专利名称：：草莓腋芽组织培养的方法
技术领域：
：本发明涉及植物组织培养领域，特别涉及一种用草莓腋芽进行组织培养的方法。
背景技术：
：草莓属多年生草本植物，栽培生产中主要靠匍匐茎进行营养繁殖，经多年种植后，由于感染多种病毒，致使品质及产量降低，经济效益明显下降。目前，草莓组培苗已在农业生产中广泛应用。它对于降低生产成本、提高草莓产品的品质、提高农民经济收入具有举足轻重的作用。利用组培快繁技术可对草莓脱毒苗进行快速繁殖及推广，出苗整齐，可进行周年生产，不受季节限制，实现新品种的工厂化育苗并迅速推广。现有的研究中，采用的外植体为莲尖、叶片、叶柄、根、花药、花瓣、托叶、子房等，虽然都获得了成功，但均存在各种各样的缺陷。例如以茎尖为外植体进行的快繁，主要存在繁殖系数较低的问题；而以叶片、叶柄、根、花药、花瓣、托叶、子房等为外植体，虽然繁殖系数有较大的提高，但存在变异较大的问题，不能很好地保持原有品种的种性。在前人研究中，多采用的外植体为茎尖、叶片、叶柄、根、花药、花瓣、托叶、子房等，虽然都获得了成功，但均存在各种各样的缺陷。例如以茎尖为外植体进行的快繁，主要存在繁殖系数较低的问题；而以叶片、叶柄、根、花药、花瓣、托叶、子房等为外植体，虽然繁殖系数有较大的提高，但存在变异较大的问题，不能很好地保持原有品种的种性。
发明内容本发明的目的在于克服上述现有技术的不足，提供一种草莓的组织培养的方法。本发明提供的草莓的组织培养的方法，是以草莓带托叶的短缩茎为外植体进行组织培养，得到草莓植株。上述草莓带托叶的短缩茎是将草莓幼苗去除短缩茎内部的生长点、叶片和叶柄后，得到的含有托叶的短缩茎。本发明的草莓的组织培养的方法，包括以下步骤1)将上述外植体置于诱导腋芽萌发培养基上培养，诱导腋芽萌发，得到萌发的腋芽；2)将上述步骤1)得到的腋芽转接到生根培养基上培养，诱导生根，得到完整再生植株。上述诱导腋芽萌发培养基是在MS基本培养液中添加6-BA、NAA、碳源和凝胶剂得到的固体培养基；其中6-BA的终浓度是0.5-1.5mg/L,NAA的终浓度是0.1-0.3mg/L；MS基本培养液的溶剂是水、溶质如表1所示。表1.MS基本培养液的溶质<table>tableseeoriginaldocumentpage4</table>上述诱导腋芽萌发培养基中6-BA的终浓度最好是1.Omg/L,NAA的终浓度最好是0.2mg/L。上述腋芽的生根培养是在生根培养基中进行的，该生根培养基是在1/2MS基本培养液中添加IBA、碳源和凝胶剂得到的固体培养基；其中IBA的终浓度是0.lmg/L；上述1/2MS基本培养液的溶剂是水、溶质如表2所示。表2.1/2MS基本培养液的溶质<table>tableseeoriginaldocumentpage4</table><table>tableseeoriginaldocumentpage5</table>上述草莓植株可以是不同品种的草莓植株，特别是甜查理、丰香、童子一号、红颜。上述诱导腋芽萌发培养基和生根培养基中的碳源均可为葡萄糖、麦芽糖或蔗糖等；在诱导腋芽萌发培养基中优选为蔗糖，蔗糖在诱导腋芽萌发培养基中的终浓度可为30g/L；在生根培养基中优选也是蔗糖，蔗糖在生根培养基中的终浓度可为15g/L。上述诱导腋芽萌发培养基和生根培养基中的凝胶剂均可为琼脂、卡拉胶或Gelrite等；在两培养基中均可优选为琼脂，琼脂的终浓度均可为8_9g/L。在本发明中培养基的凝胶剂的用量以能达到培养基的硬度为基础，可适当调整用量。本发明是以草莓无菌的带托叶的短缩茎为外植体，先诱导草莓的腋芽萌发，进而诱导生根获得再生植株。本发明中腋芽的萌发率均达90.0%以上，生根率可达92.5%以上。本发明可用于多个品种草莓的快速繁殖，如甜查理、童子一号、丰香等。本发明以腋芽为基础进行快速繁殖，不仅繁殖系数较高，平均可达5.8以上，而且很好的保持了原由品种的特性，尤其对转基因珍贵草莓植株的短期扩繁，种质库保存植株的快繁殖具有广阔的应用前景。