专利名称：四倍体白花除虫菊种子的培育方法
技术领域：
本发明属于植物育种工程技术领域，涉及一种四倍体白花除虫菊种子的培育方法。
背景技术：
普通的白花除虫菊为二倍体，其染色体数量为18条，二倍体的白花除虫菊中除虫菊素有效成分含量低，加工效益不高；四倍体的白花除虫菊染色体数量为36条，加工利用的除虫菊素有效成分含量较高，种植加工能够获得更好的经济效益。目前，植物多倍体获取的方法主要是通过外植体诱导，外植体诱导四倍体的白花除虫菊试验要求严苛，投入资金和工作量大，成功率不高
发明内容
针对现有技术中利用外植体诱导获得四倍体的白花除虫菊，存在试验要求严苛，投入工作量大、成本高，成功率低的问题，本发明提供一种四倍体白花除虫菊种子的培育方法，其技术方案包括以下步骤
四倍体白花除虫菊种子的培育方法，其特征在于包括以下步骤
(a)准备育苗基质将泥炭和珍珠岩按照体积比31混合均匀，再装放到高压灭菌锅中进行高温高压灭菌，控制高温高压灭菌的条件为压力O. 15MP、温度121°C，育苗基质在此压力和温度条件下灭菌O. 5-2小时，灭菌结束以后得到育苗基质；
(b)准备种子挑选普通白花除虫菊优良品种的种子，挑选的种子要求饱满无虫眼；
(c)准备试剂准备好秋水仙素，用无菌水将秋水仙素配制成浓度为600-1000mg/L的溶液，然后将配制好的秋水仙素溶液装放到烧杯中；
Cd)种子处理将挑选好的白花除虫菊的种子放入装有上述秋水仙素溶液的烧杯中浸泡，将浸泡有白花除虫菊种子的烧杯放置在18-25°C的温室中，在此温度条件下浸泡24-48小时；
浸泡结束后，把白花除虫菊的种子从秋水仙素溶液中取出来，然后用无菌水冲洗上述用秋水仙素溶液浸泡过的白花除虫菊的种子,冲洗次数为5-8遍；
(e)播种准备好发芽盒，将(a)步骤中准备好的育苗基质装填到发芽盒中，育苗基质在发芽盒中装填的厚度为2. 5-5cm，将冲洗好的白花除虫菊的种子播种在发芽盒中的基质上，在播种有白花除虫菊种子的基质上喷洒少量的无菌水，保持基质湿润；
(f)培养将播种有白花除虫菊种子的发芽盒放置到智能光照培养箱中培养，调节控制智能光照培养箱的温度为20土1°C、光照强度为1500-2000Lex、光照时间为10_16hr/d，在此条件下培养20-25天，白花除虫菊的种子萌芽以后逐渐长高，得到高度为3-5cm的小苗；
(g)培养壮苗准备好穴盘，在穴盘中装入(a)步骤中准备好的育苗基质，将上述培养得到的高度为3-5cm的小苗从发芽盒中取出来，然后移栽到穴盘中的基质上，浇上定根水保持基质湿润，将移栽有小苗的穴盘放置到温棚中进行穴盘培养壮苗，调节控制温棚内穴盘培养的温度为昼温20-25°C，夜温16-18°C，自然光照8-10hr/d，在此温光条件下穴盘培养45-50天得到壮苗；
(h)制作根尖染色体压片将得到的每一株壮苗进行编号，然后贴上标签，用剪刀剪取壮苗的根尖并编号，根尖的编号与所属壮苗的编号相对应，剪取的根尖长度为0. 8-1. Ocm,将剪取得到的根尖制作成根尖染色体压片；
(i)筛选获得四倍体植株将制作得到的根尖染色体压片放到显微镜下观察其染色体的数量，筛选出染色体数量为36条的压片，根据筛出的压片根尖编号挑选出对应的壮苗，该壮苗为四倍体植株，其染色体数量为36条；
(j)栽培和良种扩繁将挑选出来的四倍体壮苗进行隔离种植，按照常规方法栽培管理8-9个月后，收获得到四倍体白花除虫菊的种子，将得到的种子进行制种栽培，以后扩繁得到大量的四倍体白花除虫菊种子。 本发明操作简便容易，成本低、效率高，能大量处理白花除虫菊的种子，培育时间短，节省育种时间，是一种较快速、较简便地获取大量四倍体白花除虫菊植株的方法，用得到的四倍体植株生产出来的种子栽培出来的除虫菊花朵含量高，能产生更好的经济效益。
具体实施例实施例I
一种四倍体白花除虫菊种子的培育方法，其技术方案包括以下步骤
(a)准备育苗基质将泥炭和珍珠岩按照体积比31混合均匀，再装放到高压灭菌锅中进行高温高压灭菌，控制高温高压灭菌的条件为压力0. 15MP、温度121°C，育苗基质在此压力和温度条件下灭菌0. 5小时，灭菌结束以后得到育苗基质；
(b)准备种子挑选普通白花除虫菊优良品种的种子，挑选的种子要求饱满无虫眼；
