专利名称：淡褐奥德蘑的栽培方法及其专用培养基的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种食用菌的栽培方法及其专用培养基，特别涉及淡褐奥德蘑的栽培方法及其专用培养基。
背景技术：
食用菌淡褐奥德蘑(Oudemansiella canarii ),又称热带小奥德蘑,隶属于伞菌目(Agaricales)白薦科(TrichoIomataceae)小奥德薦属(Oudemansiella)。其子实体一般中等大。菌盖直径3-lOcm，表面褐色至棕褐色，湿润时粘。菌肉白色。菌褶白色至污白色，较稀，不等长，直生至延生，褶缘粗糙呈褐色至暗色，菌柄常弯曲，污白色，表面有深褐色纤毛及纵条纹，内部松软至变空心。孢子卵圆形、宽卵圆至近球形，12-23 μ mX 10. 5-18 μ m。褶缘囊体长达80-150 μ m，宽可达12-40 μ m。夏、秋季散生或单生于落叶林中朽木上。在我国·主要分布于云南、海南、黑龙江、吉林等地。目前，淡褐奥德蘑(Oudemansiella canarii)的来源主要是从野外采集。国内对小奥德蘑属的部分菌株已实现了人工驯化栽培，如长根小奥德蘑(O. radicata)、鳞柄小奥德蘑(O. furfuracea)、褐裙边小奥德蘑(O. brunneomarginata),但未见有人工栽培淡褐奥德蘑(Oudemansiella canarii )的报道；国外 Marcelo JoseSilveira Ruegger 等公开了一种栽培淡褐奥德蘑(Oudemansiella canarii)的方法,该方法用小麦麸和甘鹿洛(质量比I :4)或小麦麸和桉树木屑(质量比I :4)栽培淡褐奥德蘑，其最高生物学效率为采用小麦麸和甘鹿洛的栽培培养基，具体数值为55. 66% (Marcelo JoseSilveiraRuegger, etal. CULTIVATION OF THE EDIBLE MUSHROOM OUDEMANSIELLACANARII (JUNGH.) ；i{Oi !M. INLIGN0CELLUL0SIC SUBSTRATES. Brazilian Journalof Microbiology(2001)32:211-214)。开展淡褐奥德蘑的生物学特性及人工栽培研究，筛选出较高生物学效率的淡褐奥德蘑(0. canarii)的栽培方法将有效降低淡褐奥德蘑的生产成本，增加菇农收益，而且可为本属其他种类的人工驯化栽培提供理论基础和实践经验，具有重要的推广应用价值。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种生物学效率较高的淡褐奥德蘑的栽培方法。本发明所提供的淡褐奥德蘑的栽培方法，包括用子实体培养基培养淡褐奥德蘑的步骤，所述子实体培养基是将棉籽壳、苹果枝条木屑、小麦麸皮、熟石灰与水混合制成含水量为65%-70% (质量百分含量)的培养基,其中,棉籽壳、苹果枝条木屑、小麦麸皮、熟石灰的配比为I) -5)中的任一种1) 50:30:18:2;2) 42:38:18:2;3) (42-50) : (30-38) 18 2 ；4)(50-65):(15-30):18:2;5) 42-65:15-38:18:2。
其中，所述子实体培养基的碳氮比可为50-60、56-60、50-56、56、60或50。其中，所述栽培方法具体包括如下步骤I)发菌将淡褐奥德蘑(Oudemansiella canarii) 二级菌种接入所述子实体培养基，在环境温度为24°C _26°C，空气相对湿度为50%-60%的条件下培养至菌丝长满培养基；2)低温刺激将步骤I)的培养物转移至_5°C _5°C条件下处理3-5天，完成低温刺激；3)出菇；将步骤I)的培养物转移至环境温度为23°C -26°C，空气相对湿度80%-90%，光照强度 300-600Lux(如 300Lux 或 600Lux)，二氧化碳浓度为 1500-2000ppm(ppm 一百万个空气分子有一个二氧化碳分子)(如1500ppm或2000ppm)的条件下培养至子实体
