高乳脂率，这可能与膨化全脂大豆富含脂肪酸有关。与对照组(不添加膨化全脂大豆)相比，奶牛蛋白饲料含有7.5-22.5wt。/。的膨化全脂大豆能够明显提高奶牛乳脂率，达到极显著水平(P<0.01)，但膨化大豆添加量超过22.5%时，乳脂率明显下降，这可能膨化全脂大豆添加量过高，因为膨化全脂大豆富含脂肪酸，过多的脂肪酸影响了瘤胃的纤维消化，导致瘤胃显微消化率下降，导致乳脂率下降。大豆经过膨化明显改善了脂肪酸的结构与利用效率。与乳脂率相比较，乳蛋白呈现逐步增加的趋势，奶牛蛋白饲料含有15wt%的膨化全脂大豆时与对照组相比，乳蛋白差异显著(P<0.05),但随添加量的增加，乳蛋白保持稳定，差异不显著。在添加不同比例全脂膨化大豆的处理组间，对中链饱和脂肪酸分析表明，添加15°/。的膨化全脂大豆可显著降低乳脂中C14:Q、C16:G的相对含量。对长链不饱和脂肪酸C18:ln9、C18:2n9分析表明，在全脂膨化大豆添加量为15%的水平下其相对含量最高。添加15%的膨化全脂大豆可显著增加乳脂中C18:ln9的相对含量。添加15%与22.55%的膨化全脂大豆相比，虽然二者之间没有显著差异，但15%水平下的C18:2n9相对含量较高，22.5°/。水平下略有下降。试验结果表明，添加7.5%、15%、22.5°/。的膨化全脂大豆的不同处理组间，添加15%的膨化全脂大豆饲喂高产泌乳奶牛最佳，而添加超过22.5%在一定程度上造成了饲料的浪费。从脂肪酸含量变化的角度看，高产泌乳奶牛日粮中添加15%膨化全脂大豆处理组效果最好。从奶牛产奶性能分析可以看出，奶牛补飼膨化全脂大豆，可以显著提高奶牛产奶量、乳脂与乳蛋白，差异达到极显著与显著水平。图1CLA含量在不同膨化添加水平下变化曲线图。图2不同试验阶段奶牛MUN变化规律。图3MUN与BUN相关关系曲线。具体实施例方式下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。试验例1l试验材料与方法1.1材料1.1.1试验材料干法膨化全脂大豆购自北京宏富天绿高科技发展中心，干法膨化全脂大豆粗蛋白含量36-38%,粗脂肪含量17-19%。1.1.2试验动物及饲养管理选#^北京南邵京北奶牛场胎次、体重相近，产犊50天左右的12头泌乳高峰期中国荷斯坦奶牛，随机分为四组，每组3头。试验奶牛保持牛场正常的飼养管理条件，每天饲喂三次饲料，挤三次奶。1.1.3奶牛基础日粮(TMR)的组成见表1。日粮一次性备齐，使得各种成分水平一致。表l奶牛TMR基础日粮配方及营养水平项目配比(％)营养水平It.emPercentageNutrientlevel精料192DM玉米Gorn125CP^禾白Soybeanmeal25ASH棉粕30ADF麸皮Wheatbran50NDF预混料Premix2.5磷酸氢钙CaHP046.25P粗料415青贮料Silage180酒糟150棉籽Cotton25食盐Salt3.751.2试验设计采用4x4拉丁方设计，以消除动物不同个体之间的差异，保证结果的准确性。4种处理如下对照组饲p畏基础日4泉；处理1组基础日粮+膨化全脂大豆(_^出日粮与膨化全脂大豆的重量比例为92.5:7.5);处理2组基础日粮+膨化全脂大豆(基础日粮与膨化全脂大豆的重量比例为85:15);处理3组基础日粮+膨化全脂大豆(基础日粮与膨化全脂大豆的重量比例为77.5:22.5)。每天分3次送入T魔搅拌车中，现拌现喂。试验共分四期进行，每个试验期持续3周，前2周为预飼期。每期试验第三周1、3、5、7天耳又奶样50ml，第七天取血样。在各试一验期的D15、D17、D19、D21记录产奶量并:f又奶样进行DHI测定。奶样及血样用便携式冰箱4。C条件下运输保存。置于-20。C冷冻保存并用GC/MS测定脂肪酸及CLA。