专利名称：血吸虫虫卵的孵化方法及其所用的孵化袋的制作方法
技术领域：
本发明涉及动物虫卵的孵化方法，尤其涉及一种血吸虫虫卵的孵化方法及其所用 的孵化袋。
背景技术：
日本血吸虫是一种严重的人畜共患寄生虫病，家畜、尤其是生活在疫区的家畜是 主要的传染源。人与家畜血吸虫病的普查方法有多种，但最普遍、最准确的方法是采用粪便 检查的方法。粪便检查血吸虫病也是当前病原检查的主要方法之一。粪便检查血吸虫的 方法主要依靠粪便毛蚴孵化法，粪便毛蚴孵化法仍是当前可以作出正确诊断的检测方法， 也是国家考核达标验收时规定的检测方法。该方法的操作程序分为四步骤1.铜筛过滤; 2.滤出物以尼龙筛绢淘洗；3.加入沉淀杯，沉淀换水，除去上浮物；4.倒入三角烧瓶或长颈 烧瓶中进行孵化，为便于观察毛蚴，还要在瓶颈下1/2处加一块2-3cm的脱脂棉，再加清水 至瓶口。这种方法通常称为常规尼龙筛绢淘洗粪便毛蚴孵化法，由于该方法既经过铜筛网 过滤，又经过尼龙筛绢淘洗，粪渣清晰，孵出毛蚴易于观察，但是由于要经过铜筛网过滤，尼 龙筛绢淘洗等多步骤，每一步骤均要散失一些虫卵。根据无锡血防所以16份阳性粪便进行 试验，共检出毛蚴数1998只，其中沉淀内为1171只，仅占58. 6 %，而倒去的残杂却孵出毛蚴 827只，占总数的38. 1%，其他换水等散失占3. 3%。这种孵化的方法的缺点是(1)对低感 染度人群或动物的敏感性低；( 虫卵丢失多，计数不准确；C3)步骤多，耗时长。为此，有必 要发展更灵敏、快捷的方法。直接粪便毛蚴孵化法检测家畜血吸虫病，其操作方法上减少铜筛过滤、尼龙筛绢 淘洗过滤这两个过程，将粪便直接倒入三角烧瓶或长颈烧瓶中进行孵化。有实验证实75克 血吸虫病阳性牛粪采用直接粪便毛蚴孵化法与常规尼龙筛绢淘洗法进行对比试验，结果常 规尼龙筛绢法孵出毛蚴22个，而直接粪便淘洗法仅孵出毛蚴2个，12小时后，前者换水重新 孵化，已没有发现毛蚴，后者换水后分瓶孵化，却仍然出现大量毛蚴，说明许多虫卵尚未孵 出毛蚴。第二次同样方法以50克粪便进行对比试验，常规尼龙筛绢法孵出毛蚴146个，而 直接粪便毛蚴孵化法为101个，同样12小时后换水分瓶孵化，前者仍然没有孵出毛蚴，而后 者依然有毛蚴孵出。常规尼龙筛绢淘洗粪便毛蚴孵化法，由于该方法既经过铜筛网过滤，又 经过尼龙筛绢淘洗，粪渣清晰，所有毛蚴均能孵出，效果较直接粪便毛蚴孵化法好。
发明内容
本发明要解决现有的粪便毛蚴孵化法检测步骤繁琐、敏感性低、准确性差的技术 问题，提供一种血吸虫虫卵的孵化方法，该方法不仅操作简便、耗时少，而且可批量操作，且 灵敏度高、准确性好。此外，还需要提供一种上述血吸虫虫卵的孵化方法所用的孵化袋。为了解决上述技术问题，本发明通过如下技术方案实现在本发明的一个方面，提供了一种血吸虫虫卵的孵化方法，包括以下步骤
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将待检粪样加入孵化袋后封口，该孵化袋具有100 500目孔径的微孔；把装有待检粪样的孵化袋放入清洗装置中清洗、甩干，以去除待检粪样中部分杂 质与色素，并保留血吸虫虫卵；将清洗完的孵化袋放入孵化杯，加入孵化水孵化。优选的，所述孵化袋的孔径为300 350目，因为300 350目的孵化袋能有效阻 挡血吸虫虫卵通过，而孵化出的血吸虫毛蚴又易于钻出孵化袋，达到很好的孵化效果。所述孵化袋的材质包括尼龙筛绢、涤纶筛绢、丙纶纤维或维纶纤维。