专利名称：玉蝉花的组织培养方法
技术领域：
本发明涉及的是玉蝉花的组织培养方法。
背景技术：
鸢尾属(Iris)为鸢尾科(Iridaceae)多年生草本植物，广泛分布于北温带，以中国至中东(古地中海)为分化中心。中国鸢尾属资源非常丰富，尤其是主要分布在西南、 西北及东北地区的无髯鸢尾类群。鸢尾的生态适应性广，抗性较强，适宜在不同生境下栽培，耐粗放管理，繁殖系数较高，特别适合荒山绿化、水土保持、盐碱地改良，而且具有很高的观赏价值，根茎可药用，在初春和秋季霜后，还可以作为牛羊饲料，应用前景极其广泛。国内对鸢尾的研究起步较晚，且以分类学研究为主，大多数种类仍处于尚未开发利用的野生状态。玉蝉花{J. ensata)主要分布在日本、朝鲜以及我国东北三省、山东和浙江昌化等地。花蓝紫色，花色艳丽，株形优美，是园林绿化和湿地修复的良种，也是繁育花菖蒲品杂交种的重要种质资源，对该物种的保育研究也具有重要的实际意义。与其它根茎类鸢尾相同，玉蝉花兼备有性即种子和无性即分株两种繁殖方式，然而，利用种子繁殖，速度慢，繁殖效率低，且变异率高，而利用分株繁殖则会导致分株苗生长势越来越弱，利用组培技术繁育玉蝉花的技术尚未有人研究，优良品种的推广普及尚未完成，苗木供求矛盾日益加剧，严重影响了玉蝉花的园林应用和推广。
发明内容
本发明针对现有的不足提供了一种玉蝉花的育苗方法。本发明通过以下方法实现上述目的。玉蝉花的组织培养方法，其特征在于该方法包括下列步骤
①外植体的选择在玉蝉花开花之前取花葶的茎段和分节点作为外植体；
②材料处理方法先用软毛刷将外植体表面的灰尘轻轻刷去，用流水冲洗1h后用紫外灯照射20 min，转入超净工作台，在超净工作台上先用70-75 %的乙醇浸泡10秒，然后用无菌水冲洗，再转入滴加了 2 3滴土温80的0. 1 %的升汞溶液中浸泡7min，用无菌水冲洗4次，最后在无菌条件下分割材料，茎段切割成0. 5 0. 6 cm长；
③初代培养在无菌的条件下将步骤②得到的外植体接种在初代培养基上，该培养基是在MS常规培养基中添加了 3. Omg/L的6-BA、l. 2mg/L的NAA，30mg/L的蔗糖，PH 5. 9，培养温度为对°0，光照周期13h/d，光强度为2100-22001UX，待培养出的外植体带芽量长至3 个时，即开始下一个阶段；
④继代培养将初代培养的生长健壮的外植体新芽剪下2cm左右接种在继代培养基上，该培养基是在3/4MS常规培养基中添加了 1. 3mg/L的6_BA、0. 4mg/L的IBA，25mg/L的蔗糖，PH 5. 9，培养温度为M°C，光照周期13h/d，光强度为2100-22001UX，待新芽长至2. 5cm 时，即开始下一个阶段；⑤生根培养将继代培养的高度超过2.5cm的新苗剪下接种在生根培养基上，该培养基是在 1/2MS 常规培养基中添加了 0. 7mg/L 的 IAA、0. 5mg/L 的 NAA，0. 2mg/L 的 GA，28mg/ L的蔗糖，PH 5. 9，培养温度为M°C，光照周期13h/d，光强度为2100-22001UX，待新苗长至 2. 3cm左右时，即开始下一个阶段；
⑥炼苗移栽将长高至10-15cm、长根>5根的组培苗带瓶移至普通大棚内，放置1-3 天后打开瓶盖，在2548°C，湿度70-80 %，光强7 100-79001x条件下炼苗3_5天，炼苗完成后取出小苗洗净根部附着的培养基，移栽到经消毒的重量比腐殖土 草炭珍珠岩 =3:2:2的混合基质中，温度控制在^°C，前5d湿度控制在90%左右，以后逐渐降低湿度，直至将移栽苗置于自然条件下。有益效果
本发明对玉蝉花采用组织培养技术，具有以下优点
1、本发明针对玉蝉花原产地的气候特点，提高了组培过程中的光强度和并延长了光照周期，降低了培养温度，从而使培养环境更接近其原生地的气候，通过对初代培养基、继代培养基、增殖培养基、生根培养基配方的精确筛选，达到了增殖速度快、遗传性状稳定、繁殖系数高、试管苗生长旺盛的优良效果。2、在炼苗移栽中通过逐渐提高光照强度，并且在移栽过程中，逐渐降低湿度、严格控制温度，采用合适的基质配方，最终提高了生根试管苗的成活率。3、通过组织培养，其繁殖系数高，能周年繁殖，适合工厂化育苗，大大缩短了育种的时间。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明作进一步的说明，下述各实施例仅用于说明本发明，对本发明并没有限制。玉蝉花的组织培养方法，其特征在于该方法包括下列步骤
①外植体的选择在玉蝉花开花之前取花葶的茎段和分节点作为外植体；
②材料处理方法先用软毛刷将外植体表面的灰尘轻轻刷去，用流水冲洗1h后用紫外灯照射20 min，转入超净工作台，在超净工作台上先用70-75 %的乙醇浸泡10秒，然后用无菌水冲洗，再转入滴加了 2 3滴土温80的0. 1 %的升汞溶液中浸泡7min，用无菌水冲洗4次，最后在无菌条件下分割材料，茎段切割成0. 5 0. 6 cm长；
