专利名称：一种金线莲的快繁方法
技术领域：
本发明涉及一种金线莲的快繁方法。
背景技术：
金^MUinoectochilus.roxburghii (Wall.) Lindl.)自古以来就是民间使用 的珍贵药材，对治疗小儿惊风、高热、百日咳等有奇效。现代医学研究认为野生、栽培或组 培的金线莲具有强心、止痛和降血糖等功效，对于高血压、肿瘤有一定的疗效。兼具赏叶、观 花之功用，是观赏价值极高的花卉珍品。金线莲为典型的阴性植物，生长在阴蔽的阔叶林下，肥沃腐殖土中，对空气、温度、 光照、积温等生态条件要求严格。由于金线莲属的植物种子不具胚乳，无发芽能力，只有在 与真菌共生条件下，才能促使其种子萌发生长，因此金线莲的种子发芽率很低。长期以来， 对金线莲的有性繁殖均未取得突破性进展。近年来，随着金线莲赖以生存的自然环境发生 了变化，野生资源锐减，加上人为的大量采挖，现已濒临灭绝。由于组织培养具有环境因子可人工控制，繁殖周期短、速度快，可周年进行生产， 节省生产材料，同时还具有保持植物原有优良性状等优势，所以被广泛采用于很多植物种 苗的工厂化繁育，取得了巨大的的经济效益。经过多年的组织培养实践，金线莲组培快繁技 术日趋成熟，但是在快繁过程中仍存在着一些影响快繁的突出问题(1)金线莲丛生芽诱 导、增殖、幼苗培养与生根所使用的基本培养基(MS)仍需进一步改良。(2)金线莲试管苗移 植栽培技术仍然深受传统的人工栽培技术的影响。这势必给金线莲苗健壮生长、快速繁殖、 简化栽培管理、降低生产成本等生产技术环节的改良、发展带来一定困难与局限性。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供了一种金线莲的快繁方法。本发明的金线莲的快繁方法，包括种苗消毒、芽诱导、芽增殖、幼苗培养、根诱导、 试管苗移栽，其中所述芽增殖的培养基为去除肌醇的MS+ ZnS04 · 7H20
6mg/L+KH2P04180mg/L+6-BA4mg/L+ NAAlmg/L+洲蔗糖；所述幼苗培养的培养基为去 除肌醇的 MS+ZnS04 · 7H203mg/L +KH2P04280mg/L+NAA 0. 6mg/L+4% 蔗糖，pH5_6 ；所述根诱导 的培养基为
MS+ ZnSO4WH2O 3mg/L+KH2P04 280mg/L+IBA0. 6mg/L+4% 蔗糖+0. 2% 活性碳；所述试管 苗移栽采用流动循环式溶液培养。所述流动循环式溶液培养的具体步骤如下
(1)取茎段粗壮，高3 3.5cm的试管苗进行移栽；
(2)移栽前先打开瓶塞炼苗10d，然后将试管苗从培养瓶取出，洗净附着其上的固体培 养基后，放入400倍多菌灵稀释液中，消毒5-7min ；
(3)将上述消毒后的试管苗固定在泡沫板上，株间距8'8cm ；
(4)向培养槽中注入稀释4倍浓度的MS培养基，pH值5.4^6. 5，初始水位达5_6 cm，根据每天蒸发情况，及时补充无菌水；
(5)将固定有试管苗的泡沫板置于培养槽中培养，培养条件温度2(T25°C，湿度 75 85%，光照强度2600 800 Ix ；
