专利名称：一种构树简便组培方法
技术领域：
本发明涉及一种植物组织培养方法，具体涉及一种构树简便组培方法，属生物技术领域。
背景技术：
构树iBroussonetia papyriferaL )属桑科,系多年生阔叶乔木，具有速生、适应性强、分布广、热量高、轮伐期短的特点。构树是一种投资少、周期短、见效快、受益长的特种经济林树种，主要分布于我国黄河、长江及珠江流域。构树的韧皮部纤维含量高，纤维长而细， 品质优良，是生产制造宣纸和造币纸的优质原料；树叶富含蛋白质、氨基酸、维生素、碳水化合物以及微量元素，是加工畜类饲料的纯天然绿色原料。加快构树培育速度，扩大构树资源是保证宣纸制造和饲料加工业持续发展的重要基础，也是增加农民收益的重要途径。构树组织培养，一方面可以扩大其繁殖系数，从而实现规模化繁殖；另一方面，可以在保存其原有的优良性状的基础上，实现构树种苗的快速繁殖和壮苗生产。构树组织培养的成本主要包括组培苗生产所需的培养基、设施设备、供电成本、耗材和人工成本。常规的构树组织培养方法要求接种过程、培养过程都在无菌培养基中进行，无菌消毒耗能大，人工操作成本高。如果能通过培养基改造，获得既保证构树组织正常生长，又具有杀菌、抗菌或抑菌功能的培养基，菌类也就不能在培养基中滋生。由于这种改造后的培养基不需要进行高温高压灭菌，一方面可以降低构树组织培养对设施设备的要求，尤其不需要高温高压灭菌所需配置的高压锅设备，缩减了投资成本，电能消耗也将大幅度降低；另一方面，采用这种培养基开展构树组织培养，组培环节大为简化，人工操作的速度大幅提高，从而降低了人工成本。此外，由于改造后的培养基自身具有杀菌、抗菌或抑菌作用，组织培养过程中的污染问题得到有效控制，构树组织培养无需在严格的无菌环境中进行，从根本上简化了构树组织培养。因此，构树简便组培的关键是培养基的改造，具体是找到一种或多种能够添加到培养基中，既具有广谱性杀菌、抗菌或抑菌能力，又不会对构树生长产生毒害或抑制，即不影响构树生长的物质。
发明内容
本发明的目的是提供一种构树简便组培方法。本发明的目的是通过以下方法实现的。本发明的一种构树简便组培方法，包括抑菌剂的配制、培养容器消毒、培养基配制、诱导培养、增殖培养、生根培养和瓶苗移栽，其特征在于
I.抑菌剂的配制抑菌剂I号的配制方法在益培隆杀菌剂A瓶药剂中加入20 ml蒸馏水稀释后与B瓶药剂混合，并用蒸馏水定容到100 ml，为抑菌剂I号；抑菌剂2号的配制方法在益培隆杀菌剂A瓶药剂中加入20 ml蒸馏水稀释后与B瓶药剂混合，再加入次氯酸钠溶液10 20 ml，并用蒸馏水定容至100 ml，为抑菌剂2号；所述益培隆杀菌剂由A 瓶药剂和B瓶药剂组成，由市场购得；所述次氯酸钠溶液为分析纯，活性氯的重量百分比不低于O. 5% ；
2.培养容器消毒将培养瓶及瓶盖在抑菌剂I号与水的体积比为O. 3 % O. 5 % (V / V)的水溶液中浸泡不少于10 h，保存备用；
3.培养基配制诱导培养基为MS+0.5 I. O mg/L 6-BA+0. I O. 5 mg/L NAA+3 5 ml/L抑菌剂2号+20 g/L蔗糖+3. 5 g/L琼脂粉，ρΗ5· 8 ;增殖培养基为MS+1. O mg/L 6-BA+0. I O. 5 mg/L NAA+3 5 ml/L 抑菌剂 2 号 +20 g/L 蔗糖 +3. 5 g/L 琼脂粉，ρΗ5· 8 ； 生根培养基为1/2MS+0. I O. 5 mg/L NAA+3 5 ml/L抑菌剂2号+20 g/L蔗糖+3. 5 g/ L琼脂粉，pH5. 8 ;所述MS培养基为1962年，Murashige和Skoog公开的MS培养基；所述 6-BA,指6-苄氨基嘌吟；所述NAA，指^ -萘乙酸；配制培养基时，先不加抑菌剂2号，按各培养基配方配齐其他原料后，用蒸馏水定容、加热至琼脂粉完全溶解，然后按各培养基配方添加抑菌剂2号，用I mol/L的NaOH或I mol/L的HCl调pH值至5. 8，分装到培养容器中， 封口，冷却凝固，备用；
4.诱导培养将采集的构树枝条用酒精消毒后，用O.I %的升汞溶液消毒6 min，取出用无菌水冲洗后，接种于诱导培养基上；培养室温度为28 °C，光照12 h，光照强度为1400 Ix ；
5.增殖培养将诱导出的芽苗切成带腋芽的茎段接种到增殖培养基上，30d转接一次；培养室温度为26 °C，光照12 h，光照强度为1400 Ix ；
6.生根培养当苗长到2 4 cm时，将丛生苗切成单株，接种到生根培养基上，25 d
移栽;
培养室温度为25 °C，光照12 h，光照强度为1500 Ix ；
7.瓶苗移栽生根培养25 d后，将生根苗取出，洗净根部的培养基，用800倍的多菌灵浸泡30 min后移栽至大棚内，大棚上层用遮光网遮盖，移栽的环境温度为25 °C。本发明的应用效果