1.3仪器及试剂美国Agilent公司气相色i普6890N，美国Agilent公司质谱HP5973N,毛细管色镨柱HP-5(30mxO.25mmxO.25iam)，摇床，电热恒温鼓风千燥箱，冰箱，车载便携式水箱。试剂包括正己烷、甲醇、氯仿、无水乙醇、无水硫酸钠、氢氧化钠等均为分析纯；高纯氮(99.999%);高纯氦气(99.999°/。)。1.4分析指标及测定方法1.4.1奶样中脂肪酸的提取取2mL奶样，加入正己烷2mL,两次萃取收集有机相(如有泡沫可加入数滴无水乙醇消泡)，再加入2mL0.5mol/LKOH-甲醇溶液，于恒温振荡摇床50。C摇30min。冷却后，静置分层，收集正己烷层，加入干燥剂无水硫酸钠，水箱冷8藏静置12小时以上后，过0.45um微孔滤膜进行过滤，并取1nL注入气相色谱-质谱联用仪(Gaschromatography-Massspectrometer,GC-MS)进行GC/MS分析。1.4.2色谱条件釆用程序升温，HP-5毛细管色谱柱30mx0.25mmx0.25|um,载气为高纯氦气(99.999%),氦气流速为1.GmL/min。进样口温度为25(TC，起始柱温为150°C，保持lmin,以15。C/min升温至200°C，以2。C/min升温至250°C,保持5min。共需34.33min。1.4.3质谱条件釆用电子轰击方式或化学电离方式进行离子化，El电离能量为70eV,离子源为250,四极杆温度150。C,电压为1576V,质量扫描范围10-650m/z。1.4.4定性和定量以PUFAs及共轭亚油酸甲酯标样的保留时间为依据，结合质镨数据库和有机物质谱图库对共轭亚油酸和其他脂肪酸进行定性鉴别。以面积归一化法计算各脂肪酸的相对含量。1.5数据处理及统计分析数据采用MicrosoftExcel2000软件初步整理，用SASV9.0软件进行方差统计分析及相关性分析。2试验结果与分析2.1奶中PUFAs及CLA含量及多重比较结果见表2:表2奶中PUt'As及CLA含量及多重比较结果<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>处理3组960.47o/oab9.46%b0,98%a28.52%b20.32%a24.04%^2.54%b0.51%aSEM5.53E-060.0004996.76E-060.0016370.0009170.0017820.0003391.13E-06注A,B，C:P<0.01a,b,c:P<0.05Note:A，B,C:P<0.01a，b，c:P<0.05乂人表2中可以看出，在不同膨化全脂大豆添加水平下，C14:lnll在对照组组与处理l组见差异不显著，而当添加量达到15%时，含量明显下降，达到显著水平，^旦添加量达到22.5%时，含量又明显增加并达到显著水平。C14:lnl1含量的增加与某些疾病的发生有关，添加膨化全脂大豆能够明显改善C14:lnll的水平，^l必须在一定的添加范围内，添加量高或^[氐均会影响C14:lnll水平。随膨化全脂大豆添加量的增加，C14:O含量呈明显下降的趋势，当添加量达到15%时添加量下降达到显著水平，全脂大豆添加量继续增加，差异不显著，说明添加膨化全脂大豆能够明显减低C14:0水平，但含量继续增加，含量有增长的趋势，但差异不显著。不同添加水平下，C16:l含量不受影响，说明C16:1不受日粮改变的影响，在牛奶生产中比较稳定。C16:O含量在添加膨化全脂大豆15%时，水平最低并于其他添加组差异均达到显著水平，与对照组相比，分别下降近5.29%、12.42%和8.69%,C16:0与某些疾病的发生有关,添加15%膨化全脂大豆达到明显减低C16:0的作用。C18:G与C16:1表现同样的变化趋势，即含量不受日粮变化的影响。