红景天提取物及其制备方法与应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了红景天提取物及其制备方法与应用。本发明所提供的红景天提取物，其制备方法包括：用95%乙醇水溶液提取红景天根，收集提取液并除去所述提取液中的乙醇，得到红景天95%乙醇提取物，所述红景天95%乙醇提取物为红景天提取物。实验证明大花红景天95%乙醇提取物、小花红景天95%乙醇提取物和高山红景天95%乙醇提取物在浓度为1mg/ml时，对番茄灰霉病病菌和白菜黑斑病菌具有明显的抑制作用。说明大花红景天、高山红景天和/或小花红景天可用于制备番茄灰霉病病菌和白菜黑斑病菌抑制剂。
【专利说明】红景天提取物及其制备方法与应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及红景天提取物及其制备方法与应用。
【背景技术】
[0002]植物病原真菌广泛分布于世界各地，引起农作物、林木、蔬菜、经济作物、观赏作物病害，常造成植物早期失绿、叶枯、落叶、枯萎和腐烂，严重影响植物生长发育、产量及品质，给农业生产和人民生活带来严重损失。目前植物真菌病害防治仍以有机合成的化学药剂防治为主，但大量化学农药的使用，带来了很大的负面生态影响，且容易使植物产生药害和抗药性，严重影响抗植物病原真菌制剂在农业生产中的应用。近年来，随着日光温室、塑料大棚、地膜覆盖等保护措施的改进，果蔬的真菌病害严重，已经成为制约我国水果和蔬菜高效、安全生产的主要原因，常使国家经济和人民生活遭受严重损失。随着无公害农产品生产规模的逐步扩大和化学农药使用产生的抗药性、农药残留等问题的日益严重，寻找和使用无毒，高效的新型植物源农药越来越受到人们的重视。
[0003]景天科(Crassulaceae)红景天属(Rhodiola)植物,全世界约有90种,主要分布于北半球高寒地带。多分布于喜马拉雅地区、亚洲西部至北部，经朝鲜、日本至北美洲，中国为红景天属植物的分布中心，约70余种。红景天属植物为多年生具根状茎草本，根状茎上有鳞片；花单性异株或杂性，排成伞房花序，通常4数，雄花有退化的雌蕊，雌花无退化的雄蕊，花瓣很小或完全消失。药理作用研究表明，红景天具有抗肿瘤、抗氧化、抗疲劳、抗辐射等功能，为航空、航天、军事医学、运动医学和卫生保健的重要药材。其中目前研究比较清楚也是大家较为认同的主要生理活性物质是红景天苷(sal idroside)。
【发明内容】
[0004]本发明所要解决的技术问题是提供红景天提取物及其制备方法与应用。
[0005]本发明提供了三种红景天提`取物。
[0006]本发明所提供的第一种红景天提取物为红景天95%乙醇提取物，其制备方法包括:用95%乙醇水溶液提取红景天根，收集提取液并除去所述提取液中的乙醇，得到红景天95%乙醇提取物；所述红景天95%乙醇提取物为第一种红景天提取物；所述红景天为大花红景天、高山红景天和/或小花红景天。
[0007]本发明所提供的第二种红景天提取物为红景天乙酸乙酯萃取物，其制备方法包括:1)用95%乙醇水溶液提取红景天根，收集提取液并除去所述提取液中的乙醇，得到红景天95%乙醇提取物；
[0008]2)将所述红景天95%乙醇提取物用水分散成混悬液，用石油醚萃取所述混悬液，收集水相，用乙酸乙酯萃取所述水相，收集乙酸乙酯相，除去所述乙酸乙酯相中的乙酸乙酯即得到红景天乙酸乙酯萃取物；所述红景天乙酸乙酯萃取物为第二种红景天提取物；
[0009]所述红景天为大花红景天、高山红景天和/或小花红景天。
