专利名称：粗肋草的组织培养繁殖方法
技术领域：
本发明涉及粗肋草的组织培养繁殖方法。
技术背景-
粗肋草是天南星科粗肋草属Ug/ao"ema)植物的通称，原产于亚洲东南部的印度、泰国、 越南、菲律宾、马来西亚及印尼等地，为多年生常绿草本植物。粗肋草植株高度20 150厘米。 叶互生，披针形至狭卵形，叶长10 45厘米，叶宽4 16厘米。花小不明显，花序为佛焰花序， 佛焰苞白色或绿白色，果实为浆果，成熟时会变为红色。粗肋草观赏价值高，是一种优良的 观叶花卉，可作为高档观叶植物用于室内和庭园观赏。
粗肋草可用分株、扦插与种子繁殖等三种繁殖方式，分株繁殖方式速度慢，而种子繁殖 虽是选育新品种的有效手段，但所需时间长，由种子萌芽至成株时间需要2 3年的时间，并 且后代易性状分离，目前生产中常规繁殖大多以顶芽及茎段两种扦插法为主要的繁殖方式， 但该繁殖速度也有限，并且对性状优良的母株损伤很大。
目前未见对粗肋草进行组织培养，种苗大规模生产和专利申请的报道。 发明内容-
本发明提供了一种繁殖速度快，可在短期内获得大量试管苗，并且对母株损伤不大，能 保持母株优良性状的粗肋草的组织培养繁殖方法。
本发明主要应用植物组织细胞的全能性和植物组织培养技术，选择合适的外植体，消毒 方法，独特的培养基进行粗肋草的组织培养从而实现本发明目的。
本发明所述的粗肋草的组织培养繁殖方法，包括以下步骤
a. 材料选择选取生长旺盛的粗肋草幼茎为外植体；
b. 外植体的消毒和不定芽的诱导将外植体用水洗净，先在体积分数为70%~80%酒精 中浸泡30~60秒，再用质量体积百分浓度为0.1%~0.2%升汞溶液消毒8~10分钟，无 菌水冲洗4 5次，切成节段，接种到诱导培养基中，5 7天后取出，再次用质量体 积百分浓度为0.1%~0.2%升汞溶液消毒8~10分钟，无菌水冲洗4 5次，转入新的诱 导培养基中，直至外植体上形成不定芽，所述的诱导培养基为每升中含有6-苄基嘌 呤1.0 5.0毫克、萘乙酸0.2-1.0毫克、蔗糖20~30克、琼脂6 7克，其余成份为 MS ;
C.继代增殖将诱导出的不定芽切割后继代培养于增殖培养基中进行不定芽的增殖，所述的增殖培养基为每升中含有6-苄基嘌呤5.0~10.0毫克、萘乙酸0.2-1.0毫克、蔗 糖20~30克、琼脂6 7克，其余成份为MS;
d. 生根培养当芽高3 5厘米高时，切下接种到生根培养基上，所述的生根培养基为 每升含有6-苄基嘌呤0.2~2.0毫克、萘乙酸0.5~1.0毫克、活性炭0.5~1克、蔗糖20~30 克、琼脂6 7克，其余成份为1/2MS;
e. 试管苗移植当试管苗长至6 7厘米高时，在自然光照下炼苗7 10天，取出试管 苗，洗掉根部培养基，栽入由沙、珍珠岩、泥炭土等体积混合成的基质中，经常规培 养后得到栽培苗；
在上述a、 b、 c、 d四个步骤中，所用的培养基(诱导培养基、增殖培养基和生根培养基) pH5.5 5.8;培养条件培养温度24 30。C，光照度1500 20001x，光照12小时/天。
本发明中移栽后的试管苗注意浇水、遮荫、保温，成活率可达85%以上，大概40 天后就可上盆栽培。
本发明所述的用无菌水冲洗4 5次，主要是在无菌的环境下，将升汞冲洗干净。
本发明中所述的切成节段是将升汞消毒过后，无菌水冲洗干净的外植体最好切成1厘米 左右的节段。
本发明适用于粗肋草属植物的组织培养繁殖。