在不同的膨化全脂大豆水平添加水平下，在膨化全脂大豆添加量达到15°/以前，C18:1C9呈现极显著的差异，与对照组相比，C18:ln9的相对含量分别增加了6.47°/、12.22%和4.46%,说明日粮中添加膨化全脂大豆能够明显提高牛乳中不饱和脂肪酸的水平，这与大豆富含亚油酸有关，但当添加量达到15%时，差异不显著，说明添加量达到一定水平即可改善牛乳品质，过量添加对改善牛乳品质无益。C18:2C9呈现与C18:1C9同样的变化趋势，随膨化全脂大豆添加量的增加，C18:2C9含量增加，与对照组相比，C18:2n9的相对含量可分别增加了9.92%、22.53%和18.11%,达到15%时，差异显著，^f旦继续增加，差异不显著。CLA含量随膨化全脂大豆添加量的增加而增加，当添加量达到7.5%时与对照组相比即达到显著水平，但继续增加，差异不显著，CLA含量变化曲线图见图1。本试验结果表明，添加膨化全脂大豆能够明显改善牛乳中长链不饱和脂肪酸的含量，这与膨化全脂大豆富含不饱和脂肪酸有关，同时也说明调整日粮结构能够通过PUFAs含量改善牛乳品质，本试^r结果也说明膨化全脂大豆对牛乳品质的改善必须在一定的添加比例，不是添加越多越好。2.2血中PUFAs及CLA含量及多重比较结果见表3:表3:PUFAs及CLA含量及多重比较结果<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>乂人表3中可以看出，血液中脂肪酸含量除CLA含量外，CI6:0、C18:2n9等长链脂肪酸含量稳定，说明血液循环系统具备非常稳定的自我调节功能，改变日粮结构对血液脂肪酸的组成没有显著影响。但CLA含量在各处理组与对照组之间存在差异，当膨化全脂大豆添加量低于7.5%时，血液中CLA含量差异不显著，当膨化全脂大豆添加量超过7.5%时，CLA含量明显增加，与对照组及处理l组相比，含量分别增加50.56°/、30.63%,差异显著，^旦当添加量达到22.5°/时，CLA含量明显下降达21.29%,差异达到显著水平。本试验表明添加膨化全脂大豆能够提高多不饱和脂肪酸C18:2中CLA的含量，即能够提高C18:1在A9脱氢酶作用下的转化作用，但A9脱氢酶对C18:1的转化作用有一定的范围，膨化全脂大豆对改善牛乳品质特别提高功能性CLA含量有一定的添加剂量范围。3.3添加膨化全脂大豆对奶牛产奶量及乳品质的影响见表4<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>根据奶牛生产性能测定(DHI)。从表3可以看出，添加膨化全脂大豆可以明显提高奶牛产奶量，与对照组相比，处理1组、处理2组和处理3组的产奶量分别提高产奶量1.68kg、2.83kg、2.74kg，差异显著(P<0.05)。Rakess等(1""和Schingoethe(1979)报道，经热处理的大豆饲喂奶牛，能提高奶产量和FCM奶产量。但处理2组和处理3组对增加产奶量差异不显著，甚至有下降的趋势。本试验是在奶牛正常的饲养条件下(TMR)额外补饲膨化全脂大豆，说明添加膨化全脂大豆对奶牛增产具有明显的功效，但膨化全脂大豆达到一定的添加量后对奶牛的增产效果有限甚至有下降的趋势，这可能与膨化全脂大豆除了富含脂肪酸外，还具有优质的蛋白质，过量添加导致营养过剩。添加膨化全脂大豆能够明显提高乳脂率，这可能与膨化全脂大豆富含脂肪酸有关。与对照组相比，处理1组和处理2组能够明显提高乳脂率，达到极显著水平(P<0.01)，但膨化大豆添加量达到22.5%时，乳脂率明显下降，这可能膨化全脂大豆添加量过高，因为膨化全脂大豆富含脂肪酸，过多的脂肪酸影响了瘤胃的纤维消化，导致瘤胃显微消化率下降，导致乳脂率下降。大豆经过膨化明显改善了脂肪酸的结构与利用效率。