[0010]本发明所提供的第三种红景天提取物为红景天乙酸乙酯洗脱物，其制备方法包括:1)用95%乙醇水溶液提取红景天根，收集提取液并除去所述提取液中的乙醇，得到红景天95%乙醇提取物；
[0011]2)将所述红景天95%乙醇提取物用水分散成混悬液，用石油醚萃取所述混悬液，收集水相，用乙酸乙酯萃取所述水相，收集乙酸乙酯相，除去所述乙酸乙酯相中的乙酸乙酯即得到红景天乙酸乙酯萃取物；
[0012]3)将步骤2)的红景天乙酸乙酯萃取物进行硅胶柱层析得到红景天乙酸乙酯洗脱物；所述硅胶柱层析的洗脱是先用乙酸乙酯-石油醚进行洗脱，然后用乙酸乙酯进行洗脱，收集用乙酸乙酯洗脱得到的洗脱液，得到红景天乙酸乙酯洗脱物；所述乙酸乙酯-石油醚是乙酸乙酯和石油醚按照1:1的体积比混合得到的混合物；所述红景天乙酸乙酯洗脱物为第三种红景天提取物；
[0013]所述红景天为大花红景天。
[0014]实验证明，大花红景天95%乙醇提取物在浓度为lmg/ml时,对番爺灰霉病病菌的抑菌率达到0.523，对白菜黑斑病菌的抑菌率达到0.490 ;小花红景天95%乙醇提取物在浓度为lmg/ml时，对番茄灰霉病病菌的抑菌率达到0.404，对白菜黑斑病菌的抑菌率达到
0.449 ;高山红景天95%乙醇提取物在浓度为lmg/ml时，对番茄灰霉病病菌的抑菌率达到
0.510，对白菜黑斑病菌的抑菌率达到0.337。大花红景天乙酸乙酯萃取物在浓度为0.1mg/ml时对番茄灰霉病病菌的抑菌率达到0.580，大花红景天乙酸乙酯洗脱物在浓度为0.1mg/ml时对番茄灰霉病病菌的抑菌率达到0.690 ;大花红景天乙酸乙酯萃取物在浓度为0.1mg/ml时对白菜黑斑病菌 的抑菌率达到0.406，大花红景天乙酸乙酯洗脱物在浓度为0.lmg/ml时对白菜黑斑病菌的抑菌率达到0.376。说明大花红景天、高山红景天和/或小花红景天可用于制备番茄灰霉病病菌和/或白菜黑斑病菌抑制剂。
[0015]上述第一种红景天提取物、第二种红景天提取物和第三种红景天提取物在制备番茄灰霉病病菌和/或白菜黑斑病菌抑制剂中的应用，大花红景天、高山红景天和/或小花红景天在制备番茄灰霉病病菌和/或白菜黑斑病菌抑制剂中的应用也属于本发明的保护范围。
[0016]以上述红景天提取物为活性成分的植物病原真菌抑制剂也属于本发明的保护范围；所述植物病原真菌为番茄灰霉病菌和白菜黑斑病菌中的二种或一种。
[0017]上文中，所述95%乙醇水溶液是乙醇体积百分含量为95%的水溶液。
[0018]本发明以中草药红景天为原料开发了一种环境友好、高效、低毒的潜在新型和谐农药，对生态长远发展、人类的健康和病害的综合治理都具有深远的意义。与传统的农药相t匕，本发明具有以下的特点和优点:1、本发明的红景天提取物，对番茄灰霉病病菌和白菜黑斑病菌具有明显的抑制作用，可作为一种植物源农药开发。2、本发明的红景天提取物与红景天中保健成分红景天苷所在极性部位并不重叠(邰韧辉，高纯度红景天苷的制备工艺研究，现代中药研究与实践，2004，18(4)，58-59.)不影响红景天药效成分的使用，可以成为很好的开发资源。
【专利附图】
【附图说明】
[0019]图1为大花红景天、小花红景天和高山红景天的95%乙醇提取物对白菜黑斑病菌的抑制作用。[0020]图中，左侧I号图片为对照培养基平板，左侧2号图片为大花红景天95%乙醇提取物的含量为lmg/mL的带药培养基平板，3号图片为小花红景天95%乙醇提取物的含量为lmg/mL的带药培养基平板，4号图片为高山红景天95%乙醇提取物的含量为lmg/mL的带药
培养基平板。