(6)培养30天左右，叶面追施叶面肥，叶面喷雾，以叶面滴水为度，根据金线莲苗的生 长情况，适时叶面追肥，时间每隔半个月一次。针对影响组培快繁中的突出问题，本发明以筛选金线莲诱导、增殖、幼苗培养和根 诱导培养基为目的，把简化培养基的成分，优化激素的种类、配比和浓度做为研究的重点， 运用正交试验设计和完全随机区组试验设计，达到优化培养、除去肌醇，节约成本的目的。 同时突破传统的幼苗土培方式，采用流动循环式溶液培养，克服了土培金线莲土壤水分不 易控制、根系不发达、缓苗时间长、幼苗生长慢的缺点，流动循环式溶液培养有利于金线莲 生长发育，适合组培苗驯化移栽，其植株生长健壮，叶片较大生长旺盛且为墨绿色，有光泽， 最大的叶片宽幅可达2. Icm0由于营养液流动，便于水气交流，营养均衡，特别能促进根部生 长，单株平均鲜生高达2. 29g,比同期土培重0. 37g，从株高、新叶数、发根率、鲜质量等生物 量指标来看，都明显优于传统土培栽培方式，而且易于进行人工操作管理。
图1为不同栽培方式对移栽组培苗生长的影响。
具体实施例方式1、消毒
选择生长健壮的野生金线莲或人工栽培的金线莲植株，用流动水将植株洗净，去掉根、 叶，再用小刀把叶鞘及顶芽外叶削掉，注意不要伤及腋芽，再用肥皂水振荡l-2min，洗去肥 皂水后，用无菌水冲洗一遍，用70-75%乙醇浸泡l-2min，再放入1- 氯化汞溶液中浸泡 5-10min,之后用无菌水冲洗4飞遍备用。2、接种
将消毒好的材料切成带广2个腋芽的茎段，接到芽诱导培养基上1/2MS+6-BA 5mg/L + NAA 2mg/L+ZT 0. lmg/L + 琼脂 0. 65g/L+4% 蔗糖，pH5_6。3、培养
在金线莲的芽诱导培养过程中，培养温度控制在23-25°C，光照度为50(Γ6001χ。4、芽增殖
将诱导芽接种到芽增殖培养基上，进行暗培养，培养温度20-22°C，所述芽增殖培养基 为MS (去除肌醇)+ZnSO4 · 7H203mg/L+KH2P04180mg/L+6-BA2mg/L+ NAAlmg/L+4% 蔗糖， PH5-6;接种20 d后侧芽开始萌动。在芽体器官分化的同时，继续大量增殖新芽，40 d后每 个外植体大约可以分化出15-20个茎高l-2cm的新芽，扩繁迅速，生长密集。5、幼苗培养
芽增殖培养3个月左右长出幼苗，选择有2-3个叶片、高约34cm的生长良好的小 苗，接在幼苗培养基上，每个培养基上接2-3株，进行光培养，每天光照12h，光照强度为 500-600 lx，温度控制在20-22 ；所述幼苗培养基为MS (去除肌醇)+ZnSO4 · 7H203mg/L +KH2P04280mg/L+NAA 0. 6mg/L+4% 蔗糖，pH5_6。
6、根诱导
幼苗培养3个月左右可转入生根培养基(MS+ ZnSO4 · 7H20 3mg/L+ KH2P04 280mg/L+IBA0. 6mg/L+4%蔗糖+0.觊活性碳)，每天光照10-12 h，光照强度 120(Γ 5001χ，温度控制在20-22 ；培养10 d后开始生根，根从靠近培养基的每个节长出 1-2条，呈肉质状，根比较短且不分枝，其上有细密、乳白色的根毛，培养50 d左右，植株长 至4-5cm，叶色暗绿，根系发育完好时可进行室外移栽。7、金线莲流动循环式溶液培养
(1)取茎段粗壮，长势好，高约3 3.5cm,适宜移植的试管苗；
(2)移栽前先打开瓶塞炼苗10d，然后将试管苗从培养瓶取出，洗净附着其上的固体培 养基后，放入400倍多菌灵稀释液中，消毒5-7min ；
(3)将上述消毒后的试管苗用软性海绵固定在泡沫板(100'60'2. 5cm )上，株间距 (8'8 cm)；
(4)向培养槽(105'65'IOcm)中注入稀释4倍浓度的常用培养基MS，pH值5.Γ6.5， 初始水位达5-6 cm左右，根据每天蒸发情况，每天及时补充无菌水；