优选的，本发 明的孵化袋选用尼龙筛绢袋。优选的，清洗所用水的温度不超过16°C，因为降低水体温度至16°C及以下后清洗 孵化袋内虫卵时可抑制虫卵孵化，防止在清洗过程中因虫卵孵化成毛蚴而流失，提高检测 的准确率。优选的，清洗所用水的盐浓度大于等于0. 5%，因为增加水体中盐的含量可增加孵 化所需时间，0.5%及以上盐浓度水清洗孵化袋内虫卵时可抑制虫卵孵化，从而防止在清洗 过程中因虫卵孵化成毛蚴而流失，提高检测的准确率。优选的，所述清洗、甩干的次数为四次以上，可以将待检粪样清洗干净，提高毛蚴
孵化率。优选的，所述孵化的温度为，是最适孵化温度。在本发明的另一方面，提供了一种用于血吸虫虫卵孵化的孵化袋，该孵化袋具有 100 500目孔径的微孔。优选的，所述孵化袋设有自封条，便于封口。本发明血吸虫虫卵的孵化方法，每一个样品在一个尼龙筛绢袋中完成待检物的过 滤和孵化，减少了操作步骤和虫卵损失，提高了检测敏感性，同时由于可以进行自动化操 作，本发明方法检测速度明显提高，适于血吸虫病疫区家畜的大规模检测。
下面结合附图和具体实施方式
对本发明作进一步详细的说明。图1是本发明尼龙筛绢袋的示意图。
具体实施例方式本发明提供了一种血吸虫虫卵的孵化方法，包括以下步骤将待检粪样加入孵化 袋后封口，该孵化袋具有100 500目孔径的微孔；把装有待检粪样的孵化袋放入清洗装置 中清洗、甩干，以去除待检粪样中小于孵化袋孔径的杂质与色素，并保留大于孵化袋孔径的 血吸虫虫卵；将清洗完的孵化袋放入孵化杯，加入孵化水孵化。在仅有上部开口的孵化杯 中，虫卵得到孵化，由于孵化毛蚴具有向光性和向上性，汇聚到孵化杯上部的观察窗。当仅 需要做定性检测时，可通过观察窗观察水体中是否有毛蚴出现；当需要做定量检测时，可通 过过滤杯体中的水分收集全部毛蚴，达到定量效果。本发明的孵化方法减少了经铜筛网过滤的步骤，直接将粪样放入特制的可封口的 孵化袋内，用加水清洗甩干的方法淘洗粪样，减少了粪样的转移过程，使粪渣中的虫卵得以 保存，能获得更多的毛蚴，同时，本发明方法又不同于直接粪便毛蚴孵化法。直接粪便毛蚴
4孵化法由于粪便未经铜筛网过滤，又没有经过尼龙筛绢袋淘洗，粪渣多，色素浓，影响其毛 蚴孵出。有实验表明自然光线下孵出毛蚴数比黑暗情况下孵出毛蚴数高出3倍之多，直接 粪便毛蚴孵化法，有多种原因造成虫卵孵出率较低，其中大量粪渣和粪渣中抑制虫卵孵化 的物质以及水体透光率低可能是主要因素。本发明方法通过加水清洗甩干的方式淘洗孵化 袋中的粪样，减少了粪渣中抑制虫卵孵化的物质，增加了透光率，既促进孵化，又便于毛蚴 观测。本发明用于血吸虫虫卵孵化的孵化袋的材质包括尼龙筛绢、涤纶筛绢、丙纶纤维 或维纶纤维。在本发明的实施例中，孵化袋优选带有自封条的尼龙筛绢袋(如图1所示)。下面通过实施例作进一步详细说明。实施例1不同孔径尼龙筛绢袋对血吸虫虫卵的通透及孵化100-500目/时的尼龙筛绢袋可阻挡血吸虫虫卵通过，而血吸虫毛蚴可方便通过。制作不同孔径的尼龙筛绢袋，将吸取定量的血吸虫虫卵(1000个/ml)置于其中， 加水过滤一次后计数过滤出的虫卵，袋内剩余虫卵孵化，观察不同孔径尼龙筛绢袋对虫卵 和毛蚴的阻隔作用。表1不同孔径尼龙筛绢袋对血吸虫虫卵的通透及孵化