[0021]图2为大花红景天、小花红景天和高山红景天的95%乙醇提取物对番茄灰霉病菌的抑制作用。
[0022]图中，左侧I号图片为对照培养基平板，左侧2号图片为大花红景天95%乙醇提取物的含量为lmg/mL的带药培养基平板，3号图片为小花红景天95%乙醇提取物的含量为lmg/mL的带药培养基平板，4号图片为高山红景天95%乙醇提取物的含量为lmg/mL的带药
培养基平板。
【具体实施方式】
[0023]下面结合【具体实施方式】对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0024]下述实施例中的番爺灰霉病菌(Botrytis cinerea)(朱建兰.番爺灰霉病菌的生物学特性研究，甘肃农业大学学报，1995，30 (1),73-78.)，公众可从野外采集，也可从北京农学院获得，该生物材料只为重复本发明的相关实验所用，不可作为其它用途使用。本申请中简称番爺灰霉病菌。
[0025]下述实施例中的桃褐腐病菌(Monilinia fructicola)(胡海文，杨海清，王朋，刘素花，赵晓燕，刘正坪.桃褐腐病菌拮抗细菌的分离筛选与鉴定，中国农学通报，2009, 25(12): 195-200)`，公众可从野外采集，也可从北京农学院获得，该生物材料只为重复本发明的相关实验所用，不可作为其它用途使用。本申请中简称桃褐腐病菌。
[0026]下述实施例中的李干腐病菌(Polvporus hirsutus)(任娜敏,马焕普,刘志民.拮抗放线菌Fl发酵液抑菌谱及稳定性分析，北京农学院学报，2012, 27 (I)，32-35.)，公众可从野外采集，也可从北京农学院获得，该生物材料只为重复本发明的相关实验所用，不可作为其它用途使用。本申请中简称李干腐病菌。
[0027]下述实施例中的白菜黑斑病菌(Alternaria brassicae)(任娜敏,马焕普,刘志民.拮抗放线菌Fl发酵液抑菌谱及稳定性分析，北京农学院学报，2012，27 (I)，32-35.)，公众可从野外采集，也可从北京农学院获得，该生物材料只为重复本发明的相关实验所用，不可作为其它用途使用。本申请中简称白菜黑斑病菌。
[0028]下述实施例中的马铃薯干腐病菌(Pythium coeruleum)(卜春亚等.瑞香狼毒中抑制植物病原真菌活性物质研究.植物保护.北方园艺.2013 (19) =120-123)，公众可从野外采集，也可从北京农学院获得，该生物材料只为重复本发明的相关实验所用，不可作为其它用途使用。本申请中简称马铃薯干腐病菌。
[0029]下述实施例中的金银木假尾抱叶斑病菌(Pseudocercospora 1nicericola)(任娜敏，马焕普，刘志民.拮抗放线菌Fl发酵液抑菌谱及稳定性分析，北京农学院学报，2012，27(1)，32-35.)，公众可从野外采集，也可从北京农学院获得，该生物材料只为重复本发明的相关实验所用，不可作为其它用途使用。本申请中简称金银木假尾孢叶斑病菌。[0030]下述实施例中的棉花红点病菌(Fusarium monihforme)(任娜敏，马焕普，刘志民.拮抗放线菌Fl发酵液抑菌谱及稳定性分析，北京农学院学报，2012，27 (I)，32-35.)，公众可从野外采集，也可从北京农学院获得，该生物材料只为重复本发明的相关实验所用，不可作为其它用途使用。本申请中简称棉花红点病菌。
[0031]下述实施例中的大花红景天(Rhodiola crenulata)的干燥根,产地西藏,购买自安徽亳州中药材市场。
