观赏石斛新种质的培育方法
【专利摘要】本发明公开了一种观赏石斛新种质的培育方法，发明人选择肿节石斛优良单株为母本、大苞鞘石斛优良单株为父本进行人工种间杂交，通过人工授粉、授粉后的管理，果实采收、果实表面灭菌，萌发培养、增殖分化培养、壮苗生根培养和炼苗移栽等步骤，获得了大量生长健壮的杂交子代成苗。该批种间杂交子代苗集合了其父母本各自的优良遗传背景，为培育自主知识产权的观赏石斛品种提供了新种质。本发明克服了前述两种石斛种间杂交亲和性较低、杂交种子萌发率低、增殖难的问题，为进一步培育茎花俱美、综合性状优良的观赏石斛新品种打下了基础，为观赏石斛新品种选育提供了有效的途径。
【专利说明】观赏石斛新种质的培育方法
【技术领域】
[0001]本发明属于植物育种【技术领域】，尤其涉及一种观赏石斛新种质的培育方法。
【背景技术】
[0002]石斛(Dendrobium spp.)是兰科石斛属植物的总称,具有重要的观赏价值,其花形花姿优美、花色鲜艳、花期长，许多种类具有芳香，既可作切花，也可盆栽观赏，深受人们的喜爱，被誉为“四大观赏洋兰”之一，在国际兰花市场上具有重要地位。目前，国内栽培生产的石斛品种大都从国外引进，国内尚无自主知识产权的石斛新品种。
[0003]肿节石斛(Dendrobium pendulum Roxb.),附生,株型中等，长30 — 50cm,假鱗莖节间距短，节肿大呈优美的算珠状，总状花絮生于落叶茎上部，花径5 - 6cm,花期3 — 4月，具有清香，适应性强，综合性状优良，是石斛杂交育种重要的亲本。大苞鞘石斛(Dendrobiumwardianum Warner),附生,株型大,长50 — 85cm,假鳞莖圆柱形，叶薄革质,凋落,总状花序生于落叶茎上部，花径6 -1Ocm,花期3 — 4月，花瓣椭圆形，白色带紫色先端，唇盘金黄色，基部具2个紫黑色斑块，单花性状突出，作为父本可提供重要的遗传基因。肿节石斛与大苞鞘石斛进行杂交，可望集合父母本各自的优良性状，是培育茎、花俱美的观赏石斛新品种的有效途径。
[0004]目前，关于石斛专利和文献的报道较多，主要集中在资源分布、无菌播种、组织培养以及药用成分和药理作用等，关于石斛的育种研究较少，未见肿节石斛与大苞鞘石斛种间杂交培育观赏石斛新种质的方法。同时，由于石斛种间杂交亲和性的原因，杂种胚存在发育不全，无菌播种不萌 发或萌发率极低。
【发明内容】
[0005]本发明要解决的技术问题是提供一种观赏石斛新种质的培育方法，所得新种质集合了肿节石斛和大苞鞘石斛的优良遗传性状，克服了前述两种石斛种间杂交亲和性较低、杂交种子萌发率低、增殖难的问题。
[0006]为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案:观赏石斛新种质的培育方法，包括以下步骤:
[0007]( I)杂交亲本选配:选择肿节石斛优良单株作为母本，大苞鞘石斛优良单株作为父本；
[0008](2)人工授粉:母本植株的待授粉花朵开放后2天至10天为授粉适宜时期，父本植株供粉花朵开放后的2天至5天为采集花粉块的适宜时期；杂交授粉于晴天上午9:00~11:00或下午16:30~17:30进行；
[0009](3)授粉后的管理:授粉后24小时以内，母本植株禁止浇水施肥，其后恢复正常管理；
[0010](4)果实采收:杂交授粉后150至300天，在果皮颜色由绿色转变为淡黄色，蒴果开始变软但未开裂前，适时采收；[0011](5)果表面灭菌:未开裂的石斛杂交蒴果，以洗洁精清洗干净表面，使用75%的医用酒精浸湿杂交果实表面，将果实置于无菌不锈钢盘中，点燃酒精，通过燃烧对果实表面进行高温灭菌，果实冷却后备用；