(5)将固定有试管苗的泡沫板置于培养槽中培养，培养条件温度2(T25°C，湿度 75 85%，光照强度2600 800 Ix ；
(6)培养30天左右，叶面追施叶面肥(0.6%尿素(w/w) +0. 2%磷酸二氢钾液(w/w))，叶 面喷雾，以叶面滴水为度，根据金线莲苗的生长情况，适时叶面追肥，时间每隔半个月一次。8、不同栽培方式对金线莲生长的影响
比较不同栽培方式对金线莲生长的影响，如表1和图1所示，采用本发明的金线莲快繁 方法，其植株生长健壮，根系粗壮，叶片较大生长旺盛且为墨绿色，有光泽，最大的叶片宽幅 可达2. Icm0由于营养液流动，便于水气交流，营养均衡，特别能促进根部生长，单株平均鲜 生高达2. 29g,比同期土培重0. 37g，从株高、新叶数、发根率、鲜质量等生物量指标来看，都 明显优于传统土培栽培方式，而且易于进行人工操作管理。表1不同栽培方式对金线莲生长的影响
权利要求
1.一种金线莲的快繁方法，包括种苗消毒、芽诱导、芽增殖、幼苗培养、根诱导、试管苗 移栽，其特征在于所述芽增殖的培养基为去除肌醇的MS+ ZnS04 · 7H206mg/L+KH2P04180mg/L+6-BA4mg/L+ NAAlmg/L+2% 蔗糖。
2.根据权利要求1所述的金线莲的快繁方法，其特征在于所述幼苗培养的培养基为 去除肌醇的 MS+ZnS04 · 7H203mg/L +KH2P04280mg/L+NAA 0. 6mg/L+4% 蔗糖，pH5_6。
3.根据权利要求1或2所述的金线莲的快繁方法，其特征在于所述根诱导的培养基为MS+ ZnSO4 · 7H20 3mg/L+KH2P04 280mg/L+IBA0. 6mg/L+4% 蔗糖 +0. 2% 活性碳。
4.根据权利要求1、2或3所述的金线莲的快繁方法，其特征在于所述试管苗移栽采 用流动循环式溶液培养。
5.根据权利要求4所述的金线莲的快繁方法，其特征在于所述流动循环式溶液培养 的具体步骤如下(1)取茎段粗壮，高3 3.5cm的试管苗进行移栽；(2)移栽前先打开瓶塞炼苗10d，然后将试管苗从培养瓶取出，洗净附着其上的固体培 养基后，放入400倍多菌灵稀释液中，消毒5-7min ；(3)将上述消毒后的试管苗固定在泡沫板上，株间距8'8cm ；(4)向培养槽中注入稀释4倍浓度的MS培养基，pH值5.4^6. 5，初始水位达5_6 cm，根 据每天蒸发情况，及时补充无菌水；(5)将固定有试管苗的泡沫板置于培养槽中培养，培养条件温度2(T25°C，湿度 75 85%，光照强度2600 800 Ix ；(6)培养30天左右，叶面追施叶面肥，叶面喷雾，以叶面滴水为度，根据金线莲苗的生 长情况，适时叶面追肥，时间每隔半个月一次。
全文摘要
本发明提供了一种金线莲的快繁方法，包括种苗消毒、芽诱导、芽增殖、幼苗培养、根诱导、试管苗移栽，所述芽增殖的培养基为去除肌醇的MS+ZnSO4·7H2O6mg/L+KH2PO4180mg/L+6-BA4mg/L+NAA1mg/L+2%蔗糖。本发明以筛选金线莲诱导、增殖、幼苗培养和根诱导培养基为目的，达到优化培养、除去肌醇，节约成本的目的。同时突破传统的幼苗土培方式，采用流动循环式溶液培养，有利于金线莲生长发育，适合组培苗驯化移栽。
文档编号A01H4/00GK102090341SQ20101060431
公开日2011年6月15日 申请日期2010年12月24日 优先权日2010年12月24日
发明者宁书菊, 林亮亮, 魏道智 申请人:福建农林大学