(c)准备试剂准备好秋水仙素，用无菌水将秋水仙素配制成浓度为600mg/L的溶液，然后将配制好的秋水仙素溶液装放到烧杯中；
Cd)种子处理将挑选好的白花除虫菊的种子放入装有上述秋水仙素溶液的烧杯中浸泡，将浸泡有白花除虫菊种子的烧杯放置在18°C的温室中，在此温度条件下浸泡48小时；浸泡结束后，把白花除虫菊的种子从秋水仙素溶液中取出来，然后用无菌水冲洗上述用秋水仙素溶液浸泡过的白花除虫菊的种子，冲洗次数为5遍；
(e)播种准备好发芽盒，将(a)步骤中准备好的育苗基质装填到发芽盒中，育苗基质在发芽盒中装填的厚度为2. 5cm，将冲洗好的白花除虫菊的种子播种在发芽盒中的基质上，在播种有白花除虫菊种子的基质上喷洒少量的无菌水，保持基质湿润；
(f)培养将播种有白花除虫菊种子的发芽盒放置到智能光照培养箱中培养，调节控制智能光照培养箱的温度为19°C、光照强度为1500Lex、光照时间为16hr/d，在此条件下培养25天，白花除虫菊的种子萌芽以后逐渐长高，得到高度为3-5cm的小苗；
(g)培养壮苗准备好穴盘，在穴盘中装入(a)步骤中准备好的育苗基质，将上述培养得到的高度为3-5cm的小苗从发芽盒中取出来，然后移栽到穴盘中的基质上，浇上定根水保持基质湿润，将移栽有小苗的穴盘放置到温棚中进行穴盘培养壮苗，调节控制温棚内穴盘培养的温度为昼温20°C，夜温16°C，自然光照10hr/d，在此温光条件下穴盘培养50天得到壮苗；(h)制作根尖染色体压片将得到的每一株壮苗进行编号，然后贴上标签，用剪刀剪取壮苗的根尖并编号，根尖的编号与所属壮苗的编号相对应，剪取的根尖长度为O. 8cm，将剪取得到的根尖制作成根尖染色体压片；
(i)筛选获得四倍体植株将制作得到的根尖染色体压片放到显微镜下观察其染色体的数量，筛选出染色体数量为36条的压片，根据筛出的压片根尖编号挑选出对应的壮苗，该壮苗为四倍体植株，其染色体数量为36条；
(j )栽培和良种扩繁将挑选出来的四倍体壮苗进行隔离种植，按照常规方法栽培管理8个月后，收获得到四倍体白花除虫菊的种子，将得到的种子进行制种栽培，以后扩繁得到大量的四倍体白花除虫菊种子。 实施例2
一种四倍体白花除虫菊种子的培育方法，其技术方案包括以下步骤 (a)准备育苗基质将泥炭和珍珠岩按照体积比31混合均匀，再装放到高压灭菌锅中进行高温高压灭菌，控制高温高压灭菌的条件为压力O. 15MP、温度121°C，育苗基质在此压力和温度条件下灭菌2小时，灭菌结束以后得到育苗基质；
(b)准备种子挑选普通白花除虫菊优良品种的种子，挑选的种子要求饱满无虫眼；
(c)准备试剂准备好秋水仙素，用无菌水将秋水仙素配制成浓度为1000mg/L的溶液，然后将配制好的秋水仙素溶液装放到烧杯中；
Cd)种子处理将挑选好的白花除虫菊的种子放入装有上述秋水仙素溶液的烧杯中浸泡，将浸泡有白花除虫菊种子的烧杯放置在25°C的温室中，在此温度条件下浸泡24小时；
浸泡结束后，把白花除虫菊的种子从秋水仙素溶液中取出来，然后用无菌水冲洗上述用秋水仙素溶液浸泡过的白花除虫菊的种子，冲洗次数为8遍；
(e)播种准备好发芽盒，将(a)步骤中准备好的育苗基质装填到发芽盒中，育苗基质在发芽盒中装填的厚度为5cm，将冲洗好的白花除虫菊的种子播种在发芽盒中的基质上，在播种有白花除虫菊种子的基质上喷洒少量的无菌水，保持基质湿润;
(f)培养将播种有白花除虫菊种子的发芽盒放置到智能光照培养箱中培养，调节控制智能光照培养箱的温度为21°C、光照强度为2000Lex、光照时间为lOhr/d，在此条件下培养20天，白花除虫菊的种子萌芽以后逐渐长高，得到高度为3-5cm的小苗；
(g)培养壮苗准备好穴盘，在穴盘中装入(a)步骤中准备好的育苗基质，将上述培养得到的高度为3-5cm的小苗从发芽盒中取出来，然后移栽到穴盘中的基质上，浇上定根水保持基质湿润，将移栽有小苗的穴盘放置到温棚中进行穴盘培养壮苗，调节控制温棚内穴盘培养的温度为昼温25°C，夜温18°C，自然光照8hr/d，在此温光条件下穴盘培养45天得到壮苗；
(h)制作根尖染色体压片将得到的每一株壮苗进行编号，然后贴上标签，用剪刀剪取壮苗的根尖并编号，根尖的编号与所属壮苗的编号相对应，剪取的根尖长度为I. 0cm，将剪取得到的根尖制作成根尖染色体压片；