与乳脂率相比较，乳蛋白呈现逐步增加的趋势，添加1%时与对照组相比，乳蛋白差异显著(P<0.05)，但随添加量的增加，乳蛋白保持稳定，差异不显著。3试^睑结论3.1不同比例膨化全脂大豆对高产泌乳奶牛乳脂中不饱和脂肪酸含量影响添加膨化全脂大豆可显著提高牛乳脂中PUFAs的含量，饲喂膨化全脂大豆能够显著提高奶牛产奶量及乳脂率本试验研究结果显示日粮中添加不同比例的膨化大豆对饱和脂肪酸的降低较明显，且C14:0和C16:0的相对含量与对照组中相比差异显著，C18:ln9、C18:2n9的含量也呈显著性地增加，试验结果显示长链脂肪酸含量的增加可抑制乳腺中中短链脂肪酸的从头合成。与对照组相比，添加膨化全脂大豆的处理组中，长链不饱和脂肪酸(C18:ln9,C18:2n9)的含量增加。牛乳中从C4:0到C14:0的所有脂肪酸和大约50%的C16:0都是由乳腺从头合成的。膨化全脂大豆的脂肪含量为17%-19%，其含有丰富的必需脂肪酸、亚麻仁酸、苏子油酸及丰富的卵磷脂等。在乳腺细胞中，外源性的脂肪酸即日粮中添加的脂肪酸与从头合成的短链脂肪酸在脂化过程中发生相互竟争，外源性的脂肪酸可使产脂酶发生负反馈作用，抑制了脂肪酸的从头合成，从而降低了乳脂中短链脂肪酸的含量。添加的C18:ln9则优先进入乳脂中甘油三酯的sn-2位，并消耗了C16:0,有效地降低了C16:0的含量并增加了C18:1n9的含量。日粮中添加EFFSB可改变瘤胃微生物的发酵，减少乙酸的生成，从而抑制了短链脂肪酸的生成。3.2膨化全脂大豆最佳用量分析在添加不同比例全脂膨化大豆的处理组间，对中链饱和脂肪酸分析表明，添加15%的膨化全脂大豆可显著降低乳脂中C14:0、C16:0的相对含量。对长链不饱和脂肪酸C18:ln9、C18:2n9分析表明，在添加量为15°/的水平下其相对含量最高。添加15%的膨化全脂大豆可显著增加乳脂中C18:ln9的相对含量。添加1/。与22.5%的膨化全脂大豆相比，虽然二者之间没有显著差异，但15%添加水平下的C18:2n9相对含量较高，22.5%水平下略有下降。试验结果表明，添加7.5%、15°/"22.5%的膨化全脂大豆的不同处理组间，添加15。/。的膨化全脂大豆饲喂高产泌乳奶牛最佳，而添加22.5%在一定程度上造成了饲料的浪费。从脂肪酸含量变化的角度看，高产泌乳奶牛日粮中添力。15%膨化全脂大豆处理組效果最好。从奶牛产奶性能分析可以看出，奶牛补饲膨化全脂大豆，可以显著提高奶牛产奶量、乳脂与乳蛋白，差异达到极显著与显著水平。3,3膨化全脂大豆对PUFAs转化CLA的影响CLA晃义刍动物体内瘤胃微生物在氢化PUFAs过程中形成的中间产物。日并良中添加膨化全脂大豆后降低了反刍动物瘤胃微生物的加氢作用，从而使乳脂中PUFAs的含量明显增加。本试验结果也显示添加EFFSB降低了乳脂中从头合成的脂肪酸含量，其原因在于大豆油籽中的PUFAs影响瘤胃发酵模型，降低了乙酸和丙酸之比。反刍动物瘤胃亚油酸的加氢作用增加了乳脂中CLA的含量(McGuireeta1.，1996),其他脂肪酸可促进CLA的生成，而且乳脂中trans-11C18:1与CLA之间存在着;f艮强的线性关系(R2=0.664,P<0.05)。由此可推断出，PUFAs含量的增加可促进CLA含量的增加。添加EFFSB降低了乳脂中易引起高胆固醇疾病的饱和脂肪酸含量，增加了CLA等有益脂肪酸的含量，改变了乳脂中的不饱和与饱和脂肪酸以及多不饱和与饱和脂肪酸相互之间的比值，且均是向着有利于人类健康的脂肪酸之比靠近。试马全例21材料与方法1.1材料1.1.1试验材料膨化全脂大豆由北京农学院饲料研究所提供，营养成分见表5。1.1.2试验动物与分组试验选用北京昌平南邵京北奶牛场12头基本条件相同的处于泌乳高峰期(泌乳50天)的中国荷斯坦奶牛，随机分成四个处理，每个处理3个重复。