一种添加萜品醇促进樟芝液态发酵菌丝生长及高产萜类化合物的方法
【专利摘要】本发明公开了一种添加萜品醇促进樟芝液态发酵中菌丝生长及高产萜类化合物的方法，属于生物工程【技术领域】，可用于樟芝液态发酵高产三萜等萜类化合物及菌丝体。其中，萜品醇的添加方式为：将萜品醇溶解在DMSO或75%乙醇中，再添加到液体发酵培养基中；添加量为10~1000μg/L。添加萜品醇后，与对照组（添加相应量的DMSO或75%乙醇）相比：樟芝生物量（g/L）提高6%左右；总萜类化合物产量（μg/L）提高25倍左右；其中三萜产量（mg/L）提高36%左右。三萜理研究实验表明三萜具有抗癌、抗炎、抗病毒、抗氧化、降血压及保肝等多种活性，在保肝护肝方面有极大的应用价值。本发明可应用于樟芝液态发酵提高樟芝总萜类化合物产量、三萜产量及菌丝体产量等，进而提高樟芝液态发酵的生产效率及效益，对促进樟芝工业化大规模生产具有重大意义。
【专利说明】—种添加萜品醇促进樟芝液态发酵菌丝生长及高产萜类化合物的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于生物工程【技术领域】，具体涉及一种添加萜品醇促进樟芝液态发酵菌丝生长及高产萜类化合物的方法。
【背景技术】
[0002]樟芝(An trodi a cinnamomea ),又名牛樟芝或牛樟燕，为台湾特有的一种药用真菌，素有台湾“森林红宝石”之美誉。长期以来，樟芝作为传统药方被台湾民间用于解酒保肝，治疗肝痛、肝癌、食物中毒、腹痛、腹泻、炎症及皮肤瘙痒等，疗效显著。现在药理研究证实樟芝子实体及发酵菌丝体提取物在保肝护肝、治疗肝癌、抗氧化及抗肿瘤等方面确有独特功效。迄今为止，人们已从樟芝子实体及发酵物中分离得到70多种活性物质，包括多糖、二萜类、三萜类、留体类及苯环衍生物等，其药用价值远高于灵芝、人参、冬虫夏草等传统药材，是名符其实的药材王中之王，但樟芝强烈的寄主专一性、自然界数量稀少及生长缓慢的特点使得樟芝产品长期供不应求，市场价格极高，被称为世界上最昂贵的药用真菌。
[0003]药理研究实验表明:樟芝三萜具有抗癌、抗炎、抗病毒、抗氧化、降血压及保肝等多种活性。从樟芝固态发酵菌丝体乙醇提取物中分离纯化的三萜类化合物具有明显抑制癌细胞增殖，浸润，转移，诱导凋亡等活性，部分三萜表现出保护肝脏免受酒精或者四氯化碳的损伤及降低肝纤维化等活性；从樟芝甲醇提取物中分离的粗三萜具有良好的抗氧化作用，能通过清除羟基自由基和过氧化物离子，降低HepG2中H2O2诱导的脂质过氧化作用，清除AAPH/亚油酸系统中的超氧化物离子；野生樟芝和固态培养樟芝的的甲醇提取物中的羊毛甾烷类三萜化合物能抑制自发性高血压中血管紧张素酶的作用，有效降低收缩压和舒张压；此外，有小鼠实验表明，樟芝三萜的提取物还具有解乏、提高运动机能的能力。因此，樟芝三萜具有开发为功能性食品、保健品乃至药物的巨大潜力。
[0004]本发明提供了一种添加萜品醇促进樟芝液态发酵菌丝生长及高产萜类化合物的方法，使樟芝液态发酵生物量(g/L)提高6%左右，总萜类化合物产量(Pg/L)提高25倍左右，其中二帖广量(mg/L)提闻36%左右，大幅提闻了工业化生广棒芝的效率及效益。
【发明内容】
[0005]本发明所要解决的技术问题是一种添加萜品醇促进樟芝液态发酵菌丝生长及高产萜类化合物的方法，可用于樟芝液态发酵高产三萜等萜类化合物及樟芝菌丝体等。
[0006]为解决上述技术问题，本发明所提供的具体技术方案如下:
将萜品醇溶于DMSO或75%乙醇后，再添加到樟芝液体培养基中对樟芝进行液体发酵培养，以促进樟芝菌丝生长及高产三萜等萜类化合物。
[0007]所述萜品醇添加方式为，先将萜品醇溶解在DMSO或75%乙醇等溶剂中，再添加到液体发酵培养基中；