孔径透过虫卵透过率孵化数相对孵化率(目)(个)(%)(个)(%)100446±3987.864±2.78.5200422±3483.075±510.6260197±4438.7127±10.356.73002.3±2.50.4643±5.691.53500-34±12.671.64000-27±13.157.55000-6±4.213.5对照508±2847±5.6结果300目的尼龙筛绢袋能很好的防止虫卵流失并达到较好的孵化效果。超过 500目阻碍虫卵流失好但孵化效果较差。因此，用300-350目的尼龙筛绢袋做血吸虫虫卵孵 化，效果较佳。实施例2清洗、甩干次数与孵化的关系将待检牛粪50克置于300目的尼龙筛绢袋，用IOOOml水清洗并甩干，重复上述步 骤，检测检每次洗涤后的水样浑浊度(0D600值)以及对应的水的孵化毛蚴数。表2清洗、甩干次数与孵化的关系
清洗并甩干次■I 12345678 空白对照浑浊度OD值2. 010. 420. 40. 370. 340. 230. 170. 13 0. 0平均毛蚴数3. 716. 722. 025. 329. 731. 333. 330. 3 31. 7相对孵化率11. 652. 669. 580. 093. 798. 9105. 295. 8 --结果甩干次数4-5次后虫卵的孵化基本不受影响。实施例3不同水温对毛蚴孵化的影响
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检测不同水温对毛蚴孵化的影响。表3不同水温对毛蚴孵化的影响
权利要求
1.一种血吸虫虫卵的孵化方法，其特征在于，包括以下步骤将待检粪样加入孵化袋后封口，该孵化袋具有100 500目孔径的微孔； 把装有待检粪样的孵化袋放入清洗装置中清洗、甩干，以去除待检粪样中部分杂质与 色素，并保留血吸虫虫卵；将清洗完的孵化袋放入孵化杯，加入孵化水孵化。
2.根据权利要求1所述的孵化方法，其特征在于，所述孵化袋的孔径为300 350目。
3.根据权利要求1所述的孵化方法，其特征在于，所述孵化袋的材质包括尼龙筛绢、涤 纶筛绢、丙纶纤维或维纶纤维。
4.根据权利要求1所述的孵化方法，其特征在于，清洗所用水的温度不超过16°C。
5.根据权利要求1所述的孵化方法，其特征在于，清洗所用水的盐浓度大于等于 0. 5%。
6.根据权利要求1所述的孵化方法，其特征在于，所述清洗、甩干的次数为四次以上。
7.根据权利要求ι所述的孵化方法，其特征在于，所述孵化的温度为^rc。
8.一种用于血吸虫虫卵孵化的孵化袋，其特征在于，该孵化袋具有100 500目孔径的 微孔。
9.根据权利要求8所述的孵化袋，其特征在于，所述孵化袋的材质包括尼龙筛绢、涤纶 筛绢、丙纶纤维或维纶纤维。
10.根据权利要求8所述的孵化袋，其特征在于，所述孵化袋设有自封条。
全文摘要
本发明公开了一种血吸虫虫卵的孵化方法，包括以下步骤将待检粪样加入孵化袋后封口，该孵化袋具有100～500目孔径的微孔；把装有待检粪样的孵化袋放入清洗装置中清洗、甩干，以去除待检粪样中部分杂质与色素，并保留血吸虫虫卵；将清洗完的孵化袋放入孵化杯，加入孵化水孵化。本发明还公开了一种用于血吸虫虫卵孵化的孵化袋。本发明血吸虫虫卵的孵化方法，不仅操作简便、耗时少，而且灵敏度高、准确性好，适用于大规模批量检测。
文档编号A01K67/033GK102125000SQ201110071380
公开日2011年7月20日 申请日期2011年3月23日 优先权日2011年3月23日
发明者刘毅, 朱传刚, 李小红, 杨艺, 林矫矫, 江艳, 陆珂 申请人:中国农业科学院上海兽医研究所