[0032]下述实施例中的高山红景天(Rhodiola sachalinensis)的干燥根,产地长春,购买自安徽亳州中药材市场。
[0033]下述实施例中的小花红景天的干燥根，产地西藏，购买自安徽亳州中药材市场。
[0034]下述实施例中的95%乙醇水溶液是乙醇体积百分含量为95%的水溶液。下述实施例中红景天提取物的制备均在20-25°C进行。
[0035]实施例1、红景天提取物的制备及其抑制植物病原真菌实验
[0036]1、红景天提取物的制备
[0037]本步骤制备了下述14种红景天提取物:大花红景天95%乙醇提取物、小花红景天95%乙醇提取物、高山红景天95%乙醇提取物、大花红景天石油醚萃取物、大花红景天乙酸乙酯萃取物、大花红景天水溶物、大花红景天乙酸乙酯-石油醚洗脱物、大花红景天乙酸乙酯洗脱物、小花红景天石油醚萃取物、小花红景天乙酸乙酯萃取物、小花红景天水溶物、高山红景天石油醚萃取物、高山红景天 乙酸乙酯萃取物、高山红景天水溶物。具体制备方法如下:
[0038]1.1大花红景天提取物的制备
[0039]I)将大花红景天的干燥根在液氮中研磨粉碎后，加入95%乙醇水溶液进行提取，收集提取液，减压浓缩除去所述提取液中的乙醇得到浸膏，该浸膏即为大花红景天95%乙醇提取物；
[0040]2)将步骤I)的大花红景天95%乙醇提取物用水分散成混悬液，用石油醚萃取该混悬液，分别收集石油醚相和水相，减压浓缩除去该石油醚相中的石油醚即得到大花红景天石油醚萃取物；
[0041]3)用乙酸乙酯萃取步骤2)的水相，分别收集乙酸乙酯相和水相，减压浓缩除去该乙酸乙酯相中的乙酸乙酯即得到大花红景天乙酸乙酯萃取物，减压浓缩除去该水相中的水即得到大花红景天水溶物；
[0042]4)将步骤3)的大花红景天乙酸乙酯萃取物进行硅胶柱层析得到大花红景天乙酸乙酯洗脱物；所述硅胶柱层析的洗脱是先用乙酸乙酯-石油醚进行洗脱然后再用乙酸乙酯进行洗脱，收集用乙酸乙酯洗脱得到的洗脱液，得到大花红景天乙酸乙酯洗脱物；所述乙酸乙酯-石油醚是乙酸乙酯和石油醚按照1:1的体积比混合得到的混合物。具体方法如下:
[0043]采用瑞典biotage公司的色谱仪(SP1-B2B0)、采用瑞典biotage公司的目录号为FSK0-1107-0100的SNAP Cartridge KP-SillOOg的层析柱进行硅胶柱层析。其中，色谱仪带有紫外检测器，目录号为FSK0-1107-0100的SNAP Cartridge KP-SillOOg的层析柱的柱长为16cm,内径为4cm,层析介质为硅胶(200-300目),该层析柱中的硅胶质量为100g,该层析柱的柱床体积为145ml。
[0044]将步骤3)的大花红景天乙酸乙酯萃取物与硅胶(200-300目)按质量比1:1拌样，将该样品上完样后，用上述乙酸乙酯-石油醚洗脱至254nm不再出现色谱峰，共用20个柱体积的乙酸乙酯-石油醚洗柱，流速为20ml/min，收集该20个柱体积的乙酸乙酯-石油醚洗脱出的液体，将该液体称为大花红景天乙酸乙酯-石油醚洗脱液，减压浓缩除去该大花红景天乙酸乙酯-石油醚洗脱液中的乙酸乙酯-石油醚，得到大花红景天乙酸乙酯-石油醚洗脱物；接着再用乙酸乙酯洗脱至254nm不再出现色谱峰，共用7个柱体积的乙酸乙酯洗脱，流速为20ml/min，收集该7个柱体积的乙酸乙酯洗脱出的液体，将该液体称为大花红景天乙酸乙酯洗脱液，减压浓缩除去该大花红景天乙酸乙酯洗脱液中的乙酸乙酯，得到大花红景天乙酸乙酯洗脱物。
[0045]1.2小花红景天提取物的制备
