一种红星茵芋离体快速繁殖的方法
【专利摘要】本发明公开了一种红星茵芋离体快速繁殖的方法，其步骤：（1）外植体选择和消毒，以红星茵芋成熟种子为外植体，用70%酒精消毒后，再用浓度为0.1%HgCl2消毒，用无菌水冲洗；（2）种子萌发，将消毒好的种子接入萌发培养基中，经过培养，种子萌发长出子叶与真叶；（3）丛芽诱导与增殖，切取带真叶的顶芽，接种到增殖培养基上，进行继代培养，使丛芽不断增殖；（4）生根培养，将扩繁得到的试管苗，接种到生根培养基中，幼苗经过培养分化出白色不定根；（5）驯化移栽。该方法简便易行，繁殖系数大，生产成本低，周期短，平均繁殖系数达4.5，生根率90％，移栽成活率95％，操作简便，繁殖系数大，为红星茵芋种苗产业化生产奠定了基础。
【专利说明】一种红星茵芋离体快速繁殖的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及植物生物【技术领域】，更具体涉及一种红星茵芋离体快速繁殖的方法。
【背景技术】
[0002] 红星茵芋（Skimmia japonica Rubella)，又名红玉珠，属芸香科茵芋属植物，是近 年颇受欢迎的高档观赏花卉之一。红星茵芋叶片翠绿光亮，初夏的红褐色花蕾玲珑可爱，花 香浓郁；秋冬季节红星满枝，鲜艳欲滴，挂果期可长达半年以上，是观叶、观花、观果俱佳的 优良花卉品种(吴棣飞，年宵观果佳卉一红星菌芋。中国花卉盆景，2007,（2) :5-5)。
[0003] 红星茵芋可播种和扦插进行繁殖，采用种子繁殖，后代会出现分离，不能保持母株 的优良特性，而且从播种至开花所需周期较长，现在生产上很少采用。扦插繁殖成活率不到 20%，而且需要大量的母本，远远不能满足生产需求，而且长期营养繁殖易出现品种退化现 象。若从荷兰进口，高IOcm小苗每株10元以上(孟艳琼，李仁杰，伊兴凯，梅俊，李静雅，红 星茵芋离体花梗腋芽诱导及丛生芽增殖研究。中国农学通报，2007,23 (11):81-85)，种苗 价格昂贵，导致企业生产成本增加。采用植物组织培养技术，工厂化生产红星茵芋种苗，不 仅可以克服播种和扦插带来的品种混杂、种性退化等问题，而且可以不受自然气候的影响 全年生长优质种苗，为红星茵芋的育种研究提供材料和技术支持，对推动红星茵芋产业的 快速发展具有重要意义。
[0004] 目前，关于红星茵芋的组培快繁仅有一篇报道，孟艳琼等（2007)采用红星茵芋的 花梗为外植体，在MS+2, 4-DO. 3mg/L+IAA0. 2mg/L+BA3. 0mg/L+KT2.Omg/L培养基诱导花梗 腋芽萌发，诱导率可达91. 1%。在MS+NAAO. 8mg/L+BA3. 0mg/L+KT2.Omg/L上继代增殖，增殖 系数可达8. 73 (孟艳琼，李仁杰，伊兴凯，梅俊，李静雅，红星茵芋离体花梗腋芽诱导及丛生 芽增殖研究。中国农学通报，2007, 23 (11) :81-85)。由于红星茵芋开花受时间限制，采用 花梗取材有限，且实验中没有进行生根培养方面的试验，在实际工厂育苗中受到限制。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是在于提供了一种红星茵芋离体快速繁殖的方法，该方法简便易 行，繁殖系数大，生产成本低，周期短，平均繁殖系数达4. 5,繁殖周期20?25d，生根率90 % 左右，移栽成活率95%。采用种子无菌萌发的芽苗，在人为可控条件下进行组培苗的工厂化 生产，不受自然条件的影响，操作简便，繁殖系数高，生产成本低，周期短，为红星茵芋种苗 产业化生产奠定了基础。
[0006] 为了达到上述的目的，本发明采用以下技术措施：
[0007] (1)外植体选择和消毒：
[0008] 以红星茵芋成熟种子为外植体，流水下冲洗30min，将其用70% (体积比）酒精消 毒后，再用浓度为〇. 1% (质量体积比）氯化汞（HgCl2)消毒8?lOmin，然后用无菌水冲洗4 次。
[0009] (2)种子萌发：
[0010] 将消毒好的种子接入萌发培养基中，在温度为24 - 26°C、湿度为35 - 45%，光照 强度3000?5000 ii mol HT2s-1,每天光照14?16h，经过25?30d培养，种子萌发长出子 叶，经过15?20d后，长出1?2片真叶。
[0011] 所述的种子萌发培养基包括MS基本培养基+0. 5mg/L GA3+蔗糖30g/L，PH值为 5. 8 ?6. 0〇
[0012] (3)丛芽诱导与增殖：
[0013] 切取1?2片真叶及以上的顶芽，接种到丛芽诱导培养基上，在温度为24 - 26°C、 湿度为35 - 45%，光照强度3000?5000 ii mol IiT2S'每天光照14?16h，经过25?30d培 养，获得丛生芽。挑选正常发育的丛生茎芽，每隔20?25d切割成1-2个茎芽进行继代培 养，平均每次继代1瓶可转接4-5瓶，使丛芽不断增殖。
[0014] 所述的丛芽诱导和增殖培养基包括MS基本培养基+1. 0?I. 5mg/L6-BA+0. 1? 0? 3mg/L NAA+0. 5mg/L GA3+ 蔗糖 30g/L，PH 值为 5. 8 ?6. 0。
[0015] (4)生根培养：