所述職品醇添加量为，10?1000 μ g/L ； 所述樟芝培养方式为液体发酵培养等。
[0008]本发明的有益效果如下:
将本发明提供的萜品醇添加到樟芝液体培养基中对樟芝进行液态发酵培养，可使樟芝液态发酵生物量(g/L)提高6%左右，总萜类化合物产量(Pg/L)提高25倍左右，其中三萜产量(mg/L)提闻36%左右，大幅提闻了工业化生广棒芝的效率及效益。
[0009]显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术前提下，还可以做出其他多种形式的修改、替换或变更。例如将萜品醇溶解在不同的溶剂中添加、添加不同浓度的萜品醇、添加含萜品醇的混合物、应用于固态发酵等不同培养方法等。
[0010]以下通过实例形式的【具体实施方式】对本发明的上述内容再做进一步详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下实例，凡基于本发明上述内容所实现的【技术领域】均属于本发明的范围。
[0011]表I添加低浓萜品醇对樟芝液态发酵生物量及三萜产量的影响。
[0012]注:表中空白对照为于发酵培养基中添加10 yL DMSO溶剂。
[0013]表2添加中浓萜品醇对樟芝液态发酵生物量及三萜产量的影响。
[0014]注:表中空白对照为于发酵培养基中添加10 yL DMSO溶剂。
[0015]
【具体实施方式】
[0016]实施例1:添加低浓職品醇对樟芝液态发酵生物量及三職产量的影响
1.菌种:以保藏号为ATCC N0.200183的樟芝菌株作为出发菌进行液态发酵。
[0017]2.发酵培养基(g/L):葡萄糖33.0，蛋白胨2.8，黄豆粉2.0，MgSO4 1.0, KH2PO42.0，麸皮 2.0, pH 4.5。
[0018]3.萜品醇的添加:将萜品醇溶解在DMSO中，配制成浓度为lg/L的溶液，吸取10μ L添加到发酵培养基中。
[0019]4.樟芝液态发酵培养:按1.0X 15个/mL的接种量将樟芝孢子在接入装有100mL发酵培养基(添加萜品醇)的500 mL三角瓶中，100 rpm，26 °G恒温培养12 d。对照为添加10 μ L DMSO溶剂。每组做3个重复。
[0020]5.生物量的检测:将发酵完的樟芝发酵产物用4层纱布过滤，并用去离子水反复洗涤菌球，将获得的菌球真空冷冻干燥后称重。
[0021]6.三萜产量的检测:准确称取50 mg樟芝菌丝体，添加500 μ L甲醇过夜提取，取提取液100 μ L于10 mL具塞磨口试管，水浴蒸干，加0.3 mL新鲜配制的5%香草醛-冰醋酸溶液和I mL的高氯酸，60°C反应20 min，冰水冷却，加10 mL冰醋酸，摇匀，在550 nm波长下测定吸光度，根据标准曲线计算总三萜的含量。相关结果见表1，添加低浓度萜品醇后，樟芝菌丝体中三萜含量提高14.17%左右。
[0022]表I
【权利要求】
1.一种添加萜品醇促进樟芝液态发酵菌丝生长及高产萜类化合物的方法，其特征在于，先将萜品醇溶解在DMSO或水中，再按10?1000 μ g/L的添加量将萜品醇溶液添加到液体发酵培养基中进行樟芝液体发酵培养，以提高樟芝液体发酵的萜类化合物及菌丝体产量。
2.权利要求1所述的方法，其特征为萜品醇添加方式为，先将萜品醇溶解在DMSO或75%乙醇等溶剂中，再添加到液体发酵培养基中。
3.权利要求1所述的方法，其特征为萜品醇添加量为10?1000μ g/L。
4.权利要求1所述的方法，其特征为樟芝培养方式为液体发酵培养。
【文档编号】A01G1/04GK104126412SQ201410192394
【公开日】2014年11月5日 申请日期:2014年5月9日 优先权日:2014年5月9日
【发明者】陆震鸣, 许正宏, 史劲松, 耿燕, 李华祥, 陆育娇, 钱建瑛 申请人:江南大学