[0012](6)萌发培养:灭菌好的蒴果纵向切开，用镊子取出种子均匀散于无菌播种培养基中，暗培养7天后转为光培养40-55天；播种培养基配方为1/2MS+白糖25g/L+琼脂粉4.2g/L+ 活性炭 0.5g/L+ 椰汁 100ml/L+6-苄氨基嘌呤 0.1 ~0.6mg/L ；
[0013](7)增殖分化培养:萌发的种子转接到增殖分化培养基上，培养60至75天；增殖分化培养基为1/2MS+蛋白胨2~3g/L+白糖25g/L+琼脂粉4.2g/L+活性炭1.0g/L+ 土豆150g/L+ 香蓮 50g/L+6_ 节氛基嘿呤 0.1 ~0.6mg/L+ 奈乙酸 0.05 ~0.2mg/L ；
[0014](8)壮苗生根培养:生长正常的分化苗转接到壮苗生根培养基中，培养60至75天；壮苗生根培养基为1/4N6+蛋白胨2~3g/L+白糖25g/L+琼脂粉4.5g/L+活性炭2.0g/L+土? 100g/L+ 香蓮 50g/L+ 奈乙酸 0.05 ~0.3mg/L+IBA0.05 ~0.3mg/L ；
[0015](9)炼苗移栽:将培养杂交子代植株的生根苗培养瓶置于温棚中炼苗一周后,打开瓶盖继续炼苗I至3天； 取出生根苗并冼净培养基，生根苗以0.1%的多菌灵浸泡lOmin，滤干水分，在阴凉处摊放荫干至根系发白；按3株/丛，种植于装有基质的培养盘中，种植20-30天；待长出新根和新芽后进行正常水、肥、药管理。
[0016]肿节石斛优良单株株型中等，节肿大呈明显算珠状、节间距短，花朵具突出的清香味，综合性状优良，生长良好；大苞鞘石斛优良单株花多，花径大，花朵紧凑，唇瓣斑眼色泽艳丽，单花性状特别突出。
[0017]人工授粉按以下操作进行:使用牙签除去大苞鞘石斛的药帽，取下其花粉块，将花粉块移至肿节石斛合蕊柱顶端的柱头上，让蕊腔分泌出的粘液将花粉块粘住，剔除其自身的花药，去除唇瓣，外套硫酸纸袋隔离保护授粉花朵。
[0018]授粉后的管理按以下操作进行:交替施用花多多平衡肥和高钾肥，施用浓度均为
0.1% ;座果后及时去除硫酸纸袋。
[0019]花多多平衡肥配比为N:P:K=20:20:20,高钾肥配比为N:P:K=5:11:26
[0020]步骤(9)炼苗移栽中基质由刨花、松树皮、木屑、木炭按体积比2:2:1:1混合而成；其中，刨花、松树皮和木屑预先以沸水煮I小时，木炭以太阳暴晒。
[0021]MS 培养基的配方为 KN031900mg/L，NH4N031650mg/L, KH2PO4170mg/L,MgSO4.7H20370mg/L, CaCl2.2H20440mg/L, KI0.83mg/L, H3B036.20mg/L, MnSO4.4H2022.3mg/L, ZnSO4.7H208.60mg/L, Na2MoO4.2H200.25mg/L, CuSO4.5H200.025mg/L,CoCl2.6H200.025mg/L, Na2.EDTA.2H2037.30mg/L, FeSO4.7H2027.80mg/L，肌醇 lOOmg/L,甘氨酸2.0Omg/L,盐酸硫胺素0.lOmg/L,盐酸吡卩多醇0.50mg/L和烟酸0.50mg/L ；
[0022]N6 培养基的配方为 KN032830mg/L，NH4S0446 3mg/L, KH2P04400mg/L,MgSO4.7H20185mg/L, CaCl2.2H20166mg/L, KI0.80mg/L, H3BO3L 60mg/L, MnSO4.4H204.4mg/L, ZnSO4.7H201.5mg/L, Na2.EDTA.2H2037.30mg/L, FeSO4.7H2027.80mg/L,甘氨酸 2.0Omg/L,盐酸硫胺素1.0Omg/L,盐酸吡B多醇0.50mg/L和烟酸0.50mg/L。
