专利名称：一种肉仔鸡下丘脑食欲调控研究的方法
技术领域：
本发明涉及一种肉仔鸡下丘脑食欲调控研究的方法，属生物技术领域。
背景技术：
下丘脑作为动物食欲的中枢，对于采食量的调节起着重要作用。因此，不同药物对于下丘脑中食欲相关神经元的研究越来越多。由于血脑屏障的作用，外周血液中的药物很难进入下丘脑，或进入脑室内后剂量大大减少。第三脑室中位于下丘脑上部，能暂时容纳一定剂量的药物。通过先将药物注入到第三脑室中，再观察药物对对下丘脑作用，这样得到的数据更为直接和准确。但由于不同物种、品种、日龄的差异，第三脑室的位置也会不同，本技术建立利用7日龄肉仔鸡第三脑室注射研究下丘脑食欲调控机制的研究方法，对于以后家禽生物学试验的开展建立了一套迅速有效的试验技术。
发明内容为了解决上述问题，本发明提供了一种肉仔鸡下丘脑食欲调控研究的方法，具体是一种利用7日龄肉仔鸡第三脑室注射研究下丘脑食欲调控机制的研究方法。通过确定7日龄 AA肉仔鸡第三脑室的三维空间位置，实现研究某种生物活性物质(或信号物质)调控下丘脑神经中枢的目的，为以后生物学试验研究提供一种方便快捷的技术手段。
本发明的目的是这样实现的利用CT技术检测7日龄鸡的脑室三维图谱，确定第三脑室的三维空间位置；再利用脑室注射仪将生物活性物质注入到7日龄AA肉仔鸡第三脑室；利用染料伊卡斯兰(其他试剂也可以)标记待测溶液，试验结束后剖检下丘脑及脑室，确定注射效果。
具体做法为在7日龄AA肉仔鸡囟门处用记号笔做一标记，记为零点(0，0，0)， 以零点向鸡耳蜗处为X轴，以零点向鸡喙处为Y轴，以零点向鸡颅骨下面垂直方向的延伸为Z轴。自零点处开始向喙端做螺旋CT，利用计算机断层摄影系统(CT仪)中刻度尺测量从零点到出现第三脑室的距离和从零点到第三脑室消失的距离，并记录第三脑室到颅骨的垂直距离，所得数据即为第三脑室的位置。第三脑室位于囟门向X轴方向延伸 1.8-2. 1mm，沿Z轴方向的延伸距离为5.4-5. 7mm。因此，7日龄AA肉仔鸡第三脑室的坐标为(0，1. 8-2. 1，5. 4-5. 7)，单位为mm ；再利用脑室注射仪将生物活性物质注入到7日龄AA 肉仔鸡第三脑室。
将染料伊卡斯兰(其他试剂也可以)溶解在含有待测生物活性物质的生理盐水中， 伊卡斯兰溶液的质量体积浓度为0. 1%-0. 5%，其他试剂的注射浓度可根据需求而定，试验结束后(一般不超过3 h)通过剖检确定注射效果。如果在脑室外组织中不存在伊卡斯兰染色， 判定为注射成功。
本发明的有益效果是快速确定7日龄AA肉仔鸡第三脑室的位置，能迅速、高准确率的将试验试剂注射到7日龄AA肉仔鸡的第三脑室中，实现研究下丘脑采食调控机制的目的。
具体实施方式
实施例1在7日龄AA肉仔鸡囟门处用记号笔做一标记，记为零点(0，0，0 )，以零点向耳蜗处为X 轴，以零点向喙处为Y轴，以零点向颅骨垂直方向的延伸为Z周。自零点处开始向喙端做螺旋CT，利用计算机断层摄影系统(CT仪)中刻度尺测量从零点到出现第三脑室的距离以及从零点到第三脑室消失的距离，记录第三脑室到颅骨的垂直距离，所得数据即为第三脑室的位置。第三脑室位于囟门向X轴方向延伸1. 8-2. 1mm，向Z轴方向延伸距离为5. 4-5. 7mm。 因此，7日龄AA肉仔鸡第三脑室的坐标为(0，1.8-2. 1,5. 4-5. 7)，单位为mm。
实施例2 (一)固定1、在一水平桌面上，水平调整好立体定向器(江弯I型C)，包括水平上的左右2个固定夹、前面的喙固定夹。要求左右2个固定夹在一水平线上，左右距离一致，喙固定夹部位水平，与左右2个固定夹在一水平面上，并且与左右2个固定夹的尖端连接处形成一个边长为 2-3cm的等边三角形。
2、将7日龄肉仔水平并以俯卧的姿势置于固定夹处，并使水平上的左右2根固定夹刚好对准耳蜗，先将喙卡好，然后慢慢的旋紧水平固定夹，使之尖端缓缓的伸进耳蜗(一侧一侧进行)，直至松紧适宜，整个头颅水平固定，不能摇动为止(可从定向器前方察看)。
(二)注射将染料伊卡斯兰(其他试剂也可以)溶解在生理盐水中，伊卡斯兰溶液的质量体积浓度为0. 1%-0. 5%，(其他试剂的注射浓度可根据需求而定)，将盛有伊卡斯兰溶液的微量注射器固定在脑室注射仪上，移动微量注射器对准因门，以此为坐标的0点，向X轴移动注射器 1. 8-2. Imm,然后Z轴移动注射器至针头接触到头部皮下组织，继续向Z轴移动5. 4-5. 7mm 距离，调整微量注射泵注射剂量为2-lOul，注射时间为30-60秒，按下微量注射泵注射开关，注射完毕后移出微量注射器，松开肉仔鸡。按照同样的方法连续将伊卡斯兰注入到40 只7日龄肉仔鸡第三脑室中。
(三)检测脑组织体外检测发现按照本发明确定的第三脑室的坐标，成功将药物注入到7日龄肉仔鸡的第三脑室的有36只，成功率为90%。
权利要求
1. 一种肉仔鸡下丘脑食欲调控研究的方法，其特征在于先利用CT技术检测7日龄鸡脑室三维图谱，确定第三脑室的三维空间位置在7日龄AA肉仔鸡囟门处用记号笔做一标记，记为零点(0，0，0)，以零点向鸡耳蜗处为X轴，以零点向鸡喙处为Y轴，以零点向鸡颅骨下面垂直方向的延伸为Z轴；自零点处开始向喙端做螺旋CT，利用计算机断层摄影系统CT 仪中刻度尺测量从零点到出现第三脑室的距离和从零点到第三脑室消失的距离，并记录第三脑室到颅骨的垂直距离；所得数据即为第三脑室的位置，第三脑室位于因门向X轴方向延伸1.8-2. 1mm，沿Z轴方向的延伸距离为5.4-5. 7mm ；确定7日龄AA肉仔鸡第三脑室的坐标为(0，1. 8-2. 1，5. 4-5. 7)，单位为mm ；再利用脑室注射仪将生物活性物质注入到7日龄 AA肉仔鸡第三脑室。
全文摘要
本发明涉及一种肉仔鸡下丘脑食欲调控研究的方法，是先利用CT技术确定7日龄AA肉仔鸡第三脑室位置；通过利用脑室注射仪，将药物注入到第三脑室中，检测其成功率。作为一种生物技术，能迅速准确地将药物注射到7日龄AA肉仔鸡第三脑室中，为研究药物对下丘脑作用提供有效的技术手段。
文档编号A61D7/00GK102512260SQ20111042970
公开日2012年6月27日 申请日期2011年12月20日 优先权日2011年12月20日
发明者刘磊, 宋志刚, 朱立贤, 李先磊, 林海, 焦洪超 申请人:山东农业大学