试验奶牛保持牛场正常的伺养管理条件，每天喂三次料，挤三次奶。1.1.3试-险日4泉与处理试验前测定奶牛全混日粮营养成分，根据奶牛泌乳高峰期营养需要特点并参考服C(2004)奶牛营养需要推荐量确定膨化全脂大豆的添加量。在基础日粮(TMR)中加入分别加入4种不同添加量的膨化全脂大豆，营养成分见表5。4种不同的添加量如下对照组饲喂基础日粮+膨化全脂大豆0kg;试验1组基础日粮+膨化全脂大豆(基础日粮与膨化全脂大豆的重量比例为92.5:7.5);试验2组基础日粮+膨化全脂大豆(基础日粮与膨化全脂大豆的重量比例为85:15);试验3组基础日粮+膨化全脂大豆(基础日粮与膨化全脂大豆的重量比例为77.5:22.5)。每日铜喂3次，膨化全脂大豆添加量平均分配。表5膨化全脂大豆菅养成分(单位g/kg、teal/kg)可消化蛋白粗脂肪粗纤维灰分钙磷有效磷赖氨酸蛋氨酸水分粗蛋白代谢能4270表6奶牛TMR基础日粮配方及T营养水平％项目配比(%)营养水平ItemPercentageNutrientlevel精料192DM玉米Corn125CPS禾白Soybeanmsal25ASH棉粕30ADF麸皮Wheatbran50NDF预混料Premix2.5Ca磷酸氢钙CaHP046.25P粗料415青贮料Silage180酒糟150棉籽Cotton25食盐Salt3.751.1.4试4企时间自2006年2月22日至5月25日止1.1.5试验主要仪器设备奶样提取及储运设备(便携式冰桶4。C条件下保存)；血样提取及储运设备(-20。C冰箱、3000xg离心机、286IU肝素抗;疑)。岛津半自动凯氏定氮仪；日立7020生化分析仪；离心机；超声波振荡仪；电热恒温鼓风干燥箱；车载水箱(4。C);冰拒(-2(TC~4°C)。分析天平(千分精度)；消煮设备装置(半自动凯氏定氮仪)；消煮炉；酸式滴定管10,25ml;凯式烧弁瓦250ml;容量并瓦100ml;锥形并瓦150，250ml;移液管2,5，10ml。1.1.6试^r所用试剂98°/。浓度浓硫酸；催化剂(无水CuS04);盐酸标准液(0.00999mol/L);硼酸标准液(0.lmol/L);沸石。1.2方法1.2.1试验设计本试验釆用4x4复合拉丁方设计方法，试验共分4期，每期21天，前14天为预试，在每个试验期中，每组牛饲喂相同的基础日粮，并记录奶牛编号，分娩日期，305天产奶量，乳脂率，蛋白率以及胎次等。1.2.2样品采集奶样采集每个试验期第3周第1、3、5、7天的奶样，每份奶样50ml。奶样为一天三次取奶的平均混合样。每次奶样在4。C条件下保存及运输至实验室。经凯氏定氮后得出乳内尿素氮含量及全氮比例。血样于每个试验期第3周第7天挤奶后立即从股动脉取血10ml，把血样i文入内含286IU肝素(用100jul生理盐水溶解)的速凝管中，以4000xg离心25min获得血清。将血清保存在-20。C水箱中，作BUN分析时再取出。1.2.3测定指标MUNBUN1.2.4测定方法1.2,4.1MUN的测定奶样选用凯氏定氮法测奶中全氮，分析仪器为北京农学院中心试验室岛津半自动凯氏定氮仪。凯氏定氮法包含步骤①称重以5ml移液管取3ml奶样于分析天平(千分精度)上称重，并记录数据。②消化取样后(3ml并取对照组)，于定氮管中加入催化剂(无水CuS(U、10ml浓硫酸(浓度98%)与沸石后，上16孔消煮炉进行消煮，经2~3小时逐渐增温至420。C,煮至绿色透明。③定容把消煮后溶液经23次润洗，连洗液一起移入100ml容量瓶，待降至室温，开始定容。④定氮取1Qml溶液至定氮管，于锥形并瓦中加10ml硼酸标准液，经半自动凯氏定氮仪处理后，对锥形瓶内试剂，以盐酸标准液滴定，记录数据。⑤数据统计及分析1.2.4.2BUN的测定血样选用两点速率法测定，分析仪器为日立7020生化分析仪。