[0023]培养条件为光照2000-30001ux、10_12h/d，温度 24±2°C。
[0024]结合肿节石斛和大苞鞘石斛的观赏性状优良、互补性强的特点，发明人选择肿节石斛优良单株为母本、大苞鞘石斛优良单株为父本进行人工种间杂交，建立了本发明观赏石斛新种质的培育方法。该法根据观赏石斛育种目标选配杂交亲本，选择综合性状优良的单株、适宜的授粉时间进行人工授粉，并在授粉后开展合理的水肥管理，解决了石斛种间杂交亲和性较低的问题，促进杂交果实的发育，杂交结实率可达22%;针对杂种胚发育不全、无菌播种萌发率低的问题，适时采收果实，并选择适宜的培养基为杂种胚提供营养，显著提高了杂种胚萌发率，种子萌发率可达90%，增殖倍数达5-8倍。本发明从人工授粉、经无菌播种到成苗移栽的最短周期约为12个月，显著缩短了观赏石斛种间杂交新种质的培育周期，并获得了大量生长健壮的杂交子代成苗，它集合了父母本各自的优良遗传背景，为培育自主知识产权的观赏石斛品种提供了新种质，为进一步培育茎花俱美、综合性状优良的观赏石斛新品种打下了基础，为观赏石斛新品种选育提供了有效的途径。
【具体实施方式】
[0025]以下结合实施例进一步说明本发明，其中:
[0026]肿节石斛优良单株株型中等，节肿大呈明显算珠状、节间距短，花朵具突出的清香味，综合性状优良，生长良好；大苞鞘石斛优良单株花多，花径大，花朵紧凑，唇瓣斑眼色泽艳丽，单花性状特别突出。 [0027]步骤(9)炼苗移栽中基质由刨花、松树皮、木屑、木炭按体积比2:2:1:1混合而成；其中，刨花、松树皮和木屑预先以沸水煮I小时杀菌并除去有害物质，木炭以太阳暴晒杀菌。
[0028]MS 培养基的配方为 KN031900mg/L，NH4N031650mg/L, KH2PO4170mg/L,MgSO4.7H20370mg/L, CaCl2.2H20440mg/L, KI0.83mg/L, H3B036.20mg/L, MnSO4.4H2022.3mg/L, ZnSO4.7H208.60mg/L, Na2MoO4.2H200.25mg/L, CuSO4.5H200.025mg/L,CoCl2.6H200.025mg/L, Na2.EDTA.2H2037.30mg/L, FeSO4.7H2027.80mg/L，肌醇 lOOmg/L,甘氨酸2.0Omg/L,盐酸硫胺素0.lOmg/L,盐酸吡卩多醇0.50mg/L和烟酸0.50mg/L ；
[0029]N6 培养基的配方为 KN032830mg/L，NH4S0446 3mg/L, KH2P04400mg/L,MgSO4.7H20185mg/L, CaCl2.2H20166mg/L, KI0.80mg/L, H3BO3L 60mg/L, MnSO4.4H204.4mg/L, ZnSO4.7H201.5mg/L, Na2.EDTA.2H2037.30mg/L, FeSO4.7H2027.80mg/L,甘氨酸 2.0Omg/L,盐酸硫胺素1.0Omg/L,盐酸吡B多醇0.50mg/L和烟酸0.50mg/L。
[0030]美国施可得公司生产花多多平衡肥和高钾肥，配比分别为N:P:K=20:20:20和N:P:K=5:11:26o
[0031]培养条件为光照2000-30001ux、10_12h/d，温度 24±2°C。
[0032]实施例1
[0033]所用培养基配方如下:
[0034]播种培养基配方为1/2MS+白糖25g/L+琼脂粉4.2g/L+活性炭0.5g/L+椰汁100ml/L+6-苄氨基嘌呤 0.lmg/L ；
