专利名称：提高卤虫卵孵化率的方法
技术领域：
本发明涉及一种用于水产养殖活体饲料的生产方法，特别是一种提高卤虫卵孵化率的方法。
背景技术：
卤虫无节幼体一般用作水产养殖的活体饲料，尤其是作为海鱼、海虾幼虫阶段早期的活体饲料。市场上一般没有卤虫无节幼体这样的活体饲料，只有卤虫卵，无节幼体由卤虫卵孵化得到。卤虫卵的孵化可以在孵化培养基中完成。卤虫孢卵经充分脱水并在低温无氧无光照的干燥环境下可以存活很长时间甚至长达几年。超长的存储能力以及较短的时间 (24小时内)即可产生自由游动的无节幼体的特性，使其成为水产养殖的最便利的活体饲料来源。卤虫卵是从自然界如海边盐田和内陆盐湖中收集的。在这些收集到的卤虫卵中， 存在不同比例的休眠卵和滞育卵。将卤虫卵经纯化以去除碎渣、洗涤以去除盐分、最后进行干燥处理和冷室保存，使其处于休眠状态。卤虫卵的质量是通过评估参数来判定的，其中卤虫卵的可孵化能力最受人们的关注，因为它直接表明了在人工孵育条件下，从一定数量的卤虫卵中可以获得的活体饲料(无节幼体)的数量。卤虫卵的可孵化能力通常用孵化百分数(H% )来表示，即指从100个完整卤虫卵中孵化出的自由游动的无节幼体的个数。处于滞育或休眠状态下的卤虫卵不能继续孵化成自由游动的无节幼体，除非它们处于促进孵化的条件下。因此卤虫卵的孵化需要在孵化培养基中完成，孵化培养基通常为经过处理的清洁海水。在孵化过程中，控制孵化培养基的非生物参数包括盐度、PH值、氧气浓度和水温。目前各生产单位通常采用的参数范围为盐度5 35g/升；PH >8 ；氧气浓度> 5g/L ；水温25 ^°C。实际上卤虫卵的孵化是一个极其复杂的过程，通常包括三个阶段前发期发育、伞形期和实际孵化期。但是影响卤虫卵孵化过程的因素很多，按照上述给定的孵化条件进行的孵化过程往往不能达到预期的孵化效果，因此需要采取特殊的滞育失活方法，例如延长干燥卤虫卵的冷冻存放时间、重复吸水-脱水循环、在特殊化学物质如过氧化氢溶液中短时间孵化等。目前大多使用过氧化氢溶液来增加卤虫卵的孵化百分数，需要在不同条件下进行大量的试验才能获得最适宜的过氧化氢溶液浓度和处理时间的参数。 但是通过上述方法获得的最适宜参数并不具有普遍意义，因为对不同卤虫株系或同一株系不同批次的卤虫卵而言，最适宜参数是变化的。以往的方法是一次性加入足够的过氧化氢，培养基环境会在极短的时间内发生剧烈变化，采用过氧化氢溶液处理卤虫卵的缺点是1)使用前针对不同卤虫株系或同一株系不同批次的卤虫卵，需要进行大量的试验确定最适宜参数，而且为了获得理想的孵化效果， 操作时还必须严格控制在该参数下进行，这给使用者带来极大的不便；2)实施过程中需要把水合后的卤虫卵转移到过氧化氢溶液和相应的孵化培养基中，而且这些步骤的进行对实施时间的要求非常严格，使实施过程极其繁琐复杂；3)卤虫卵在经过过氧化氢溶液后，必须及时用水洗涤以去除残存的过氧化氢，甚至需要进行中和处理，势必增加处理成本。另外一种采用过氧化氢的处理方法是在孵化培养基中直接添加能产生过氧化氢的固体化合物如过硼酸盐、过碳酸盐、过氧化镁或过氧化钙等，但采用该方法的最大缺点是对孵化培养基的PH值改变较大，过高的PH值有可能造成卤虫无节幼体的死亡。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术中的不足，提供一种孵化效率高且方便易行的从卤虫卵生产自由游动的卤虫无节幼体的方法。为此，本发明的技术方案如下一种提高卤虫卵孵化率的方法，所述卤虫卵的孵化在孵化培养基中进行，其特征在于在所述孵化培养基中加入葡萄糖氧化酶和葡萄糖，所述葡萄糖氧化酶的添加量为 10 100mg/L孵化培养基，所述葡萄糖的添加量为30 80mg/L孵化培养基，所述卤虫卵在所述孵化培养基中的密度< 6g干卤虫卵/L孵化培养基。所述葡萄糖氧化酶以固体粉末形式与所述卤虫卵按比例混合后一起包装，使用时同时加入到所述孵化培养基中。所述葡萄糖氧化酶粘贴或包裹在所述卤虫卵上。所述葡萄糖氧化酶还可以以固体形式与所述卤虫卵分开单独包装，使用时直接加入到所述孵化培养基中。此时，向所述孵化培养基中加入所述葡萄糖氧化酶的时间为所述卤虫卵孵化开始后10小时内，优选为5小时内。优选的是，所述卤虫卵的密度为2. 5 5g干卤虫卵/L孵化培养基；所述葡萄糖氧化酶的添加量为30 60mg/L孵化培养基。优选的是，所述葡萄糖与所述葡萄糖氧化酶同时加入到所述孵化培养基中。所述葡萄糖的添加量最好是80mg/L孵化培养基。本发明的优点是由于在孵化培养基中加入的葡萄糖氧化酶，能够破坏卤虫卵的滞育机制，促使滞育卵在孵化期间产生自由游动的卤虫无节幼体，可明显提高孵化效率，利用本发明提供的方法M小时内卤虫卵的孵化率可以达到48小时可孵化量的90%以上。