上才几前处理①离心将速凝管放入离心机中离心(4000xg;25min),分理出血清、胶原纤维、血沉三层。②取样取l~2ml血清，移入微量试盒中，登记好编号，放入冰箱保存，准备上机。③上机并记录数据结果1.3数据处理所得数据通过SPSS13.Q统计分析软件，经one-way-AN0VA法进行方差分析，并以LSD法检测各处理平均数间的差异显著性，差异显著则进行多重比较，若P〈0.01(差异极显著)，P<0.05(差异显著)时，则差异显著继续多重比较，并列出关系图。1.3.1试验计算公式BUN=MUN+UN+C(BUN——血中尿素氮MUN——乳中尿素氮UN——尿氮C——体循环未代谢尿素氮)奶牛氮利用率二MUN/BUNx100%N(%)=[(V-V0)*0.014]/W*6.25MUN=N*m/v*2.3077膨化全脂大豆添加比率=膨化全脂大豆添加量/日采食量(V——奶样定氮所用盐酸体积；V。——空白样定氮量；W——奶样重；m/v——奶样密度；N—一奶中全氮百分含量)；2试验结果与分析2.1膨化全脂大豆对乳中尿素氮(MUN)含量的影响膨化全脂大豆不同添加水平对乳中尿素氮的影响及变化规律见图2。奶牛小肠中吸收的蛋白质数量和质量直接影响奶的生产(Huhtanen，1998)，但过量飼喂蛋白质会增加环境中氮的排放量(Castillo等，2000;FrankandSwensson,2002),影响繁殖性能(Shingfield等，1999)和生产性能(陆静，2001),并且增加饲料成本。血尿素氮(BUN)和乳尿素氮(MUN)浓度都可作为奶牛蛋白质代谢和才聂入的指示指标(01tner等，1983;Roseler等，1993)。相比4交而言MUN的测定采样较为方便。图2分析可发现，对照组MUN含量随泌乳期的延长呈直线下降的趋势，说明在泌乳高峰期，奶牛对氮的需求量增大导致MUN的生成量下降，到泌乳第100天即泌乳高峰期即将结束时，M丽含量逐渐恢复正常水平。与对照组相比，试验组的MUN含量的下降趋势明显减緩，试验1组与试验3组呈现相似的变化规律，但试验2组的MUN含量与对照组的变化趋势相反，在试验第三期，试验2组MUN的含量最大，然后逐渐下降。在等能状况下，奶牛蛋白质摄入量与MUN、BUN—般呈正相关(Hof等，1997)，乳尿素氮含量反映日粮蛋白质的摄入的平衡状况(Sato等1998;Hwang等2000)。本试验表明，与对照组比较，添加膨化全脂大豆明显提高乳尿素氮的水平，其中15%添加组对乳尿素氮的影响显著。但试验3组的MUN含量曲线规律与试验l类似，说明试验3组蛋白质含量显著高于奶牛的生产需要，大量的尿素经过再循环途径从尿素中排出，造成蛋白质浪费。由试验结果可见，膨化全脂大豆添加水平与MUN呈正弦曲线关系，拐点在膨化全脂大豆添加量15%。说明试验2组的效果优于试验1组、试验3组及对照组，同时也说明膨化全脂大豆对奶牛MUN的影响有一定的变化规律，膨化全脂大豆添加过量将造成蛋白质的浪费。本试验结果表明膨化全脂大豆15°/。添加量较合适。2.1.1各膨化全脂大豆添加组间MUN值的多重比较，如表7各组间MUN值多重比较。表7不同添加水平下的组间MUN多重比较表(LSD)不同添加水平平均数平均数一2.61平均数一2.62平均数一2.6415%2.690.08**0.007*0.00522.5%2.640.03*0.0027.5%2.620.01对照组(0)2.61注在差数的右上方标表示差异极显著(P<0.01)，在差数的右上方标"*"表示差异显著(P<0.05)，未标记表示差异不显著(P〉0.05)。