所述的MS为国际通用的培养基，其成分和配制方法参看谭文澄、戴策刚主编，《观赏植 物组织培养技术》，北京中国林业出版社，1991，所述的1/2MS是将MS中的大量元素和 微量元素减半，其它成分不变而形成的培养基。
本发明所述的在自然光照下炼苗，其条件如光照强度、温湿度等条件一般以不影响苗的
存活和生长。
应用本发明的外植体消毒方法，消毒成功率可达70~80%， 50-60天能在外植体上形成不 定芽。通过本发明的继代增值方法可以对不定芽进行增值， 一般45天为l个继代增殖周期， 每1个继代增殖周期后的不定芽的增殖倍数为2 4倍。不定芽在本发明的生根培养基中能够 正常生根，30天时生根率可达90°/。以上，每株苗有根数3 5条。
本发明的有益效果如下
本发明只需要简单的植物组织培养设备就能在120天内完成从外植体的选择到试管苗的 形成的一个周期，大大加快了粗肋草的繁殖速度，通过继代增值，每个继代周期可对不定芽 增值2 4倍，因此可以在短时间内获得大量的试管苗，应用本发明培养出的试管苗具有稳定 性高，苗壮，种苗品质好、抗性强、生长良好的特点，成活率可达85°/。以上，并且出苗快， 可大量满足市场的需求，而且本方法对母株损伤不大，能保持母株的优良性状。
具体实施方式
-实施例1
a. 材料选择在生长季节选取圆叶粗肋草"g/ao"e附araftm^mO幼嫩茎段为外植体。
b. 外植体的消毒和不定芽的诱导圆叶粗肋草的幼嫩茎段在自来水下冲洗干净后，先在体积 分数为70%酒精中浸泡30秒，再用质量体积百分浓度为0.P/。升汞溶液消毒8分钟，无菌 水冲洗4次，切成l厘米左右长的节段，接种到诱导培养基上，5天后取出节段再次用质 量体积百分浓度0.1%升汞溶液消毒8分钟，无菌水冲洗5次，后转入新的诱导培养基中， 消毒成功率为71%， 60天能在外植体上形成不定芽，所述的诱导培养基为每升中含有6-苄基嘌呤2.0毫克、萘乙酸0.2毫克、蔗糖20克、琼脂6克，其余成份为MS ;
c. 继代增殖将诱导出的不定芽切割后再继代培养在增殖培养基上，进行不定芽的增殖，一 般45天为1个继代增殖周期，每1个继代增殖周期后的增殖倍数为2.5倍，所述的增殖 培养基每升中含有为6-苄基嘌呤5.0毫克、萘乙酸0.5毫克、蔗糖20克、琼脂7克， 其余成份为MS;
d. 生根培养当芽高约3 5厘米高时，切下接种到生根培养基上，不定芽能正常生根， 生根率可达90%，每株苗有根数4.5条，所述的生根培养基为每升含有6-苄基嘌呤1.0 毫克、萘乙酸0.5毫克、活性炭0.5克、蔗糖20克、琼脂7克，其余成份为1/2MS
e. 试管苗移栽当试管苗长至6 7厘米高时，在自然光照下炼苗9天。然后打开瓶塞，用 镊子把试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由沙、珍珠岩、泥炭土等体积混合 成的基质中。
在上述a、 b、 c、 d步骤中所用的培养基pH 5.5-5.8;培养条件培养温度24 3(TC，光 照度1500 20001x,光照12小时/天。
移栽苗注意浇水、遮荫、保温，成活率可达85%以上，移栽后约40天后可上盆栽培，
从外植体的选择到试管苗的获得大概需要120天的时间。 实施例2
a. 材料选择在生长季节选取银王粗肋草"g/ao"ew" Silver King)幼嫩茎段为外植体。