原基形成。 上述栽培方法中，所述二级菌种是将淡褐奥德蘑(Oudemansiella canarii)母种接入二级菌种培养基得到的培养物；所述二级菌种培养基可为将苹果枝条木屑、小麦麸皮、蔗糖、熟石灰与水混合制成含水量为65%-70% (质量百分含量)、pH自然的培养基，其中苹果枝条木屑、小麦麸皮、蔗糖和熟石灰的质量比为80 18 1 1 (以干重计)。上述栽培方法中，所述二级菌种是将所述淡褐奥德蘑(Oudemansiella canarii)母种在所述二级菌种培养基中在24°C _26°C下培养得到的培养物。上述栽培方法中，所淡褐奥德蘑(Oudemansiella canarii)母种在母种培养基中培养，所述母种培养基每升由如下原料制成葡萄糖20g、大豆蛋白胨4g、马铃薯200g、KH2PO4 lg、MgS04 O. 5g、维生素C 10mg、琼脂16g、余量的水；所述母种培养基的pH为8. 5。本发明的另一个目的是提供一种淡褐奥德蘑的子实体培养基。本发明所提供的淡褐奥德蘑的子实体培养基是将棉籽壳、苹果枝条木屑、小麦麸皮、熟石灰与水混合制成含水量为65%-70% (质量百分含量)的培养基，其中，棉籽壳、苹果枝条木屑、小麦麸皮、熟石灰的配比为I) -5)中的任一种1) 50:30:18:2;2) 42:38:18:2;3) (42-50) : (30-38) 18 2 ；4) (50-65) (15-30) 18 2 ；5) 42-65:15-38:18:2。其中，所述子实体培养基的碳氮比可为50-60、56-60、50-56、56、60或50。本发明的再一个目的是提供淡褐奥德蘑的栽培培养基。本发明所提供的淡褐奥德蘑的栽培培养基，包括上述淡褐奥德蘑的子实体培养基。进一步，所述淡褐奥德蘑的栽培培养基还包括二级菌种培养基；所述二级菌种培养基是将苹果枝条木屑、小麦麸皮、鹿糖、熟石灰与水混合制成含水量为65%-70% (质量百分含量)的培养基，其中苹果枝条木屑、小麦麸皮、蔗糖和熟石灰的质量比为80 18 1 :1。进一步，所述淡褐奥德蘑的栽培培养基还包括母种培养基，所述母种培养基每升由如下原料制成葡萄糖20g、大豆蛋白胨4g、马铃薯200g、KH2PO4 lg、MgSO4O. 5g、维生素C10mg、琼脂16g、余量的水；所述母种培养基的pH为8. 5。本发明的淡褐奥德蘑的栽培方法的生物学效率达109%_123%，从将菌种接入子实体培养基至采收第一潮菇需要31-42天，采收四潮菇的整个栽培生产周期共55-79天。
图I为淡褐奥德蘑(Oudemansiella canarii)野生子实体形态。图2为淡褐奥德蘑(Oudemansiella canarii)担孢子形态。图中的条长为50. O μ m。图3为淡褐奥德蘑(Oudemansiella canarii)人工栽培子实体。
具体实施例方式以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。下述实施例中的淡褐奥德蘑(Oudemansiella canarii)(杨祝良，臧穆.我国西南小奥德蘑属的分类[J].真菌学报，1993，12(1):16 27;[2]李继东，林跃鑫.热带小奥德蘑深层发酵工艺研究[J].食用菌学报，2003，10(1) :46^51 ;卯晓岚.中国大型真菌[M].郑州河南科学技术出版社，2000:113)采自中国云南，其菌盖直径4-lOcm，初扁半球形，表面有粘液；初期中央褐色、边缘渐浅(图1A)，后期变为灰白至鼠灰色；菌肉白色，胶质；菌柄常弯曲，长5-16cm，粗5-15mm，污白色，表面有深褐色纤毛及纵条纹；菌褶白色至污白色，较稀，不等长，直生至延生；孢子印白色，孢子卵圆形至近球形，直径14-16 μ mX 16-18 μ m (图IB)。公众可从野外采集，也可从北京市农林科学院获得该菌种。下述实施例中的培养基如下I、综合PDA培养基每升由如下原料制成马铃薯200g、琼脂20g、葡萄糖20g、大豆蛋白胨5g、KH2PO43g、MgS04 I. 5g、维生素B1 10mg、余量的水。