经过方差分析表明，试验结束时不同水平组间差异显著，经过多重比较处理表明，试验2组祠养奶牛MUN值极显著高于对照组(P<0.01)，显著高于试验3组(P<0.05),与试验1组差异显著(P<0.05);试验3組詞养奶牛MUN值显著高于对照组(P<0.05),与试验1组差异显著；试验1组与对照组差异不显著(P>0.05)。3.1.2各泌乳阶段MUN值的多重比较，如表8表8各泌乳阶段MUN值的多重比较(LSD)组别平均数平均数-25.4平均数-25.8平均数-26.4113d27.117**1.3*0.792d26.41.00.671d25.80.4对照组(50d)25.4注在差数的右上方标表示差异极显著(P<0.01),在差数的右上方标表示差异显著(P<0.05),未标记表示差异不显著(P>0.05)。经过方差分析表明，不同泌乳阶段MUN各组间差异显著。经过多重比较处理表明，泌乳期113d时奶牛的MUN差异极显著于50d(对照组)，并显著于71d时，与92d的差异不显著；92d时与71d和对照組的差异不显著；71d与对照組的差异不显著。以泌乳期中期(113d)的M丽为最高。由于试验周期很长(接近3个月)，对于试验奶牛的选择，要排除较大的影响因素，如随奶牛泌乳周期的改变泌乳曲线的变化等等。因而，选择试验牛时尽力避开了泌乳曲线增长迅速的前50d,而泌乳期50d后，泌乳曲线增长相对平緩，可以排除试验牛本身产乳周期的影响。因此试验可以证明，试验长时间饲喂奶牛膨化全脂大豆对奶牛蛋白质代谢有促进作用。3.2膨化全脂大豆对奶牛BUN的影响添加不同水平的膨化全脂大豆对奶牛BUN的对比，见表9。表9添加不同水平的膨化全脂大豆对奶牛BUN的比较<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>注在差数的右上方标"**"表示差异极显著(？<0.01=,在差数的右上方标""表示差异显著(P"C0.05-,未标记表示差异不显著(PX).05)。从表9中可以看出试验3组比对照组BUN值提高6.7%，试验2组比对照组提高2.1%,而试验l组比对照組提高0.8%。经SPSS统计软件分析得出结论，三个试验组BUN含量与对照組相比差异极显著(P<0.01=。从试验结杲可以看出，随膨化大豆添加量的提高，BUN的含量呈不断增加的趋势，即添加量与BUN含量呈正相关关系。3.2.1BUN值与MUN值的相关关系及最佳膨化全脂大豆添加量表10BUN值与MUN值的相对关系<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>如图3所示，由于反刍动物受瘤胃影响，奶牛的蛋白质代谢过程不能量化，但通过乳中尿素氮(MUN)和血中尿素氮(BUN)的检测，可以/人侧面了解奶牛机体对蛋白质的代谢吸收状况，从而量化奶牛饲料中蛋白质饲料的添加量。BUN值虽然比MUN值更加准确的反映奶牛的蛋白质代谢状况，却由于血液采集不如奶样采集更加简便宜行。通过SAS分析程序，BUN=9.6278-0.589顶UN(R=-0.0117),即BUN与MUN呈负相关。因而，检测与BUN值密切相关的MUN值推断BUN的变化曲线。从表ll中可看出，添加膨化全脂大豆的3个试验组的氮利用率都要好于对照组，其中15%添加水平的使用状况要好于7.5%与22.5%的添加水平，BUN与MUN含氮量相比，BUN增长趋势与MUN增长趋势大致相同。由于22.5%添加水平与对照组相比虽有增长，但增长幅度4艮小，与15%添加组相比，明显产生了负增长。7.5%添加水平到15%添加水平，牛机体的氮利用率较高，在15%添加水平左右达到峰值，之后由于超出了奶牛的代谢极限，影响了奶牛的正常氮代谢，BUN未转化为MUN,而是随尿N排出体外，产生了负增长。因而，全脂膨化全脂大豆的最佳添加量应该是总饲料水平的15%左右，最佳蛋白比率为20.01%(匿)。