(i)筛选获得四倍体植株将制作得到的根尖染色体压片放到显微镜下观察其染色体的数量，筛选出染色体数量为36条的压片，根据筛出的压片根尖编号挑选出对应的壮苗，该壮苗为四倍体植株，其染色体数量为36条；
(j)栽培和良种扩繁将挑选出来的四倍体壮苗进行隔离种植，按照常规方法栽培管理9个月后，收获得到四倍体白花除虫菊的种子，将得到的种子进行制种栽培，以后 扩繁得到大量的四倍体白花除虫菊种子。
权利要求
1.四倍体白花除虫菊种子的培育方法，其特征在于包括以下步骤 (a)准备育苗基质将泥炭和珍珠岩按照体积比31混合均匀，再装放到高压灭菌锅中进行高温高压灭菌，控制高温高压灭菌的条件为压力O. 15MP、温度121°C，育苗基质在此压力和温度条件下灭菌O. 5-2小时，灭菌结束以后得到育苗基质； (b)准备种子挑选普通白花除虫菊优良品种的种子，挑选的种子要求饱满无虫眼； (c)准备试剂准备好秋水仙素，用无菌水将秋水仙素配制成浓度为600-1000mg/L的溶液，然后将配制好的秋水仙素溶液装放到烧杯中； Cd)种子处理将挑选好的白花除虫菊的种子放入装有上述秋水仙素溶液的烧杯中浸泡，将浸泡有白花除虫菊种子的烧杯放置在18-25°C的温室中，在此温度条件下浸泡24-48小时；浸泡结束后，把白花除虫菊的种子从秋水仙素溶液中取出来，然后用无菌水冲洗上述用秋水仙素溶液浸泡过的白花除虫菊的种子,冲洗次数为5-8遍； (e)播种准备好发芽盒，将(a)步骤中准备好的育苗基质装填到发芽盒中，育苗基质在发芽盒中装填的厚度为2. 5-5cm，将冲洗好的白花除虫菊的种子播种在发芽盒中的基质上，在播种有白花除虫菊种子的基质上喷洒少量的无菌水，保持基质湿润； (f)培养将播种有白花除虫菊种子的发芽盒放置到智能光照培养箱中培养，调节控制智能光照培养箱的温度为20土1°C、光照强度为1500-2000Lex、光照时间为10_16hr/d，在此条件下培养20-25天，白花除虫菊的种子萌芽以后逐渐长高，得到高度为3-5cm的小苗； (g)培养壮苗准备好穴盘，在穴盘中装入(a)步骤中准备好的育苗基质，将上述培养得到的高度为3-5cm的小苗从发芽盒中取出来，然后移栽到穴盘中的基质上，浇上定根水保持基质湿润，将移栽有小苗的穴盘放置到温棚中进行穴盘培养壮苗，调节控制温棚内穴盘培养的温度为昼温20-25°C，夜温16-18°C，自然光照8_10hr/d，在此温光条件下穴盘培养45-50天得到壮苗； (h)制作根尖染色体压片将得到的每一株壮苗进行编号，然后贴上标签，用剪刀剪取壮苗的根尖并编号，根尖的编号与所属壮苗的编号相对应，剪取的根尖长度为O. 8-1. Ocm,将剪取得到的根尖制作成根尖染色体压片； (i)筛选获得四倍体植株将制作得到的根尖染色体压片放到显微镜下观察其染色体的数量，筛选出染色体数量为36条的压片，根据筛出的压片根尖编号挑选出对应的壮苗，该壮苗为四倍体植株，其染色体数量为36条； (j )栽培和良种扩繁将挑选出来的四倍体壮苗进行隔离种植，按照常规方法栽培管理8-9个月后，收获得到四倍体白花除虫菊的种子，将得到的种子进行制种栽培，以后扩繁得到大量四倍体白花除虫菊种子。
全文摘要
四倍体白花除虫菊种子的培育方法，普通二倍体白花除虫菊的种子用秋水仙素溶液浸泡处理以后，播种到基质中，通过培养、移栽和壮苗培养后，用壮苗的根尖制作染色体压片，用显微镜观察压片中根尖染色体的数量，筛选出压片染色体数量为36条的根尖所对应的壮苗植株，该壮苗植株为白花除虫菊的四倍体植株，利用得到的白花除虫菊四倍体植株进行制种栽培，扩繁以后获得大量的四倍体种子，用获得的四倍体白花除虫菊的种子种植加工除虫菊，能获得较好的经济效益。本发明操作容易，成本低、效率高，能大量处理白花除虫菊的种子，是一种较快速、较简便地获取大量四倍体白花除虫菊植株的方法。
文档编号A01H1/08GK102792886SQ201210298218
公开日2012年11月28日 申请日期2012年8月21日 优先权日2012年8月21日
发明者杨晓, 杨梅, 赵东能, 梁飞 申请人:云南南宝生物科技有限责任公司