[0016] 将株高3?5cm长的试管苗，接种到生根培养基中，在温度为24 - 26°C、湿度为 35 - 45%，光照强度3000?5000 ii mol HT2s-1,每天光照14-16h，经过14 一 16d幼苗就会分 化出4?6条白色不定根。
[0017] 所述的生根培养基包括1/2MS+0. 5?I. Omg/L IBA+蔗糖30g/L，PH值为5. 8? 6. 0〇
[0018] (5)驯化移栽：
[0019] 在温室内，生根培养25 - 30d后，将生长健壮，具有3条以上新根的红星茵芋组培 苗进行驯化移栽，移栽用的混合基质配方为由泥炭：珍珠岩：蛭石=3:1:1 (V/V)。移栽后， 用喷雾器喷水，使根系和基质紧密接触，然后遮阴一周后移入全光照下。温室条件为20°C? 25°C，光照 14 ?16h，光照强度为 2000 y mol IiT2S'
[0020] 本发明以种子无菌萌发的顶芽为外植体，建立红星茵芋组培快繁体系，增值率较 高（4?5倍)，增殖稳定，根系健壮，移栽成活率较高，在红星茵芋种苗工厂化繁育中具有重 要的应用价值。
[0021] 本发明与现有技术相比，具有以下优点和效果：
[0022] 1、本发明与现有技术相比，种子取材简单方便，数量大，容易萌发。
[0023] 2、本发明得到丛芽繁殖率高，每继代一次扩大4?5倍。
[0024] 3、本发明建立红星茵芋组培快繁技术，为后续红星茵芋遗传育种和转基因工作打 下良好基础。
【专利附图】
【附图说明】
[0025] 图1为一种红星茵芋优良盆栽植株示意图。
[0026] 红色果实去皮后的成熟种子用于实验，白色箭头所指为红色果实。
[0027] 图2为一种种子萌发长出子叶不意图。
[0028] 图3为一种种子萌发长出真叶后不意图。
[0029] 幼苗长出真叶，用于增殖的顶芽。
[0030]图4为一种顶芽增殖后的丛生芽示意图。
[0031] 图5为一种试管苗生根培养示意图。
[0032] 图6为一种正常生根的试管苗示意图。
[0033] 图7为一种生根移栽后正常生长的红星茵芋幼苗示意图。
[0034] 具体实施方法
[0035] 为了更好地理解本发明，下面结合具体实施例和附图来进一步说明本发明的实 质,但本发明的内容并不局限于此。
[0036] 实施例1 :
[0037] -种红星茵芋离体快速繁殖的方法，其步骤是：
[0038] 1、培养基配制：
[0039] I. 1基本培养基配制：
[0040] 所述的培养基为MS，分别取大量元素母液100ml;MS微量元素母液IOml;MS有机 母液IOml;MS铁盐IOml ;肌醇IOml ;母液成分如下表1 :
[0041] 表IMS培养基母液配方
[0042]
【权利要求】
1. 一种红星茵芋离体快速繁殖的方法，其步骤是： (1) 外植体选择和消毒： 以红星茵芋成熟种子为外植体，流水下冲洗30min，将其用70%体积比酒精消毒后，再 用浓度为〇. 1%质量体积比氯化汞消毒8?lOmin，然后用无菌水冲洗4次； (2) 种子萌发： 将消毒的种子接入萌发培养基中，在温度为24 - 26°C、湿度为35 - 45%，光照强度 3000?5000 ii mol nT2 s'每天光照14?16h，经过25?30d培养，种子萌发长出子叶，经 过15?20d后，长出1?2片真叶； 所述的种子萌发培养基包括MS基本培养基+ 0. 5mg/L GA3 +蔗糖30g/L，PH值为 5. 8 ?6. 0 ; (3) 丛芽诱导与增殖： 切取1?2片真叶的顶芽，接种到丛芽诱导培养基上，在温度为24 - 26°C、湿度为35 - 45%，光照强度3000?5000 ii mol nT2 s'每天光照14?16h，经过25?30d培养，获得丛 生芽，挑选丛生茎芽，每隔20?25d切割成1-2个茎芽进行继代培养，平均每次继代1瓶转 接4-5瓶，使丛芽不断增殖； 所述的丛芽诱导和增殖培养基包括MS基本培养基+1. 0?1. 5mg/L 6-BA +0. 1?0. 3 mg/L NAA +0? 5mg/L GA3 + 蔗糖 30g/L，PH 值为 5. 8 ?6. 0 ; (4) 生根培养： 将株高3?5cm长的试管苗，接种到生根培养基中，在温度为24 - 26°C、湿度为35 - 45%，光照强度3000?5000 ii mol nT2 s'每天光照14-16h，经过14 一 16d幼苗就会分化出 4?6条白色不定根； 所述的生根培养基包括1/2MS+0. 5?1. Omg/L IBA +蔗糖30g/L，PH值为5. 8?6. 0 ; (5) 驯化移栽： 在温室内，生根培养25 - 30d后，将3条以上新根的红星茵芋组培苗进行驯化移栽，移 栽用的混合基质配方为由泥炭：珍珠岩：蛭石=3:1 :1V/V，移栽后，用喷雾器喷水，使根系和 基质接触，然后遮阴一周后移入全光照下，温室条件为20°C?25°C，光照14?16h，光照强 度为 2000 u mol m 2 s、
【文档编号】A01H4/00GK104335898SQ201410050810
【公开日】2015年2月11日 申请日期:2014年2月14日 优先权日:2014年2月14日
【发明者】李其友, 阳永学, 曾红霞, 肖康飞, 祝菊红, 程维舜, 张娜, 杨皓琼, 毕秋荣 申请人:武汉市农业科学研究所