[0035]增殖分化培养基为1/2MS+蛋白胨2g/L+白糖25g/L+琼脂粉4.2g/L+活性炭1.0g/L+ 土豆 150g/L+ 香蕉 50g/L+6-节氨基嘌呤 0.lmg/L+ 奈乙酸 0.05mg/L ；
[0036]壮苗生根培养基为1/4N6+蛋白胨3g/L+白糖25g/L+琼脂粉4.5g/L+活性炭2.0g/L+ 土? 100g/L+ 香蕉 50g/L+ 奈乙酸 0.05mg/L+IBA0.05mg/L ；
[0037]( I)杂交亲本选配:选择肿节石斛优良单株作为母本，大苞鞘石斛优良单株作为父本；
[0038](2)人工授粉:2012年3月17日(母本植株的待授粉花朵开放后2天，父本植株供粉花朵开放后的2天)，晴，上午9:00~10:30进行杂交授粉；使用牙签除去大苞鞘石斛的药帽，取下其花粉块，将花粉块移至肿节石斛合蕊柱顶端的柱头上，让蕊腔分泌出的粘液将花粉块粘住，剔除其自身的花药，去除唇瓣，外套硫酸纸袋隔离保护授粉花朵，挂牌标明父母本和授粉时间。授粉花朵数共计11朵。
[0039](3)授粉后的管理:授粉后24小时，授粉母本植株禁止浇水施肥，其后恢复正常浇水施肥；交替施用花多多平衡肥和高钾肥，促进果实发育，施用浓度均为0.1%，避免水肥直接喷施于授粉花朵上；座果后及时去除硫酸纸袋；雨季注意防雨，高温高湿季节注意控水和通风管理，以免造成落果；
[0040](4)果实米收:授粉120天，座果数为2，座果率为18% ;杂父授粉后150天后，米收蒴果(果皮颜色由绿色转变为淡黄色，蒴果开始变软但未开裂)；
[0041](5)果表面灭菌:未开裂的石斛杂交蒴果，以洗洁精清洗干净表面，使用75%的医用酒精浸湿杂交果实表面，将果实置于无菌不锈钢盘中，点燃酒精，通过燃烧对果实表面进行高温灭菌，果实冷却后备用；
[0042](6)萌发培养:灭菌好的蒴果纵向切开，用镊子取出种子均匀散于无菌播种培养基中培养，先暗培养7天后转入光下培养；培养10~14天，种胚膨大变绿；培养40-55天，形成绿色锥形球茎，种子萌发率达88% ；
[0043](7)增殖分化培养:萌发的种子形成的绿色锥形球茎转接到增殖分化培养基上，培养60至75天，苗高2~3cm，叶片I~2片，叶色深绿，增殖率达5倍；
[0044](8)壮苗生根培养:生长正常的分化苗转接到壮苗生根培养基中，培养60至75天，苗高6~8cm，茎粗0.2~0.3cm,叶片3~4片，根数5~7条，叶色深绿，健壮植株；
[0045](9)炼苗移栽:将培养杂交子代植株的生根苗培养瓶置于温棚中炼苗一周后,打开瓶盖继续炼苗I至3天；取出生根苗并冼净培养基，生根苗以0.1%的多菌灵浸泡lOmin，滤干水分，在阴凉处摊放荫干至根系发白；按3株/丛，种植于装有基质的培养盘中，种植20-30天；待长出新根和新芽后进行正常水、肥、药管理，并注意保持温度和湿度，做好遮荫、控温、保湿和防病防虫工作，成活率达90%以上。
[0046]实施例2
[0047]所用培养基配方如下:
[0048]播种培养基配方为1/2MS+白糖25g/L+琼脂粉4.2g/L+活性炭0.5g/L+椰汁100ml/L+6-苄氨基嘌呤 0.2mg/L ；
[0049]增殖分化培养基为1/2MS+蛋白胨2g/L+白糖25g/L+琼脂粉4.2g/L+活性炭1.0g/L+ 土豆 150g/L+ 香蕉 50g/L+6-节氨基嘌呤 0.3mg/L+ 奈乙酸 0.lmg/L ；
[0050]壮苗生根培养基为1/4N6+蛋白胨3g/L+白糖25g/L+琼脂粉4.5g/L+活性炭2.0g/L+ 土豆 100g/L+ 香蕉 50g/L+ 奈乙酸 0.lmg/L+IBA0.lmg/L ；