121°C高压灭菌30分钟。2、基础培养基每升由如下原料制成葡萄糖20g、大豆蛋白胨2g、KH2PO4 lg、MgSO4 O. 5g、维生素B1 10mg、琼脂16g、余量的水。121°C高压灭菌30分钟。3、加富培养基每升由如下原料制成葡萄糖20g、大豆蛋白胨2g、马铃薯200g、KH2PO4 Ig、MgSO4O. 5g、维生素B1 10mg、琼脂16g、余量的水。121°C高压灭菌30分钟。下述实施例中采用如下测定方法(I)菌丝平均生长速度测定淡褐奥德蘑(Oudemansiella canarii)菌种接种于平板培养基表面的中央，培养10天后，测量菌落直径，以菌落平均半径除以天数即为菌丝的日平均生长速度。(2)菌丝干重测定测定完生长速度的平皿，放入高压锅内121°C加热至培养基融化(IOmin),趁热将淡褐奥德蘑(Oudemansiella canarii )菌丝取出置于单层纱布,热水浴lh，然后置于烘干箱内105°C烘干至恒重，称量。(3)生长势测定淡褐奥德蘑(Oudemansiella canarii)菌丝生长浓密,长势旺盛，用“ + + + + ”表示；菌丝生长较密，长势较好，用“ + + + ”表示；菌丝生长密，长势一般，用“++”表示；菌丝生长稀，长势较弱，用“十”表示；菌丝不生长，用“一”表示。(4)生物学效率计算生物学效率(％)=(鲜菇重/培养料干重)X 100%其中，培养基或物料干重的测定方法如下将培养基或物料置于烘干箱内105°C烘干至恒重，称量。实施例I、栽培淡褐奥德蘑(Oudemansiella canarii)一、淡褐奥德蘑(Oudemansiella canarii)母种的制备I、采用组织分离法从淡褐奥德蘑(Oudemansiella canarii)的菌盖处分离菌块接种于装有上述综合PDA培养基的斜面中，25°C培养7-8天，长出淡褐奥德蘑(Oudemansiellacanarii)的菌丝,获得淡褐奥德蘑(Oudemansiella canarii)母种。2、母种培养基及培养条件的优化·(I)同步菌丝的制备将分离的淡褐奥德蘑(Oudemansiella canarii)母种在超净工作台中挑取一小块菌种转接到综合PDA培养基制成的平板(直径9cm)中央，置于25°C培养箱中避光培养，待菌丝快长满平皿时用打孔器(6mm)在平板相同直径的圆圈上打菌丝块，保证后续实验的菌块菌龄相同。(2)碳源实验以每升基础培养基中20g葡萄糖的含碳量为标准，分别用和20g葡萄糖相等含碳量的蔗糖、麦芽糖、乳糖、淀粉、山梨醇、甘露醇、羧甲基纤维素钠八种碳源，代替基础培养基中葡萄糖，每处理5次重复，pH自然，25°C恒温培养箱中避光培养，以不含碳源培养基(每升由如下原料制成大豆蛋白胨2g、KH2P04 lg、MgS04 O. 5g、维生素B1 10mg、琼脂16g、余量的水)做对照(CK)，观测不同碳源对菌丝生长的影响。实验结果如表I所示,不同碳源间淡褐奥德蘑(Oudemansiella canarii)菌丝生长速度、菌丝体干重和长势有显著差异。其中，在以葡萄糖为碳源的培养基上日生长速度较快，菌丝生长势旺盛，达5. 45mm/d ;其次为蔗糖和麦芽糖，日生长速度分别为4. 81mm/d和
4.67mm/d ;在乳糖为碳源的培养基上日生长速度最慢,仅为2. 01mm/d,远小于对照,这可能是由于乳糖对该菌株菌丝具有一定的抑制作用。在菌丝干重方面，以葡萄糖为碳源的培养基上最高，为O. 0530g ;羧甲基纤维素钠最低,仅为O. 0094g ;其中乳糖和对照为碳源的菌丝干重差异不显著。因此，综合以上分析，本实验选取的最佳碳源为葡萄糖。表I碳源对淡褐奥德蘑菌丝生长的影响
权利要求
1.淡褐奥德蘑的栽培方法，包括用子实体培养基培养淡褐奥德蘑的步骤，所述子实体培养基是将棉籽壳、苹果枝条木屑、小麦麸皮、熟石灰与水混合制成含水量为65%-70% (质量百分含量)的培养基，其中棉籽壳、苹果枝条木屑、小麦麸皮、熟石灰的配比为1)-5)中的任一种 1)50 30 18 2 ； 2)42 38 18 2 ；3)(42-50):(30-38)18 2 ；4)(50-65):(15-30) 18 2 ；5)42-65 15-38 18 :2。