[0046]I)将小花红景天的干燥根在液氮中研磨粉碎后，加入95%乙醇水溶液进行提取，收集提取液，减压浓缩除去所述提取液中的乙醇得到浸膏，该浸膏即为小花红景天95%乙醇提取物；
[0047]2)将步骤I)的小花红景天95%乙醇提取物用水分散成混悬液，用石油醚萃取该混悬液，分别收集石油醚相和水相，减压浓缩除去该石油醚相中的石油醚即得到小花红景天石油醚萃取物；
[0048]3)用乙酸乙酯萃取步骤2)的水相，分别收集乙酸乙酯相和水相，减压浓缩除去该乙酸乙酯相中的乙酸乙酯即得到小花红景天乙酸乙酯萃取物，减压浓缩除去该水相中的水即得到小花红景天水溶物。
[0049]1.3高山红景天提取物的制备
[0050]I)将高山红景天的干燥根在液氮中研磨粉碎后，加入95%乙醇水溶液进行提取，收集提取液，减压浓缩除去所述提取液中的乙醇得到浸膏，该浸膏即为高山红景天95%乙醇提取物；
[0051]2)将步骤I)的高山红景天95`%乙醇提取物用水分散成混悬液后，用石油醚萃取该混悬液，分别收集石油醚相和水相，减压浓缩除去该石油醚相中的石油醚即得到高山红景天石油醚萃取物；
[0052]3)用乙酸乙酯萃取步骤2)的水相，分别收集乙酸乙酯相和水相，减压浓缩除去该乙酸乙酯相中的乙酸乙酯即得到高山红景天乙酸乙酯萃取物，减压浓缩除去该水相中的水即得到高山红景天水溶物。
[0053]2、红景天提取物抑制植物病原真菌的活性
[0054]分别以番茄灰霉病菌、桃褐腐病菌、李干腐病菌、白菜黑斑病菌、马铃薯干腐病菌、金银木假尾孢叶斑病菌和棉花红点病菌这7种真菌菌株中的一种菌株为供试菌株，按照下述实验方法测定步骤I的14种红景天提取物的抑制植物病原真菌的活性:
[0055]将步骤I中除大花红景天95%乙醇提取物、小花红景天95%乙醇提取物和高山红景天95%乙醇提取物外的11种红景天提取物中的每一种红景天提取物分别单独溶于二甲基亚砜(DMSO)中，使每一种红景天提取物的浓度均为10mg/mL，得到浓度均为10mg/mL的以下11种红景天提取物二甲基亚砜溶液:10mg/mL的大花红景天石油醚萃取物二甲基亚砜溶液、10mg/mL大花红景天乙酸乙酯萃取物二甲基亚砜溶液、10mg/mL大花红景天水溶物二甲基亚砜溶液、10mg/mL大花红景天乙酸乙酯-石油醚洗脱物二甲基亚砜溶液、10mg/mL大花红景天乙酸乙酯洗脱物二甲基亚砜溶液，10mg/mL小花红景天石油醚萃取物二甲基亚砜溶液、lOmg/mL小花红景天乙酸乙酯萃取物二甲基亚砜溶液、10mg/mL小花红景天水溶物二甲基亚砜溶液、10mg/mL高山红景天石油醚萃取物二甲基亚砜溶液，10mg/mL高山红景天乙酸乙酯萃取物二甲基亚砜溶液、10mg/mL高山红景天水溶物二甲基亚砜溶液。
[0056]将步骤I中的大花红景天95%乙醇提取物、小花红景天95%乙醇提取物和高山红景天95%乙醇提取物分别单独溶于二甲基亚砜(DMSO)中，使每一种红景天提取物的浓度均为100mg/mL,得到100mg/mL大花红景天95%乙醇提取物二甲基亚砜溶液、100mg/mL小花红景天95%乙醇提取物二甲基亚砜溶液和lOOmg/mL高山红景天95%乙醇提取物二甲基亚砜溶液。
[0057]吸取浓度为10mg/mL的一种红景天提取物二甲基亚砜溶液ImL加到装有IOOmL融化的PDA培养基(45°C )的三角瓶中混匀，得到IOlml药品培养基，该IOlml培养基平均倒入5个灭菌培养皿中(直径9cm)，制成该种红景天提取物的含量为0.lmg/mL的带药培养基平板。