[0051 ] (I)杂交亲本选配:选择肿节石斛优良单株作为母本，大苞鞘石斛优良单株作为父本；
[0052](2)人工授粉:2012年3月18日(母本植株的待授粉花朵开放后3天，父本植株供粉花朵开放后的3天)，晴，下午16:30~17:30进行杂交授粉；使用牙签除去大苞鞘石斛的药帽，取下其花粉块，将花粉块移至肿节石斛合蕊柱顶端的柱头上，让蕊腔分泌出的粘液将花粉块粘住，剔除其自身的花药，去除唇瓣，外套硫酸纸袋隔离保护授粉花朵，挂牌标明父母本和授粉时间。授粉花朵数共计9朵。
[0053](3)授粉后的管理:授粉后24小时，授粉母本植株禁止浇水施肥，其后恢复正常浇水施肥；交替施用花多多平衡肥和高钾肥，促进果实发育，施用浓度均为0.1%，避免水肥直接喷施于授粉花朵上；座果后及时去除硫酸纸袋；雨季注意防雨，高温高湿季节注意控水和通风管理，以免造成落果；
[0054](4)果实采收:授粉120天，座果数为2个，座果率为22% ;杂交授粉后210天后，采收蒴果(果皮颜色由绿色转变为淡黄色，蒴果开始变软但未开裂)；
[0055](5)果表面灭菌:未开裂的石斛杂交蒴果，以洗洁精清洗干净表面，使用75%的医用酒精浸湿杂交果实表面，将果实置于无菌不锈钢盘中，点燃酒精，通过燃烧对果实表面进行高温灭菌，果实冷却后备用；
[0056](6)萌发培养:灭菌好的蒴果纵向切开，用镊子取出种子均匀散于无菌播种培养基中培养，先暗培养7天后转入光下培养；培养10~14天，种胚膨大变绿，45-60天，形成绿色锥形球茎，种子萌发率达90% ；
[0057](7)增殖分化培养:萌发的种子形成的绿色锥形球茎转接到增殖分化培养基上，培养60至75天，苗高2~3cm，叶片1~2片，叶色深绿，增殖率达8倍；
[0058](8)壮苗生根培养:生长正常的分化苗转接到壮苗生根培养基中，培养60至75天，苗高6~8cm，茎粗0.2~0.3cm,叶片3~5片，根数6~8条，叶色深绿，健壮植株；
[0059](9)炼苗移栽:将培养杂交子代植株的生根苗培养瓶置于温棚中炼苗一周后,打开瓶盖继续炼苗I至3天；取出生根苗并冼净培养基，生根苗以0.1%的多菌灵浸泡lOmin，滤干水分，在阴凉处摊放荫干至根系发白；按3株/丛，种植于装有基质的培养盘中，种植20-30天；待长出新根和新芽后进行正常水、肥、药管理，并注意保持温度和湿度，做好遮荫、控温、保湿和防病防虫工作，成活率达90%以上。
[0060]实施例3
[0061]所用培养基配方如下:
[0062]播种培养基配方为1/2MS+白糖25g/L+琼脂粉4.2g/L+活性炭0.5g/L+椰汁100ml/L+6-苄氨基嘌呤 0.6mg/L ；
[0063]增殖分化培养基为1/2MS+蛋白胨2g/L+白糖25g/L+琼脂粉4.2g/L+活性炭1.0g/L+ 土豆 150g/L+ 香蕉 50g/L+6-节氨基嘌呤 0.6mg/L+ 奈乙酸 0.2mg/L ；
[0064]壮苗生根培养基为1/4N6+蛋白胨3g/L+白糖25g/L+琼脂粉4.5g/L+活性炭2.0g/L+ 土豆 100g/L+ 香蕉 50g/L+ 奈乙酸 0.3mg/L+IBA0.3mg/L ；
[0065](1)杂交亲本选配:选择肿节石斛优良单株作为母本，大苞鞘石斛优良单株作为父本；
[0066](2)人工授粉:2012年3月26日(母本植株的待授粉花朵开后10天，父本植株供粉花朵开后的5天)，晴，上午9:00~11:00进行杂交授粉；使用牙签除去大苞鞘石斛的药帽，取下其花粉块，将花粉块移至肿节石斛合蕊柱顶端的柱头上，让蕊腔分泌出的粘液将花粉块粘住，剔除其自身的花药，去除唇瓣，外套硫酸纸袋隔离保护授粉花朵，挂牌标明父母本和授粉时间。授粉花朵数共计12朵。[0067](3)授粉后的管理:授粉后24小时，授粉母本植株禁止浇水施肥，其后恢复正常浇水施肥；交替施用花多多平衡肥和高钾肥，促进果实发育，施用浓度均为0.1%，避免水肥直接喷施于授粉花朵上；座果后及时去除硫酸纸袋；雨季注意防雨，高温高湿季节注意控水和通风管理，以免造成落果；