b. 外植体的消毒和不定芽的诱导银王粗肋草的幼嫩茎段在自来水下冲洗千净后，先在75% 酒精中浸泡45秒，再用0.15%升汞溶液消毒10分钟，无菌水冲洗5次，切成l厘米左右 长的节段，接种到诱导培养基上，6天后取出节段，再次用0.15%升汞溶液消毒8分钟， 无菌水冲洗5次，后转入新的诱导培养基中，消毒成功率可达78%， 60天能在外植体上 形成不定芽，所述的诱导培养基为每升中含有6-苄基嘌呤3.0毫克、萘乙酸0.5毫克、 蔗糖25克、琼脂7克，其余成份为MS ;C.继代增殖将诱导出的不定芽切割后再继代培养在增殖培养基上，进行不定芽的增殖，一 般45天为1个继代增殖周期，每1个继代增殖周期后的增殖倍数为3倍，所述的增殖培 养基为每升中含有6-苄基嘌呤7.0毫克、萘乙酸0.5毫克、蔗糖25克、琼脂7克，其 余成份为MS;
d. 生根培养当芽高约3 5厘米高时，切下接种到生根培养基上，不定芽能正常生根， 生根率可达卯％,每株苗有根数5条，所述的生根培养基为每升含有6-苄基嘌呤0.5毫 克、萘乙酸0.8毫克、活性炭0.75克、蔗糖25克、琼脂6克，其余成份为1/2MS
e. 试管苗移栽当试管苗长至6 7厘米高时，在自然光照下炼苗7天。然后打开瓶塞，用 镊子把试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由沙、珍珠岩、泥炭土等体积混合 成的基质中。
在上述a、 b、 c、 d步骤中所用的培养基pH5.5 5.8，培养条件培养温度24 3(TC，光照 度1500 20001x，光照12小时/天。
移栽苗注意浇水、遮荫、保温，成活率可达90%以上，移栽后约40天后可上盆栽培。
从外植体的选择到试管苗的获得大概需要115天的时间。 实施例3
a. 材料选择在生长季节选取超红叶粗肋草"g/ao朋maTembaga Super Red)幼嫩茎段为外 植体。
b. 外植体的消毒和不定芽的诱导超红叶粗肋草的幼嫩茎段在自来水下冲洗干净后，先在
80%酒精中浸泡60秒，再用0.2。/。升汞溶液消毒8分钟，无菌水冲洗5次，切成l厘米左 右长的节段，接种到诱导培养基上，7天后取出节段，再次用0.1%升汞溶液消毒8分钟， 无菌水冲洗5次，后转入新的诱导培养基中，消毒成功率可达79%， 50天能在外植体上 形成不定芽，所述的诱导培养基为每升中含有6-苄基嘌呤5.0毫克、萘乙酸1.0毫克、 蔗糖30克、琼脂7克，其余成份为MS ;
c. 继代增殖将诱导出的不定芽切割后再继代培养在增殖培养基上，进行不定芽的增殖，一 般45天为1个继代增殖周期，每1个继代增殖周期后的增殖倍数为4倍，所述的增殖培 养基每升中含有为6-苄基嘌呤10.0毫克、萘乙酸1.0毫克、蔗糖30克、琼脂6克， 其余成份为MS;
d. 生根培养当芽高约3 5厘米高时，切下接种到生根培养基上，不定芽能正常生根， 生根率可达95%以上，每株苗有根数7条，所述的生根培养基为每升含有6-苄基嘌呤 2.0毫克、萘乙酸1.0毫克、活性炭1克、蔗糖30克、琼脂7克，其余成份为1/2MS;
e. 试管苗移栽当试管苗长至6 7厘米高时，在自然光照下炼苗10天。然后打开瓶塞，用镊子把试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由沙、珍珠岩、泥炭土等体积混 合成的基质中。