[0058]吸取浓度为100mg/mL的一种红景天提取物二甲基亚砜溶液ImL加到装有IOOmL融化的PDA培养基(45°C )的三角瓶中混匀，得到IOlml药品培养基，该IOlml培养基平均倒入5个灭菌培养皿中(直径9cm)，制成该种红景天提取物的含量为lmg/mL的带药培养基平板。
[0059]吸取ImL 二甲基亚砜加到装有IOOmL融化的PDA培养基(45°C )的三角瓶中混匀，得到IOlml对照培养基，该IOlml对照培养基平均倒入5个灭菌培养皿中(直径9cm)，制成
对照培养基平板。
[0060]每一种供试菌株的测定方法均如下:供试菌株在PDA培养基中于25°C培养5天后在菌落边缘菌丝生长旺盛处用打孔器打取直径为0.8cm的菌饼，分别接种于每个培养皿中央(有菌丝的一面向下)。每个带药培养基平板和每个对照培养基平板各放一个菌饼，每处理设3个重复(每个重复I个平板)，25°C培养箱中培养7天后，采用十字交叉法测定菌落直径，按以下公式计算抑菌率:
[0061 ] 抑菌率=(对照培养基平板菌落直径-0.8)-(带药培养基平板菌落直径-0.8)八对照培养基平板菌落直径-0.8)
[0062]其中，PDA培养基按照如下方法配制:马铃薯200g (去皮的马铃薯切成小块，煮沸30分钟过滤去滤液)、葡萄糖20g，琼脂18-20g，用蒸馏水定容至1000ml，121°C蒸气灭菌20mino
[0063]结果如表1-4所示，表明大花红景天95%乙醇提取物、小花红景天95%乙醇提取物和高山红景天95%乙醇提取物在浓度为lmg/ml时，对番茄灰霉病病菌和白菜黑斑病菌具有明显的抑制作用，但对马铃薯干腐病菌、李干腐病菌、金银木假尾孢叶斑病菌以及棉花红点病菌均未表现出抑制作用:大花红景天95%乙醇提取物在浓度为lmg/ml时，对番茄灰霉病病菌的抑菌率达到0.523，对白菜黑斑病菌的抑菌率达到0.490 ;小花红景天95%乙醇提取物在浓度为lmg/ml时，对番茄灰霉病病菌的抑菌率达到0.404，对白菜黑斑病菌的抑菌率达到0.449 ;高山红景天95%乙醇提取物在浓度为lmg/ml时，对番茄灰霉病病菌的抑菌率达到0.510，对白菜黑斑病菌的抑菌率达到0.337。大花红景天乙酸乙酯萃取物在浓度为0.lmg/ml时对番茄灰霉病病菌的抑菌率达到0.580，大花红景天乙酸乙酯洗脱物在浓度为0.lmg/ml时对番茄灰霉病病菌的抑菌率达到0.690 ;大花红景天乙酸乙酯萃取物在浓度为0.lmg/ml时对白菜黑斑病菌的抑菌率达到0.406，大花红景天乙酸乙酯洗脱物在浓度为
0.lmg/ml时对白菜黑斑病菌的抑菌率达到0.376。
[0064]表1、红景天95%乙醇提取物(浓度=lmg/ml)对植物病原真菌的抑菌率
[0065]
【权利要求】
1.红景天提取物在抑制植物病原真菌中的应用，所述红景天提取物的制备方法包括:用95%乙醇水溶液提取红景天根，收集提取液并除去所述提取液中的乙醇，得到红景天95%乙醇提取物，所述红景天95%乙醇提取物为红景天提取物； 所述植物病原真菌为番茄灰霉病菌和白菜黑斑病菌中的二种或一种；所述红景天为大花红景天、高山红景天和/或小花红景天。
2.红景天提取物在抑制植物病原真菌中的应用，所述红景天提取物的制备方法包括: 1)用95%乙醇水溶液提取红景天根，收集提取液并除去所述提取液中的乙醇，得到红景天95%乙醇提取物； 2)将所述红景天95%乙醇提取物用水分散成混悬液，用石油醚萃取所述混悬液，收集水相，用乙酸乙酯萃取所述水相，收集乙酸乙酯相，除去所述乙酸乙酯相中的乙酸乙酯即得到红景天乙酸乙酯萃取物；所述红景天乙酸乙酯萃取物为红景天提取物； 所述植物病原真菌为番茄灰霉病菌和白菜黑斑病菌中的二种或一种；所述红景天为大花红景天、高山红景天和/或小花红景天。