[0068](4)果实米收:授粉300天，座果数为2，座果率为16% ;杂父授粉后300天后，米收蒴果(果皮颜色由绿色转变为淡黄色，蒴果开始变软但未开裂);
[0069](5)果表面灭菌:未开裂的石斛杂交蒴果，以洗洁精清洗干净表面，使用75%的医用酒精浸湿杂交果实表面，将果实置于无菌不锈钢盘中，点燃酒精，通过燃烧对果实表面进行高温灭菌，果实冷却后备用；
[0070](6)萌发培养:灭菌好的蒴果纵向切开，用镊子取出种子均匀散于无菌播种培养基中培养，先暗培养7天后转入光下培养；培养10~14天，种胚膨大变绿，45-60天，形成绿色锥形球茎，种子萌发率达85% ；
[0071](7)增殖分化培养:萌发的种子形成的绿色锥形球茎转接到增殖分化培养基上，培养60至75天，苗高2~3cm，叶片I~2片，叶色深绿，增殖率达7倍；
[0072](8)壮苗生根培养:生长正常的分化苗转接到壮苗生根培养基中，培养60至75天，苗高6~8cm，茎粗0.2~0.3cm,叶片3~4片，根数6~8条，叶色深绿，健壮植株；
[0073](9)炼苗移栽:将培养杂交子代植株的生根苗培养瓶置于温棚中炼苗一周后,打开瓶盖继续炼苗I至3天；取出生根苗并冼净培养基，生根苗以0.1%的多菌灵浸泡lOmin，滤干水分，在阴凉处摊放荫干至根系发白；按3株/丛，种植于装有基质的培养盘中，种植20-30天；待长出新根和新芽后进行正常水、肥、药管理，并注意保持温度和湿度，做好遮荫、控温、保湿和防病防`虫工作，成活率达90%以上。
【权利要求】
1.一种观赏石斛新种质的培育方法，其特征在于包括以下步骤: (1)杂交亲本选配:选择肿节石斛优良单株作为母本，大苞鞘石斛优良单株作为父本； (2)人工授粉:母本植株的待授粉花朵开放后2天至10天为授粉适宜时期，父本植株供粉花朵开放后的2天至5天为采集花粉块的适宜时期；杂交授粉于晴天上午9:00~11:00或下午16:30~17:30进行； (3)授粉后的管理:授粉后24小时以内，母本植株禁止浇水施肥，其后恢复正常管理； (4)果实采收:杂交授粉后150至300天，在果皮颜色由绿色转变为淡黄色，蒴果开始变软但未开裂前，适时采收； (5)果表面灭菌:未开裂的石斛杂交蒴果，以洗洁精清洗干净表面，使用75%的医用酒精浸湿杂交果实表面，将果实置于无菌不锈钢盘中，点燃酒精，通过燃烧对果实表面进行高温灭囷，果实冷却后备用； (6)萌发培养:灭菌好的蒴果纵向切开，用镊子取出种子均匀散于无菌播种培养基中，暗培养7天后转为光照培养40-55天；播种培养基配方为1/2MS+白糖25g/L+琼脂粉4.2g/L+活性炭0.5g/L+椰汁100ml/L+6-苄氨基嘌呤0.1~0.6mg/L ； (7)增殖分化培养:萌发的种子转接到增殖分化培养基上，培养60至75天；增殖分化培养基为1/2MS+蛋白胨2~3g/L+白糖25g/L+琼脂粉4.2g/L+活性炭1.0g/L+土豆150g/L+香蓮50g/L+6_节氛基嘿呤0.1~0.6mg/L+奈乙酸0.05~0.2mg/L ； (8)壮苗生根培养:生长正常的分化苗转接到壮苗生根培养基中，培养60至75天；壮苗生根培养基为1/4N6+蛋白胨2~3g/L+白糖25g/L+琼脂粉4.5g/L+活性炭2.0g/L+ 土? 100g/L+ 香蓮 50g/L+ 奈乙酸 0.05 ~0.3mg/L+IBA0.05 ~0.3mg/L ； (9)炼苗移栽:将培养杂交子代植株的生根苗培养瓶置于温棚中炼苗一周后，打开瓶盖继续炼苗I至3天；取出生根苗并冼净培养基，生根苗以0.1%的多菌灵浸泡lOmin，滤干水分，在阴凉处摊放荫干至根系发白；按3株/丛，种植于装有基质的培养盘中，种植20-30天；待长出新根和新芽后进行正常水、肥、药管理。