2.根据权利要求I所述的栽培方法，其特征在于所述栽培方法包括如下步骤 1)发菌将淡褐奥德蘑(Oudemansiellacanarii)二级菌种接入所述子实体培养基,在环境温度为24°C _26°C，空气相对湿度为50%-60%的条件下培养至菌丝长满培养基； 2)低温刺激将步骤I)的培养物转移至_5°C_5°C条件下处理3-5天，完成低温刺激； 3)出菇；将步骤I)的培养物转移至环境温度为23°C_26°C，空气相对湿度80%-90%，光照强度300-600Lux, 二氧化碳浓度为1500-2000ppm的条件下培养至子实体原基形成。
3.根据权利要求2所述的栽培方法，其特征在于所述二级菌种是将淡褐奥德蘑(Oudemansiella canarii)母种在二级菌种培养基中培养得到的培养物；所述二级菌种培养基是将苹果枝条木屑、小麦麸皮、鹿糖、熟石灰与水混合制成含水量为65%-70% (质量百分含量)的培养基，其中苹果枝条木屑、小麦麸皮、蔗糖和熟石灰的质量比为80 18 1 :1。
4.根据权利要求3所述的栽培方法，其特征在于所述二级菌种是将所述淡褐奥德蘑(Oudemansiella canarii)母种在所述二级菌种培养基中在24°C -26°C下培养得到的培养物。
5.根据权利要求3或4所述的栽培方法，其特征在于所淡褐奥德蘑(Oudemansiellacanarii)母种在母种培养基中培养,所述母种培养基每升由如下原料制成葡萄糖20g、大豆蛋白胨4g、马铃薯200g、KH2P04 lg、MgS04 0.5g、维生素C 10mg、琼脂16g、余量的水；所述母种培养基的pH为8. 5。
6.淡褐奥德蘑(Oudemansiellacanarii)的子实体培养基,所述子实体培养基是将棉籽壳、苹果枝条木屑、小麦麸皮、熟石灰与水混合制成含水量为65%-70% (质量百分含量)的培养基，其中棉籽壳、苹果枝条木屑、小麦麸皮、熟石灰的配比为I)-5)中的任一种 1)50 30 18 2 ； 2)42 38 18 2 ；3)(42-50):(30-38)18 2 ；4)(50-65):(15-30) 18 2 ；5)42-65 15-38 18 :2。
7.淡褐奥德蘑(Oudemansiellacanarii)的栽培培养基,包括权利要求6的子实体培养基。
8.根据权利要求7所述的培养基，其特征在于所述栽培培养基包括二级菌种培养基；所述二级菌种培养基是将苹果枝条木屑、小麦麸皮、蔗糖、熟石灰与水混合制成含水量为65%-70% (质量百分含量)的培养基，其中苹果枝条木屑、小麦麸皮、蔗糖和熟石灰的质量比为 80 :18 :1 :1。
9.根据权利要求7或8所述的培养基，其特征在于所述栽培培养基包括母种培养基，所述母种培养基每升由如下原料制成葡萄糖20g、大豆蛋白胨4g、马铃薯200g、KH2P04 lg、MgSO4 O. 5g、维生素C 10mg、琼脂16g、余量的水；所述母种培养基的pH为8. 5。
全文摘要
本发明公开了淡褐奥德蘑的栽培方法及其专用培养基。本发明的淡褐奥德蘑的栽培方法，包括用子实体培养基培养淡褐奥德蘑的步骤，所述子实体培养基是将棉籽壳、苹果枝条木屑、小麦麸皮、熟石灰与水混合制成含水量为65%-70%(质量百分含量)的培养基，其中棉籽壳、苹果枝条木屑、小麦麸皮、熟石灰的质量比为5030182。本发明的淡褐奥德蘑的栽培方法的生物学效率达109%-123%，从将菌种接入子实体培养基至采收第一潮菇需要31-42天，采收四潮菇的整个栽培生产周期共55-79天。
文档编号C05G3/00GK102907257SQ20121042949
公开日2013年2月6日 申请日期2012年10月31日 优先权日2012年10月31日
发明者王守现, 刘宇, 许峰, 赵爽, 王兰青, 耿小丽, 孟莉莉 申请人:北京市农林科学院