专利名称：一种可促进小球藻中油脂积累的培养方法
技术领域：
本发明涉及一种小球藻培养方法，尤其是涉及一种可促进小球藻中油脂积累的培养方法。
背景技术：
小球藻(Chlorella)是一种油脂含量较高、具有较大应用前景的能源微藻。它不但具有较高的蛋白质含量，而且具有生长速度快、油脂含量较高等特点，在我国还具有较成熟的规模培养工艺和技术体系，是目前研究得较多的一种经济微藻。利用小球藻等微藻材料快速生长积累油脂，进而生产生物柴油是新型能源研究开发的热点。目前在小球藻培养系统，如生物反应器培养、开放式跑道池培养、培养条件、工艺、培养基等都有较多的文献和专利。但小球藻作为生物能源同样存在生长速度与高油脂含量不可兼得、成本过高等技术瓶颈，还需要进一步研究提高生长速度和油脂含量的方法。植物激素是高等植物和藻类中存在的一类微量次生代谢产物，对植物体生长、发育等具有调节作用。如生长素能有效提高小球藻的生长速度(王素琴等，不同氮源形态和植物激素对小球藻USTBOl生长及叶黄素含量的效应，科技导报，2005年23期12卷；刘世名等，植物激素IBA与6-BA对摇瓶分批流加异养培养小球藻的生长及化学组成的影响，西北植物学报，2004年第I期)。水杨酸和油菜素内酯是植物体内微量存在的、对增强植物抗逆性有显著效果的两类植物激素，与藻类的抗逆性和次生代谢产物积累密切相关，这两种植物激素均可能提高小球藻的代谢产物的积累，但是目前国内外还没有关于利用水杨酸或油菜素内酷提闻小球操生长和油脂积累的相关研究报道。
发明内容
本发明所 要解决的技术问题是提供一种可促进小球藻中油脂积累的培养方法，该方法通过在培养基中添加一定量的植物激素，可有效提高小球藻油脂积累速度，显著提高小球藻油脂含量。本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为一种可促进小球藻中油脂积累的培养方法，包括以下步骤(I)将水杨酸溶解在乙醇中配成浓度为O. 5-2mg/mL的第一母液；或将24-表油菜素内酯溶解在乙醇中配成浓度为O. 5-2mg/mL的第二母液；(2)将小球藻置于培养液中培养直至OD值达到O. 1-3. O ；(3)然后将第一母液加入到培养液中使其最终浓度为O. 1-1. O μ g/mL ;或者将第二母液加入到培养液中使其最终浓度为2. 5-10 μ g/mL ;或者将所述的第一母液和所述的第二母液按体积比(1-2) : (3-8)的比例混合后，添加到培养液中使水杨酸最终浓度为
O.25 μ g/mL,使24-表油菜素内酯最终浓度为O. 375-2. O μ g/mL ；(4)将添加了第一母液的培养液或添加了第二母液的培养液或者添加了第一母液和第二母液混合液的培养液分别在25°C、光强40001χ、光照周期为每天12小时连续光照再12小时连续黑暗的条件下进行培养，将小球藻培养I周，直至藻体颜色由绿变黄色，即获得油脂含量较高的小球藻。所述的第一母液的浓度为lmg/mL。所述的第二母液的浓度为lmg/mL。步骤(2)中所述的培养液为f/2改良培养基。步骤(2)中所述的培养液为宁波大学3号培养基，配方为1升蒸馏水中加KNO3O. lg, KH2PO4O. Olg, FeSO4O. 025g, MnSO4O. 0005g, EDTA-Na2O. 02g。步骤(3)中将所述的第一母液和所述的第二母液按体积比1:5的比例混合后，添加到培养液中使水杨酸最终浓度为O. 25 μ g/mL,使24-表油菜素内酯最终浓度为1. 25 μ g/mL。与现有技术相比，本发明的优点在于本发明一种促进小球藻中油脂积累的培养方法，用终浓度为O. 1-1. O μ g/mL的水杨酸或2. 5-10 μ g/mL的24表油菜素内酯或两者的混合物添加到OD值为O. 1-3. O的小球藻培养基中，将高浓度小球藻用植物激素处理后放在光照培养箱中培养，由于这2种植物激素均为抗逆性植物激素，外源施加后引起小球藻的抗逆反应，积累更多的油脂以抵抗逆境，最终可使小球藻迅速积累油脂，在快速生长的同时实现小球藻油脂的积累，与现有的不加植物激素的小球藻培养方法相比，相同的培养时间下，油脂含量增加30%以上。本发明中采用水杨酸或者油菜素内酯或者两者的混合物，均是常用的植物激素，具有相对的生物安全性，价格低廉，在较低浓度下即具有较好的提高小球藻生长和油脂积累的效果，因此本发明是一种具有较大经济效益、使用方便、无生态危害、可大量推广的技术方法。