具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不限于以下实施例。下述实施例中，如无特殊说明，均为常规方法。实施例1、草莓腋芽组织培养获得再生植株一、外植体的预处理在无菌的条件下，将无菌的甜查理幼苗(购自北京市小汤山特菜基地)的叶片、叶柄全部剪除，只保留基部短缩茎和托叶部分，然后用镊子小心将包裹在短缩茎内部的生长点去除，即得到用于组织培养的带托叶的短缩茎(外植体)。二、腋芽的萌发及统计观察1、腋芽的萌发将上述步骤一中得到的外植体接种到诱导腋芽萌发培养基上，每瓶诱导腋芽萌发培养基上接种3-5个外植体，在光照强度为2000Lx，光照培养时间为14小时，温度为25°C的条件下，培养两周左右，得到萌发的腋芽。上述诱导腋芽萌发培养基是在MS基本培养液中添加6-BA、NAA、碳源和凝胶剂得到的固体培养基；其中6-BA的终浓度是1.Omg/L,NAA的终浓度是0.2mg/L；碳源为终浓度是30g/L的蔗糖，凝胶剂为终浓度是8g/L的琼脂；MS基本培养液的溶剂是水、溶质如表1所示，该培养基的PH为5.9。2、统计观察实验重复3次，统计观察上述步骤二中步骤1的腋芽萌发情况，在培养16天时对腋芽进行统计观察，实验结果见下表3。接种的外植体培养两周左右，在叶腋处即可产生5-6个腋芽；由下表3可知三次重复实验腋芽的萌发率分别为90.0%,91.4%和94.3%，计算增殖倍数平均为5.6。表3.腋芽的萌发情况<table>tableseeoriginaldocumentpage6</table>三、生根培养及统计观察1、生根培养将上述步骤二中步骤1得到的生长至1-2厘米的腋芽转接到生根培养基上，在温度为25°C，光照强度为2000LX，光照时间为12小时/天的培养条件下进行诱导生根培养14天后，得到已生根的再生植株。上述生根培养基是在1/2MS基本培养液中添加IBA、碳源和凝胶剂得到的固体培养基；其中IBA的终浓度是0.lmg/L，碳源是蔗糖，蔗糖的终浓度是15g/L，凝胶剂是琼脂，琼脂的终浓度是8g/L；1/2MS基本培养液的溶剂是水、溶质如表2所示，该生根培养基的pH为5·9ο2、统计观察实验重复3次，统计观察上述步骤三的步骤1中生根培养的生根情况，实验结果见下表4，从表4可以看出本实施例生根培养的生根率平均可达95.4%，每个腋芽平均生根3.7根。表4.生根培养的生根率<table>tableseeoriginaldocumentpage7</table>实施例2、童子一号草莓腋芽组织培养本实施例与实施例1的不同之处在于采用的外植体为无菌童子一号(购自北京市小汤山特菜基地)草莓幼苗的带托叶的短缩茎为外植体，本实施例的外植体带托叶的短缩茎的获得方法与实施例1的方法相同，其余步骤与实施例1的一致。本实施例的统计观察结果如下1、腋芽的萌发情况在培养16天时对腋芽进行统计观察，实验结果见下表5。表5.腋芽的萌发情况<table>tableseeoriginaldocumentpage7</table>2、生根情况在培养14天时对生根情况进行统计观察，实验结果见下表6。表6.生根培养的生根率<table>tableseeoriginaldocumentpage7</table><table>tableseeoriginaldocumentpage8</table>由上述表5和表6可知，童子一号品种的草莓的带托叶的短缩茎为外植体进行组织培养，腋芽的萌发率可达92.1%以上，生根率可达95.0%以上，每个腋芽的平均生根数为3.9根；本实施例组织培养的繁殖系数约为5.8。实施例3、丰香草莓腋芽组织培养本实施例与实施例1的不同之处在于采用的外植体为丰香(购自北京市小汤山特菜基地)草莓幼苗的带托叶的短缩茎为外植体，本实施例的外植体带托叶的短缩茎的获得方法与实施例1的方法相同，其余步骤也与实施例1的一致。