3.红景天提取物在抑制植物病原真菌中的应用，所述红景天提取物的制备方法包括: 1)用95%乙醇水溶液提取红景天根，收集提取液并除去所述提取液中的乙醇，得到红景天95%乙醇提取物； 2)将所述红景天95%乙醇提取物用水分散成混悬液，用石油醚萃取所述混悬液，收集水相，用乙酸乙酯萃取所述水相，收集乙酸乙酯相，除去所述乙酸乙酯相中的乙酸乙酯即得到红景天乙酸乙酯萃取物； 3)将步骤2)的红景天乙酸乙酯萃取物进行硅胶柱层析得到红景天乙酸乙酯洗脱物；所述硅胶柱层析的洗脱是先用乙酸乙酯-石油醚进行洗脱然后用乙酸乙酯进行洗脱，收集用乙酸乙酯洗脱得到的洗脱液，除去洗脱液中的乙酸乙酯即得到红景天乙酸乙酯洗脱物；所述乙酸乙酯-石油醚是乙酸乙酯和石油醚按照1:1的体积比混合得到的混合物；所述红景天乙酸乙酯洗脱物为红景天提取物； 所述植物病原真菌为番茄灰霉病菌和白菜黑斑病菌中的二种或一种；所述红景天为大花红景天。
4.红景天提取物的制备方法，包括:用95%乙醇水溶液提取红景天根，收集提取液并除去所述提取液中的乙醇，得到红景天95%乙醇提取物，所述红景天95%乙醇提取物为红景天提取物； 所述红景天为大花红景天、高山红景天和/或小花红景天。
5.红景天提取物的制备方法，包括: 1)用95%乙醇水溶液提取红景天根，收集提取液并除去所述提取液中的乙醇，得到红景天95%乙醇提取物； 2)将所述红景天95%乙醇提取物用水分散成混悬液，用石油醚萃取所述混悬液，收集水相，用乙酸乙酯萃取所述水相，收集乙酸乙酯相，除去所述乙酸乙酯相中的乙酸乙酯即得到红景天乙酸乙酯萃取物；所述红景天乙酸乙酯萃取物为红景天提取物； 所述红景天为大花红景天、高山红景天和/或小花红景天。
6.红景天提取物的制备方法，包括: I)用95%乙醇水溶液提取红景天根，收集提取液并除去所述提取液中的乙醇，得到红景天95%乙醇提取物； 2)将所述红景天95%乙醇提取物用水分散成混悬液，用石油醚萃取所述混悬液，收集水相，用乙酸乙酯萃取所述水相，收集乙酸乙酯相，除去所述乙酸乙酯相中的乙酸乙酯即得到红景天乙酸乙酯萃取物； 3)将步骤2)的红景天乙酸乙酯萃取物进行硅胶柱层析得到红景天乙酸乙酯洗脱物；所述硅胶柱层析的洗脱是先用乙酸乙酯-石油醚进行洗脱然后用乙酸乙酯进行洗脱，收集用乙酸乙酯洗脱得到的洗脱液，得到红景天乙酸乙酯洗脱物；所述乙酸乙酯-石油醚是乙酸乙酯和石油醚按照1:1的体积比混合得到的混合物；所述红景天乙酸乙酯洗脱物为红景天提取物； 所述红景天为大花红景天。
7.由权利要求4-6中任一所述的制备方法制备的红景天提取物。
8.红景天在制备植物病原真菌抑制剂中的应用，所述植物病原真菌为番茄灰霉病菌和白菜黑斑病菌中的二种或一种；所述红景天为大花红景天、高山红景天和/或小花红景天。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于:所述植物病原真菌抑制剂的活性成分为权利要求7所述的红景天提取物。
10.植物病原真菌抑制剂，它的活性成分为权利要求7所述的红景天提取物； 所述植物病原真菌为番茄灰霉病菌和白菜黑斑病菌中的二种或一种；所述红景天为大花红景天、高山红景天和/或小花红景`天。
【文档编号】A01P3/00GK103814954SQ201410069489
【公开日】2014年5月28日 申请日期:2014年2月27日 优先权日:2014年2月27日
【发明者】柳春梅, 马兰青, 赵晓萌, 王树芳, 冯静, 郭辉力, 杨亚东 申请人:北京农学院