具体实施例方式
以下结合实施例对本发明作进一步详细描述。实施例1本发明一种促进小球藻油脂积累的方法。首先将蛋白核小球藻F_9(C.pyrenoidosa)在较好的生长条件下快速培养至对数生长后期，小球藻达到较高的密度，测定OD46tl=L 47。用一定量的乙醇将化学纯的水杨酸(SIGMA公司)充分溶解，配成浓度为1. Omg/mL的母液，将母液加入对数生长后期的培养基中，使最终浓度分别为O. 1,0. 5、1.O μ g/mL ;将添加了水杨酸的小球藻在25°C、光强40001x、光照周期每天12小时连续光照再12小时连续黑暗，及不加外源培养基条件下进行连续培养，每天检测小球藻油脂含量(小球藻油脂检测方法采用香草醛比色法，方法参照丛峰等，几种小球藻油脂含量检测方法的比较及优化，宁波大学学报，2012年第I期)和颜色变化，7天后观察到藻体颜色由绿变黄色。这时候小球藻中油脂含量较高。添加了水杨酸的小球藻油脂含量最高可达到33. 7%，为对照组的124. 3% (所有数据均为3次测定的平均值)，如表I所示，表I对照组小球藻和添加水杨酸后小球藻中油脂含量变化(％)
权利要求
1.一种可促进小球藻中油脂积累的培养方法，其特征在于包括以下步骤 (1)将水杨酸溶解在乙醇中配成浓度为O.5-2mg/mL的第一母液；或将24-表油菜素内酯溶解在乙醇中配成浓度为O. 5-2mg/mL的第二母液； (2)将小球藻置于培养液中培养直至OD值达到O.1-3. O ； (3)然后将第一母液加入到培养液中使其最终浓度为O.1-1. O μ g/mL ;或者将第二母液加入到培养液中使其最终浓度为2. 5-10 μ g/mL ;或者将所述的第一母液和所述的第二母液按体积比(1-2): (3-8)的比例混合后，添加到培养液中使水杨酸最终浓度为O. 25 yg/mL，使24-表油菜素内酯最终浓度为O. 375-2. O μ g/mL ； (4)将添加了第一母液的培养液或添加了第二母液的培养液或者添加了第一母液和第二母液混合液的培养液分别在25°C、光强40001χ、光照周期为每天12小时连续光照再12小时连续黑暗的条件下进行培养，将小球藻培养I周，直至藻体颜色由绿变黄色，即获得油脂含量较高的小球藻。
2.根据权利要求1所述的一种可促进小球藻中油脂积累的培养方法，其特征在于所述的第一母液的浓度为lmg/mL。
3.根据权利要求1所述的一种可促进小球藻中油脂积累的培养方法，其特征在于所述的第二母液的浓度为lmg/mL。
4.根据权利要求1所述的一种可促进小球藻中油脂积累的培养方法，其特征在于所述的OD值为1.0-3. O。
5.根据权利要求1所述的一种可促进小球藻中油脂积累的培养方法，其特征在于步骤(2)中所述的培养液为f/2改良培养基。
6.根据权利要求1所述的一种可促进小球藻中油脂积累的培养方法，其特征在于步骤(2)中所述的培养液为宁波大学3号培养基，配方为1升蒸馏水中加KNO3O.1g,KH2PO4O. Olg, FeSO4O. 025g, MnSO4O. 0005g, EDTA-Na2O. 02g。
7.根据权利要求1所述的一种可促进小球藻中油脂积累的培养方法，其特征在于步骤(3)中将所述的第一母液和所述的第二母液按体积比1:5的比例混合后，添加到培养液中使水杨酸最终浓度为O. 25 μ g/mL,使24-表油菜素内酯最终浓度为1. 25 μ g/mL。
全文摘要
本发明公开了一种可促进小球藻中油脂积累的培养方法，特点是包括以下步骤(1)将水杨酸或24-表油菜素内酯溶解在乙醇中配成相应的浓度为0.5-2mg/mL的第一母液和第二母液；(2)将小球藻培养直至OD值达到0.1-3.0；(3)将第一母液或者将第二母液或者将第一母液和第二母液按比例混合添加到小球藻培养液中；(4)将添加了第一母液的培养液或第二母液的培养液或者两者混合液的培养液分别在25℃、光强4000lx、光照周期为每天12小时连续光照再12小时连续黑暗的条件下进行培养，将小球藻培养直至藻体颜色由绿变黄色，即获得油脂含量较高的小球藻，优点可有效提高小球藻油脂积累速度，显著提高小球藻油脂含量。
文档编号C12N1/38GK103060256SQ20121055534
公开日2013年4月24日 申请日期2012年12月19日 优先权日2012年12月19日
发明者徐年军, 孙雪, 陆海波, 丛峰, 江灵芝 申请人:宁波大学