在上述a、 b、 c、 d步骤中所用的培养基pH5.5 5.8，培养条件培养温度24 30。C，光照 度1500 20001x，光照12小时/天。
移栽苗注意浇水、遮荫、保温，成活率可达95%以上，移栽后约40天后可上盆栽培。 从外植体的选择到试管苗的获得大概需要110天的时间。
权利要求
1.一种粗肋草的组织培养繁殖方法，其特征在于包括以下步骤a.材料选择选取生长旺盛的粗肋草幼茎为外植体；b.外植体的消毒和不定芽的诱导将外植体用水洗净，先在体积分数为70％～80％酒精中浸泡30～60秒，再用质量体积百分浓度为0.1％～0.2％升汞溶液消毒8～10分钟，无菌水冲洗4～5次，切成节段，接种到诱导培养基中，5～7天后取出，再次用质量体积百分浓度为0.1％～0.2％升汞溶液消毒8～10分钟，无菌水冲洗4～5次，转入新的诱导培养基中，直至外植体上形成不定芽，所述的诱导培养基为每升中含有6-苄基嘌呤1.0～5.0毫克、萘乙酸0.2～1.0毫克、蔗糖20～30克、琼脂6～7克，其余成份为MS；c.继代增殖将诱导出的不定芽切割后继代培养于增殖培养基中进行不定芽的增值，所述的增殖培养基为每升中含有6-苄基嘌呤5.0～10.0毫克、萘乙酸0.2～1.0毫克、蔗糖20～30克、琼脂6～7克，其余成份为MS；d.生根培养当芽高3～5厘米高时，切下接种到生根培养基上，所述的生根培养基为每升含有6-苄基嘌呤0.2～2.0毫克、萘乙酸0.5～1.0毫克、活性炭0.5～1克、蔗糖20～30克、琼脂6～7克，其余成份为1/2MS；e.试管苗移植当试管苗长至6～7厘米高时，在自然光照下炼苗7～10天，取出试管苗，洗掉根部培养基，栽入由沙、珍珠岩、泥炭土等体积混合成的基质中，经常规培养后得到栽培苗；在上述a、b、c、d步骤中，所用的培养基pH 5.5～5.8；培养条件培养温度24～30℃，光照强度1500～2000lx，光照12小时/天。
2. 根据权利要求1所述的粗肋草的组织培养繁殖方法，其特征在于所述的b步骤中的切成 节段是将外植体切成1厘米长的节段。
3. 根据权利要求1或2所述的粗肋草的组织培养繁殖方法，其特征在于a步骤所述的外植 体为圆叶粗肋草Xgtewema raf训rfw/r7、银王粗肋草^g/卯newa Silver King或超红叶粗肋 草乂g/tro"ewfl Tembaga Super Red的幼嫩茎段。
全文摘要
本发明公开了一种粗肋草的组织培养繁殖方法，旨在提供一种繁殖速度快，可在短期内获得大量试管苗，并且对母株损伤不大，能保持母株优良性状的粗肋草的组织培养繁殖方法。本方法包括选择生长旺盛的粗肋草幼茎为外植体，对外植体进行消毒，在诱导培养基中进行不定芽的诱导，再将不定芽接入增殖培养基中进行继代增殖，当芽高3～5厘米高时，切下接种到生根培养基上生根培养，当试管苗长至6～7厘米高时，在自然光照下炼苗7～10天，取出试管苗，洗掉根部培养基，栽入由沙、珍珠岩、泥炭土等体积混合成的基质中，经常规培养后得到栽培苗。本发明可以为市场提供大量的粗肋草试管苗。
文档编号A01H4/00GK101536674SQ20091003898
公开日2009年9月23日 申请日期2009年4月24日 优先权日2009年4月24日
发明者吴坤林, 张建霞, 曾宋君, 虬 李, 俊 段, 陈之林 申请人:中国科学院华南植物园