本实施例的统计观察结果如下1、腋芽的萌发情况在培养16天时，实验结果见下表7。腋芽的萌发率分别为100.0%、94.3%和96.2%。表7.腋芽的萌发情况<table>tableseeoriginaldocumentpage8</table>2、生根情况在培养14天时对生根情况进行统计观察，实验结果见下表8。表8.生根培养的生根率<table>tableseeoriginaldocumentpage8</table>80<table>tableseeoriginaldocumentpage9</table>由上述表7和表8可知，丰香品种的草莓的带托叶的短缩茎为外植体进行组织培养，腋芽的萌发率可达94.3%以上，生根率可达92.5%以上，每个腋芽的平均生根数为3.8条；本实施例组织培养的繁殖系数为6.0。权利要求草莓的组织培养的方法，是以草莓带托叶的短缩茎为外植体进行组织培养，得到草莓植株。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述草莓带托叶的短缩茎是将草莓幼苗去除短缩茎内部的生长点、叶片和叶柄后，得到的含有托叶的短缩茎。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于所述方法包括以下步骤1)将权利要求1或2所述的外植体置于诱导腋芽萌发培养基上培养，诱导腋芽萌发，得到萌发的腋芽；2)将上述步骤1)得到的腋芽转接到生根培养基上培养，诱导生根，得到完整再生植株。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于步骤1)中，所述诱导腋芽萌发培养基是在MS基本培养液中添加6-BA、NAA、碳源和凝胶剂得到的固体培养基；其中6-BA的终浓度是0.5-1.5mg/L,NAA的终浓度0.1-0.3mg/L；所述MS基本培养液的溶剂是水、溶质如表1所示。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于所述诱导腋芽萌发培养基中6-BA的终浓度是1.Omg/L,NAA的终浓度是0.2mg/L。6.根据权利要求4或5所述的方法，其特征在于所述诱导腋芽萌发培养基中凝胶剂是琼脂、卡拉胶或Gelrite，优选为琼脂，琼脂在诱导腋芽萌发培养基的终浓度为8_9g/L；所述碳源是葡萄糖、麦芽糖或蔗糖，优选为蔗糖，蔗糖在诱导腋芽萌发培养基中的终浓度为30g/L。7.根据权利要求3-6中任一所述的方法，其特征在于步骤2)中，所述生根培养基是在1/2MS基本培养液中添加IBA、碳源和凝胶剂得到的固体培养基；其中IBA的终浓度是0.lmg/L；所述1/2MS基本培养液的溶剂是水、溶质如表2所示。8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于所述生根培养基中凝胶剂是琼脂、卡拉胶或Gelrite，优选为琼脂，琼脂在生根培养基中的终浓度为8_9g/L；所述碳源是葡萄糖、麦芽糖或蔗糖，优选为蔗糖，蔗糖在生根培养基中的终浓度为15g/L。全文摘要本发明公开了一种草莓腋芽组织培养的方法。本发明的草莓腋芽组织培养的方法是以带托叶的短缩茎作为外植体进行组织培养，先诱导草莓的腋芽萌发，进而诱导生根获得再生植株。本发明中腋芽的萌发率均达90.0％以上，生根率可达92.5％以上。本发明以腋芽为基础进行快速繁殖，不仅繁殖系数较高，而且很好的保持了原由品种的特性，尤其对转基因珍贵草莓植株的短期扩繁，种质库保存植株的快繁殖具有广阔的应用前景；另外，还可作为一种新的转基因途径加以运用。文档编号A01H4/00GK101836591SQ201010197820公开日2010年9月22日申请日期2010年6月3日优先权日2010年6月3日发明者刘莉莎,王玉珏,赵永钦,郭仰东申请人:中国农业大学