③初代培养在无菌的条件下将步骤②得到的外植体接种在初代培养基上，该培养基是在MS常规培养基中添加了 3. Omg/L的6-BA、l. 2mg/L的NAA，30mg/L的蔗糖，PH 5. 9，培养温度为对°0，光照周期13h/d，光强度为2100-22001UX，待培养出的外植体带芽量长至3 个时，即开始下一个阶段；
④继代培养将初代培养的生长健壮的外植体新芽剪下2cm左右接种在继代培养基上，该培养基是在3/4MS常规培养基中添加了 1. 3mg/L的6_BA、0. 4mg/L的IBA，25mg/L的蔗糖，PH 5. 9，培养温度为M°C，光照周期13h/d，光强度为2100-22001UX，待新芽长至2. 5cm 时，即开始下一个阶段；
⑤生根培养将继代培养的高度超过2.5cm的新苗剪下接种在生根培养基上，该培养基是在 1/2MS 常规培养基中添加了 0. 7mg/L 的 IAA、0. 5mg/L 的 NAA，0. 2mg/L 的 GA，28mg/L的蔗糖，PH 5. 9，培养温度为M°C，光照周期13h/d，光强度为2100-22001UX，待新苗长至 2. 3cm左右时，即开始下一个阶段；
⑥炼苗移栽将长高至10-15cm、长根> 5根的组培苗带瓶移至普通大棚内，放置1-3 天后打开瓶盖，在2548°C，湿度70-80 %，光强7 100-79001x条件下炼苗3_5天，炼苗完成后取出小苗洗净根部附着的培养基，移栽到经消毒的重量比腐殖土 草炭珍珠岩 =3:2:2的混合基质中，温度控制在^°C，前5d湿度控制在90%左右，以后逐渐降低湿度，直至将移栽苗置于自然条件下。 经过上述步骤的培养，玉蝉花的愈伤组织的萌动率达到了 96%，增殖倍数达到了 4. 35倍，生根率达到了 100%，而移栽成活率达到了 98%。
权利要求
1. 一种玉蝉花的组织培养方法，其特征在于该方法包括下列步骤①外植体的选择在玉蝉花开花之前取花葶的茎段和分节点作为外植体；②材料处理方法先用软毛刷将外植体表面的灰尘轻轻刷去，用流水冲洗1h后用紫外灯照射20 min，转入超净工作台，在超净工作台上先用70-75 %的乙醇浸泡10秒，然后用无菌水冲洗，再转入滴加了 2 3滴土温80的0. 1 %的升汞溶液中浸泡7min，用无菌水冲洗4次，最后在无菌条件下分割材料，茎段切割成0. 5 0. 6 cm长；③初代培养在无菌的条件下将步骤②得到的外植体接种在初代培养基上，该培养基是在MS常规培养基中添加了 3. Omg/L的6-BA、l. 2mg/L的NAA，30mg/L的蔗糖，PH 5. 9，培养温度为对°0，光照周期13h/d，光强度为2100-22001UX，待培养出的外植体带芽量长至3 个时，即开始下一个阶段；④继代培养将初代培养的生长健壮的外植体新芽剪下2cm左右接种在继代培养基上，该培养基是在3/4MS常规培养基中添加了 1. 3mg/L的6_BA、0. 4mg/L的IBA，25mg/L的蔗糖，PH 5. 9，培养温度为M°C，光照周期13h/d，光强度为2100-22001UX，待新芽长至2. 5cm 时，即开始下一个阶段；⑤生根培养将继代培养的高度超过2.5cm的新苗剪下接种在生根培养基上，该培养基是在 1/2MS 常规培养基中添加了 0. 7mg/L 的 IAA、0. 5mg/L 的 NAA，0. 2mg/L 的 GA，28mg/ L的蔗糖，PH 5. 9，培养温度为M°C，光照周期13h/d，光强度为2100-22001UX，待新苗长至 2. 3cm左右时，即开始下一个阶段；⑥炼苗移栽将长高至10-15cm、长根>5根的组培苗带瓶移至普通大棚内，放置1-3 天后打开瓶盖，在2548°C，湿度70-80 %，光强7 100-79001x条件下炼苗3_5天，炼苗完成后取出小苗洗净根部附着的培养基，移栽到经消毒的重量比腐殖土 草炭珍珠岩 =3:2:2的混合基质中，温度控制在^°C，前5d湿度控制在90%左右，以后逐渐降低湿度，直至将移栽苗置于自然条件下。
全文摘要
本发明公开了一种玉蝉花的组织培养方法，主要通过组织培养过程中初代培养、继代培养、增殖培养、生根培养以及炼苗移栽的步骤，达到了增殖速度快、遗传性状稳定、繁殖系数高、试管苗生长旺盛的优良效果，玉蝉花的愈伤组织的萌动率达到了96%，增殖倍数达到了4.35倍，生根率达到了100%，而移栽成活率达到了98%。
文档编号A01H4/00GK102524081SQ20121007036
公开日2012年7月4日 申请日期2012年3月17日 优先权日2012年3月17日
发明者李玉弟 申请人:常熟市尚湖农业生态园有限公司