具体实施例方式下面以500公斤卤虫卵为例，对本发明的提高卤虫卵孵化率的方法进行详细说明。所述卤虫卵去除了杂质、盐分和空壳并进行了干燥处理。孵化培养基为经过处理的清洁海水，其非生物参数为盐度20克溶解盐/升；PH值8. 2 ；氧气浓度3克/升；温度
。采用向培养基中添加葡萄糖氧化酶孵化自由游动的卤虫无节幼体的方法并达到最高的孵化率，首先通过试验确定最适宜的孢囊密度和葡萄糖氧化酶的添加量。需要说明的是，对于不同批次的卤虫卵最好在向孵化培养基中加入萄糖氧化酶的同时补充葡萄糖、果糖或蜂蜜，优选补充葡萄糖，以提高孵化率。葡萄糖的添加量为30 80mg/L孵化培养基。对于不同批次的卤虫卵，所需要的葡萄糖的量并不相同。但是我们发现，在一定的葡萄糖浓度为30 80mg/L孵化培养基的范围内，随着葡萄糖加入量的增加， 对孵化并没有副作用，所以在孵化培养基中通常直接添加30 80mg/L葡萄糖。在下面的实施例中，在向孵化培养基中加入葡萄糖氧化酶的同时，加入80mg/L孵化培养基的葡萄糖。取本批卤虫卵中的50克作如下实验
1)确定最适宜的孢囊密度将卤虫卵按1 6g干卤虫卵/L孵化培养基的不同孢囊密度分组，在相同的孵化培养基中，加入相同重量的葡萄糖氧化酶，其加入量为30mg/L孵化培养基，在相同的孵化时间(20小时)，得到不同孢囊密度的孵化率如下
权利要求
1.一种提高卤虫卵孵化率的方法，所述卤虫卵的孵化在孵化培养基中进行，其特征在于在所述孵化培养基中加入葡萄糖氧化酶和葡萄糖，所述葡萄糖氧化酶的添加量为10 100mg/L孵化培养基，所述葡萄糖的添加量为30 80mg/L孵化培养基，所述卤虫卵在所述孵化培养基中的密度< 6g干卤虫卵/L孵化培养基。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述葡萄糖氧化酶以固体粉末形式与所述卤虫卵按比例混合后一起包装，使用时同时加入到所述孵化培养基中。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述葡萄糖氧化酶以固体形式与所述卤虫卵分开单独包装，使用时直接加入到所述孵化培养基中。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于向所述孵化培养基中加入所述葡萄糖氧化酶的时间为所述卤虫卵孵化开始后10小时内。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于向所述孵化培养基中加入所述葡萄糖氧化酶的时间为所述卤虫卵孵化开始后5小时内。
6.根据权利要求1 5中任一项所述的方法，其特征在于所述卤虫卵的密度为2.5 5g干卤虫卵/L孵化培养基。
7.根据权利要求1 5中任一项所述的方法，其特征在于所述葡萄糖氧化酶的添加量为30 60mg/L孵化培养基。
8.根据权利要求1 5中任一项所述的方法，其特征在于所述葡萄糖与所述葡萄糖氧化酶同时加入到所述孵化培养基中。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于所述葡萄糖的添加量为80mg/L孵化培养基。
全文摘要
本发明公开了一种提高卤虫卵孵化率的方法，所述卤虫卵的孵化在孵化培养基中进行，在所述孵化培养基中加入葡萄糖氧化酶和葡萄糖，所述葡萄糖氧化酶的添加量为10～100mg/L孵化培养基，所述葡萄糖的添加量为30～80mg/L孵化培养基，所述卤虫卵在所述孵化培养基中的密度≤6g干卤虫卵/L孵化培养基。由于在孵化培养基中加入的葡萄糖氧化酶能够促使滞育卵在孵化期间产生自由游动的卤虫无节幼体，因此可明显提高孵化效率，利用本发明提供的方法，24小时内卤虫卵的孵化率可以达到48小时可孵化量的90％以上。
文档编号A01K67/033GK102524196SQ20121008023
公开日2012年7月4日 申请日期2012年3月23日 优先权日2012年3月23日
发明者何家瑞, 李艳, 樊昕宇 申请人:天津海友佳音生物科技股份有限公司