表ii膨化全脂大豆最佳用量范围分析表<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>氮利用率75.5%78.4%83.9%**75.5%注在差数的右上方标"""表示差异极显著(P<0.01),在差数的右上方标表示差异显著(P<0.05)，未标记表示差异不显著(P>0.05),4试验结论4.1不同水平膨化全脂大豆对试验奶牛MUN的影响虽然各试验组内MUN值与对照组相比差异不显著(P>0.05),但是在试验组间试验2组与另两个试验组相比数据差异极显著，这说明膨化全脂大豆15%添加量时奶牛对蛋白添加剂利用较佳。试验1组比对照组MUN值提高了5.93%,方差分析表明差异显著(P<0.05),和试验2组相比，在添加量上有差别，可以想象，如果加大试验l组添加量达到试验2组的添加量时，可以提高蛋白利用效率效果，甚至达到试验2组的饲喂效果。而试验3组飼喂效果不如试l全2组理想。从这方面说，添加15%全脂膨化全脂大豆后如果再加大添加量不能达到提高蛋白利用效率的效果。4.2不同水平膨化全脂大豆对试—险奶牛BUN的影响从方差分析结果来看，各组与对照组间的BUN含量差异不显著(P〉0.05)，试-险3组BUN值显著高于其他三个组(P<0.05=。从测定数据可以看出，3个试验组的BUN值要高于对照组，其中试验3组的BUN值要高于其余三组，试验1组含氮量比含氮量最低的对照组高4.1%,试验2组的含氮量比含量最低的对照组高5.56%。试验3组含氮量最高，比含氮量最低的对照组高8.61%。B丽与膨化全脂大豆添加量呈正比。综合以上可见，高产奶牛日料中添加膨化全脂大豆对奶牛MUN值影响呈正弦曲线关系，试验2组膨化全脂大豆添加水平祠喂效果最佳(P<0.01)。高产奶牛BUN值随日料中膨化全脂大豆添加量增加而逐步增加，呈线型增长趋势。氮利用率(MUN/BUN)呈正弦变化曲线。高产奶牛日粮添加15%水平膨化全脂大豆可取得最佳氮利用效率。权利要求1、一种高产泌乳奶牛蛋白饲料，其特征在于由奶牛基础日粮和膨化全脂大豆组成。2、按照权利要求1所述的高产泌乳奶牛蛋白饲料，其特征在于按干物质计算，该高产泌乳奶牛蛋白饲料含有7.5-22.5wt。/。的膨化全脂大豆，余量为奶牛基础日粮。3、按照权利要求2所述的高产泌乳奶牛蛋白饲料，其特征在于该高产泌乳奶牛蛋白饲料含有15wt。/。的膨化全脂大豆，余量为奶牛基础日粮。4、按照权利要求1所述的高产泌乳奶牛蛋白饲料，其特征在于所述的基础日净良由并奮料和粗料按照6.5:3.5的重量比例所组成。5、按照权利要求1所述的高产泌乳奶牛蛋白铜料，其特征在于所述的精料包括玉米、麸皮或棉粕；所述的粗料包括玉米秸秆、东北羊草、苜蓿草或青贮。6、一种制备权利要求1-5任何一项所述的高产泌乳奶牛蛋白饲料的方法，包括将膨化全脂大豆掺入到精料中与粗料混合均匀即得。7、权利要求1-5任何一项所述的高产泌乳奶牛蛋白饲料作为奶牛铜料的用途。全文摘要本发明公开了一种高产泌乳奶牛蛋白饲料及其制备方法，属于动物饲料领域。该高产泌乳奶牛蛋白饲料由奶牛基础日粮和膨化全脂大豆组成，优选的，高产泌乳奶牛蛋白饲料含有7.5-22.5wt％的膨化全脂大豆，余量为奶牛基础日粮。添加膨化全脂大豆能够明显改善牛乳中长链不饱和脂肪酸的含量，能够显著提高奶牛产奶量及乳脂率、乳蛋白。本发明通过试验发现高产泌乳奶牛的基础日粮中添加占其总重量1-5％的膨化全脂大豆时既可以避免蛋白质饲喂过量，减少氮的排放，又能最大限度的增加氮的利用效率，在降低饲料成本的同时，还能促进奶牛的生长，可显著提高奶牛产奶量、乳脂与乳蛋白。文档编号A23K1/18GK101564118SQ200910082609公开日2009年10月28日申请日期2009年4月21日优先权日2009年4月21日发明者欣何,刘文奇,叶子弘,敏周,王占赫,蒋林树,郭玉琴申请人:北京农学院