2.根据权利要求1所述的观赏石斛新种质的培育方法，其特征在于:所述肿节石斛优良单株株型中等，节肿大呈明显算珠状、节间距短，花朵具突出的清香味，综合性状优良，生长良好；所述大苞鞘石斛优良单株花多，花径大，花朵紧凑，唇瓣斑眼色泽艳丽，单花性状特别突出。
3.根据权利要求1所述的观赏石斛新种质的培育方法，其特征在于所述人工授粉按以下操作进行:使用牙签除去大苞鞘石斛的药帽，取下其花粉块，将花粉块移至肿节石斛合蕊柱顶端的柱头上，让蕊腔分泌出的粘液将花粉块粘住，剔除其自身的花药，去除唇瓣，外套硫酸纸袋隔离保护授粉花朵。
4.根据权利要求3所述的观赏石斛新种质的培育方法，其特征在于所述授粉后的管理按以下操作进行:交替施用花多多平衡肥和高钾肥，施用浓度均为0.1% ;座果后及时去除硫酸纸袋。
5. 根据权利要求4所述的观赏石斛新种质的培育方法，其特征在于:所述花多多平衡肥配比为N:P:K=20:20:20，高钾肥配比为N:P:K=5:11:26。
6.根据权利要求1所述的观赏石斛新种质的培育方法，其特征在于步骤(9)炼苗移栽中基质由刨花、松树皮、木屑、木炭按体积比2:2:1:1混合而成；其中，刨花、松树皮和木屑预先以沸水煮I小时，木炭以太阳暴晒。
7.根据权利要求1所述的观赏石斛新种质的培育方法，其特征在于: 所述 MS 培养基的配方为 KN031900mg/L，NH4N031650mg/L, KH2PO4170mg/L,MgSO4.7H20370mg/L, CaCl2.2H20440mg/L, KI0.83mg/L, H3B036.20mg/L, MnSO4.4H2022.3mg/L, ZnSO4.7H208.60mg/L, Na2MoO4.2H200.25mg/L, CuSO4.5H200.025mg/L,CoCl2.6H200.025mg/L, Na2.EDTA.2H2037.30mg/L, FeSO4.7H2027.80mg/L，肌醇 lOOmg/L,甘氨酸2.0Omg/L,盐酸硫胺素0.lOmg/L,盐酸吡卩多醇0.50mg/L和烟酸0.50mg/L ； 所述 N 6 培养基的配方为 KN032830mg/L，NH4S0446 3mg/L, KH2P04400mg/L,MgSO4.7H20185mg/L, CaCl2.2H20166mg/L, KI0.80mg/L, H3BO3L 60mg/L, MnSO4.4H204.4mg/L, ZnSO4.7H201.5mg/L, Na2.EDTA.2H2037.30mg/L, FeSO4.7H2027.80mg/L,甘氨酸 2.0Omg/L,盐酸硫胺素1.0Omg/L,盐酸吡B多醇0.50mg/L和烟酸0.50mg/L。
8.根据权利要求1所述的观赏石斛新种质的培育方法，其特征在于:所述培养条件为光照 2000-30001ux、10 -12h/d，温度 24±2°C。
【文档编号】A01H1/02GK103718948SQ201310653515
【公开日】2014年4月16日 申请日期:2013年12月6日 优先权日:2013年12月6日
【发明者】龚建英, 王华新, 龙定建, 孙利娜, 林茂, 李进华, 陈宝玲, 陈尔, 王珠娜 申请人:广西壮族自治区林业科学研究院