I.本发明的构树简便组培方法对构树增殖倍数和污染率的影响由于本发明的构树简便组培方法，配制的培养基是无需高温高压灭菌，所以在增殖过程中，除了要考虑增殖率外，还要考虑污染率的问题。通过实验证实，本发明的构树简便组培方法与常规的构树组培方法相比，增殖率和污染率都没有太大差异。从瓶苗的生长状况看，本发明的构树简便组培方法的培养基由于不经过高温高压灭菌，激素和营养元素损失较少，其构树组培苗更绿，更壮。本发明的构树简便组培方法对构树增殖倍数和污染率的影响如表I所示。表I本发明的构树简便组培方法对构树增殖倍数和污染率的影响
权利要求
1.一种构树简便组培方法,包括抑菌剂的配制、培养容器消毒、培养基配制、诱导培养、 增殖培养、生根培养和瓶苗移栽，其特征在于(I)抑菌剂的配制抑菌剂I号的配制方法在益培隆杀菌剂A瓶药剂中加入20 ml 蒸馏水稀释后与B瓶药剂混合，并用蒸馏水定容到100 ml，为抑菌剂I号；抑菌剂2号的配制方法在益培隆杀菌剂A瓶药剂中加入20 ml蒸馏水稀释后与B瓶药剂混合，再加入次氯酸钠溶液10 20 ml，并用蒸馏水定容至100 ml，为抑菌剂2号；所述次氯酸钠溶液为分析纯，活性氯的重量百分比不低于O. 5% ；(2)培养容器消毒将培养瓶及瓶盖在抑菌剂I号与水的体积比为O. 3 % O. 5 %的水溶液中浸泡不少于10 h，保存备用；(3)培养基配制诱导培养基为MS+0.5 I. O mg/L 6-BA+0. I O. 5 mg/L NAA+3 5 ml/L抑菌剂2号+20 g/L蔗糖+3. 5 g/L琼脂粉，pH5. 8 ;增殖培养基为MS+1. O mg/L 6-BA+0. I O. 5 mg/L NAA+3 5 ml/L 抑菌剂 2 号 +20 g/L 蔗糖 +3. 5 g/L 琼脂粉，ρΗ5· 8 ； 生根培养基为1/2MS+0. I O. 5 mg/L NAA+3 5 ml/L抑菌剂2号+20 g/L蔗糖+3. 5 g/ L琼脂粉，pH5. 8 ;所述MS培养基为1962年，Murashige和Skoog公开的MS培养基；所述 6-BA，指6-苄氨基嘌吟；所述-萘乙酸；配制培养基时，先不加抑菌剂2号，按各培养基配方配齐其他原料后，用蒸馏水定容、加热至琼脂粉完全溶解，然后按各培养基配方添加抑菌剂2号，用I mo I/L的NaOH或I mol/L的HCl调pH值至5. 8，分装到培养容器中， 封口，冷却凝固，备用；(4)诱导培养将采集的构树枝条用酒精消毒后，用O.I %的升汞溶液消毒6 min，取出用无菌水冲洗后，接种于诱导培养基上；培养室温度为28 °C，光照12 h，光照强度为1400 Ix ；(5)增殖培养将诱导出的芽苗切成带腋芽的茎段接种到增殖培养基上，30d转接一次；培养室温度为26 °C，光照12 h，光照强度为1400 Ix ；(6)生根培养当苗长到2 4cm时，将丛生苗切成单株，接种到生根培养基上，25 d移栽；培养室温度为25 °C，光照12 h，光照强度为1500 Ix ；瓶苗移栽生根培养25 d后，将生根苗取出，洗净根部的培养基，用800倍的多菌灵浸泡30 min后移栽至大棚内，大棚上层用遮光网遮盖，移栽的环境温度为25 °C。
2.根据权利要求I所述的一种构树简便组培方法，其特征在于诱导培养基为MS+0.8 mg/L 6-BA+0. I mg/L NAA+4 ml/L 抑菌剂 2 号 +20 g/L 蔗糖 +3. 5 g/L 琼脂粉，pH5. 8。
3.根据权利要求I所述的一种构树简便组培方法，其特征在于增殖培养基为MS+1.O mg/L 6-BA+0. I mg/L NAA+4 ml/L 抑菌剂 2 号 +20 g/L 蔗糖 +3. 5 g/L 琼脂粉，pH5. 8。
4.根据权利要求I所述的一种构树简便组培方法，其特征在于生根培养基为 1/2MS+0. I mg/L NAA+4 ml/L 抑菌剂 2 号 +20 g/L 蔗糖 +3. 5 g/L 琼脂粉，ρΗ5· 8。
全文摘要
本发明涉及一种构树简便组培方法，包括抑菌剂的配制、培养容器消毒、培养基配制、诱导培养、增殖培养、生根培养和瓶苗移栽。采用本发明的构树简便组培方法，培养容器和培养基都无需进行高温高压灭菌，减少了工作量和能源消耗，简化了构树组培环节，降低了构树组培成本；本发明的构树简便组培方法，操作简单，只要按不同的培养基配方配制后，再加上抑菌剂即可，实用性强，推广性好；本发明的构树简便组培方法与常规的构树组培方法对比，可以降低成本10%以上。
文档编号A01H4/00GK102577976SQ20121007046
公开日2012年7月18日 申请日期2012年3月17日 优先权日2012年3月17日
发明者林庆良, 许莉萍, 阙友雄, 高世武 申请人:福建农林大学