专利名称：一种三倍体石斑鱼的制备方法
技术领域：
本发明属于鱼类遗传育种领域，具体涉及一种三倍体石斑鱼的制备方法。
背景技术：
石斑鱼类隶属S卢形目(Perciformes),鯧科(Serranidae),石斑鱼亚科(Epinephelinae),是闻名世界的名贵鱼类,其营养丰富,是一种含低脂肪、高蛋白的上等食用鱼，深受广大消费者喜爱。在我国南方沿海广东、海南、福建、广西等地石斑鱼已成为海水养殖的主要对象，经济价值巨大。三倍体是指具有三套染色体组的个体，正常的个体只具有两套染色体组。三倍体个体生殖原细胞在减数分裂过程中不能正常的联会，不能产生正常的配子，在三倍体个体发育过程中，性腺的不正常发育节省了生殖能量并将这部分能量用于生长发育，再加上三 倍体个体比二倍体多了一套染色体组，基因表达更加活跃加快了生长发育的进程，使得三倍体在生长发育速度方面具有非常明显的优势，具有巨大的应用价值。目前，传统石斑鱼的育种方法育种工作年限长、育种工作进展缓慢且石斑鱼杂交育种模式中杂交二倍体容易发生逃逸，从而对海洋生态环境造成无法预估的严重后果。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种三倍体石斑鱼的制备方法，该制备方法育种周期短、生长速度快、对海洋生态环境无影响。本发明的上述技术问题是通过如下技术方案来实现的一种三倍体石斑鱼的制备方法，包括以下步骤挑选遗传距离为O. 140-0. 145亲缘关系的不同种石斑鱼作为亲鱼，采用干法人工受精进行远缘杂交，卵子受精后转移到海水中进行冷休克处理，育苗经起捕、驯养后鉴定出三倍体石斑鱼即可。本发明通过远缘杂交配合物理刺激产生出三倍体石斑鱼，大大加快了石斑鱼多倍体育种工作的进程。本发明所述的石斑鱼优选鞍带石斑鱼(E.1anceolatus)和斜带石斑鱼(E.coioides)。本发明优选采用干法人工受精进行远缘杂交时的温度为25 28°C。本发明在卵子受精后转移到海水中进行冷休克处理，冷休克处理时的温度优选为4°C，冷休克处理时间优选为2(T25min。本发明育苗经起捕、驯养长至8、个月龄后鉴定出三倍体石斑鱼即可。本发明育苗经起捕、驯养后采用倍性分析仪检测血细胞倍性，并进行染色体核型分析以及血细胞大小测量从而鉴定出三倍体石斑鱼。可以采用血细胞涂片法测量血细胞大小。与现有技术相比，本发明具有如下优点(I)本发明挑选遗传距离为O. 140-0. 145亲缘关系的不同种石斑鱼作为亲鱼，在杂交后进行冷处理，可以得到三倍体石斑鱼。本发明操作简单，制备出的三倍体石斑鱼生长速度快，不能繁殖，对海洋生态环境无影响；(2)本发明加快了石斑鱼类遗传育种研究的进程，为以后的海水鱼类多倍体遗传育种研究提供重要依据；在生产应用方面具有巨大的经济价值；在石斑鱼类遗传育种、遗传进化以及内分泌调控等理论研究方面都具有重大的参考价值。
图1-2是实施例1中的染色体图进行核型分析结果图。
具体实施例方式以下各实施例中所采用的试剂，如无特殊说明，均为市售。实施例1通过PCR扩增出中国近海石斑鱼5种石斑鱼线粒体细胞色素b (Cyt b)基因，利用MEGA3.1软件并根据Kimura双参数模型计算遗传距离。石斑鱼具体种类如下赤点石斑鱼(E. akaara)、褐点石斑鱼(E. fuscoguttatus)、鞍带石斑鱼(E. lanceolatus)、斜带石斑鱼(E. coioides)和豹纹鳃棘鲈(P. leopardus)。挑选健康石斑鱼作为杂交亲鱼。表IPCR扩增石斑鱼线粒体细胞色素b (Cyt b)基因引物序列如下
权利要求
1.一种三倍体石斑鱼的制备方法，其特征在于包括以下步骤挑选遗传距离为O.140-0. 145亲缘关系的不同种石斑鱼作为亲鱼，采用干法人工受精进行远缘杂交，卵子受精后转移到海水中进行冷休克处理，育苗经起捕、驯养后鉴定出三倍体石斑鱼即可。
2.根据权利要求1所述的三倍体石斑鱼的制备方法，其特征是采用分子标记法挑选遗传距离为O. 140-0. 145亲缘关系的不同种石斑鱼作为亲鱼。
3.根据权利要求1所述的三倍体石斑鱼的制备方法，其特征是所述的石斑鱼包括鞍带石斑鱼和斜带石斑鱼。
4.根据权利要求1所述的三倍体石斑鱼的制备方法，其特征是采用人工干法受精进行远缘杂交时的温度为25 28°C。
5.根据权利要求1所述的三倍体石斑鱼的制备方法，其特征是卵子受精后转移到海水中进行冷休克处理，冷休克处理时的温度为4°C，冷休克处理时间为2(T25min。
6.根据权利要求1所述的三倍体石斑鱼的制备方法，其特征是育苗经起捕、驯养长至8、个月龄后鉴定得到三倍体石斑鱼即可。
7.根据权利要求1所述的三倍体石斑鱼的制备方法，其特征是育苗经起捕、驯养后采用倍性分析仪检测血细胞倍性，并进行染色体核型分析以及血细胞大小测量从而鉴定出三倍体石斑鱼。
全文摘要
本发明公开了一种三倍体石斑鱼的制备方法，挑选遗传距离为0.140-0.145亲缘关系的不同种石斑鱼作为亲鱼，采用干法人工受精进行远缘杂交，卵子受精后转移到海水中进行冷休克处理，育苗经起捕、驯养后鉴定出三倍体石斑鱼即可。该制备方法育种周期短、生长速度快、对海洋生态环境无影响。
文档编号A01K61/00GK103004653SQ20121048012
公开日2013年4月3日 申请日期2012年11月22日 优先权日2012年11月22日
发明者张勇, 黄文 , 张海发, 王韦民, 李水生, 王燕, 肖玲, 刘晓春, 林浩然 申请人:中山大学