一种快速繁殖白芨试管苗的方法
【专利摘要】本发明公开了一种快速繁殖白芨试管苗的方法，它是将白芨的种子经萌发培养、原球茎分化培养、鳞茎诱导培养和驯化后，得到白芨幼苗的方法。与现有技术相比，本发明方法具有萌发率高、培养时间短、整齐性好和变异率小的优点，具有良好的市场前景。
【专利说明】一种快速繁殖白芨试管苗的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于植物栽培【技术领域】，具体涉及一种快速繁殖白芨试管苗的方法。
【背景技术】
[0002] 白蓝，（学名：Bletilla striata)又名连及草、甘根、白给、箬兰、朱兰、紫兰、紫 蕙、百笠，多年生草本球根植物（块根），植株高18?60厘米。主要分布在中国、日本以及 缅甸北部。主要花期在春季，但依各地气候之不同，晚冬至夏初都可能开花。白芨有广泛的 药用价值及园林价值。主要用于收敛止血，消肿生肌。花有紫红、白、蓝、黄和粉等色，可盆 栽室内观赏，亦可点缀于较为荫蔽的花台、花境或庭院一角。
[0003] 白芨喜温暖、阴湿的环境，如野生山谷林下处。稍耐寒，长江中下游地区能露地栽 培。耐阴性强，忌强光直射，夏季高温干旱时叶片容易枯黄。宜排水良好含腐殖质多的沙壤 土。白芨常生长于较湿润的石壁、苔藓层中，常与灌木相结合，或者生长于林缘、草丛、有山 泉的地方，亦生于海拔1〇〇?3200米的常绿阔叶林下，栋树林或针叶林下，在北京和天津有 栽培。白芨生长的石头均是砂岩类，这样白芨才能吸收到毛管水、从而牢牢地吸在上面。
[0004] 长期以来，白芨市场主要依靠野生资源。由于用途的广泛、需求量的增加以及价格 的高涨，导致资源被掠夺式采挖，加上生态环境的破坏，野生资源日渐枯竭，白芨已成为我 国二级保护植物。因此，在快速繁殖白芨方面，有着的良好的市场前景。
【发明内容】
[0005] 本发明所要解决的技术问题，是提供一种快速繁殖白芨试管苗的方法。
[0006] 为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：
[0007] -种快速繁殖白芨试管苗的方法，它包括以下步骤：
[0008] (1)选取白芨人工授粉后120d的塑果，依次用去污剂和水清洗后移入接种室内， 在超净工作台上用75v/v%酒精水溶液浸泡45?60s后,放置于氯化萊水溶液中浸泡10? 15min，得到白芨无菌塑果；
[0009] (2)将步骤（1)中所得的白芨无菌塑果在超净台上用解剖刀剖开，取出种子，接种 于液体培养基上，在22?25°C、80?120转/min的条件下，培养45d，过滤得到白芨原球 茎；
[0010] (3)将步骤（2)中所得的白芨原球茎接种于原球茎分化培养基上，在25?28°C、 光照强度1000?15001UX、光照时间11?13h/d的条件下培养75d，得到白芨小苗；
[0011] (4)将步骤（3)中所得的白芨小苗接种到鳞茎诱导培养基中，在25?28°C、光照 度1000?15001ux、光照时间11?13h/d的条件下培养70d，选取基部形成直径4?7mm 鳞茎的白芨；
[0012] (5)将步骤⑷中选取的白芨用水清洗后，移置到铺有驯化栽培基质的苗床上，遮 阴80%，驯化6个月后，即可进行大田移栽。
[0013] 其中，步骤（1)中，所述的去污剂为普通家用洗衣液；所述的氯化汞水溶液中，氯 化汞的质量分数为0. I %?0. 15%。
[0014] 其中，步骤⑵中，所述的液体培养基为的组分为：N6培养基+萘乙酸0.5? I. Omg/L+ 鹿糖 25 ?30g/L，pH5. 6 ?5. 8。
[0015] 其中，步骤（2)中的培养条件为：在22?25°C条件下，前7d给予暗培养，之后光 照强度为1000?15001ux，光照时间11?13h/d。
[0016] 其中，步骤（3)中，所述的原球茎分化培养基的组分为：N6培养基+萘乙酸0.5? I. 5mg/L+ 鹿糖 25 ?30g/L+ 香蕉泥 60 ?80g/L+ 琼脂 4. 5 ?6g/L，pH5. 6 ?5. 8。
[0017] 其中，步骤（4)中，所述的鳞茎诱导培养基的组分为：1/2MS培养基+萘乙酸1? 2mg/L+ 鹿糖 25 ?30g/L+ 香蕉泥 60 ?80g/L+ 琼脂 4. 5 ?6g/L，pH 5. 6 ?5. 8 ;
[0018] 其中，步骤（5)中，所述的的驯化栽培基质由田园土、泥炭土和蛭石以重量比1 :1 : 0.5组成。
[0019] 有益效果：与现有技术相比，本发明具有如下优点：
[0020] 1、白芨塑果消毒后，置于超净工作台上用解剖刀剖开塑果，取出种子，接种到步骤 (2)中液体培养基上，采用N6培养基并配以生长素NAA 0. 5?I. Omg/L，在转速为80?120 转/min条件下进行培养，与现有的白芨种子萌发培养基相比，该方法腋芽萌发时间缩短了 一倍，且萌发率高（80 %以上），整齐性好，变异率小于1%。
[0021] 2、步骤（4)所述的鳞茎诱导培养基中，采用1/2MS(大量元素减半）并配以生长素 NAAl?2mg/L，与传统的培养技术相比，该方法能更好更快的促进白芨小苗基部膨大，形成 鳞茎，70d内即可使白芨组培苗的鳞茎膨大到直径4?7_。
【具体实施方式】
[0022] 根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实 施例所描述的内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本 发明。
[0023] 实施例1 : 一种高效快速繁殖白芨试管苗的方法，该方法包括以下步骤：
[0024] (1)9月，剪取白芨人工授粉后120d的塑果，用去污剂清洗lOmin，再用流水冲洗 IOmin,带入接种室，在超净工作台上用75v/v%酒精浸泡45?60s，再放置于氯化萊水溶液 中浸泡；
[0025] (2)将步骤⑴得到的白芨无菌塑果在超净工作台上用解剖刀剖开，取出种子，接 种于液体培养基上，在22?25°C、120转/min的条件下，培养20d，种子开始萌发，45d后， 通过显微镜观察，约85%的种子形成直茎0. 7?Imm的原球茎，变异率约为0. 8%，滤出原 球茎备用；其中，光照条件为：前7d给予暗培养，以后光照度为1000?15001uX、光照时间 12h/d ;所述的液体培养基组成为：萘乙酸0. 5mg/L+蔗糖30g/L+N6培养基+pH5. 8 ;
[0026] (3)将步骤（2)得到的白芨原球茎置于原球茎分化培养基中，在25?28°C、光照 度1000?15001UX、光照时间12h/d的条件下培养75d，白芨长至5cm高左右；其中，所述的 原球茎分化培养基组成为：萘乙酸I. 〇mg/L+蔗糖30g/L+N6培养基+香蕉泥80g/L+琼脂 6g/L+pH5. 8 ；
[0027] (4)将步骤（3)中得到的白芨小苗接种到鳞茎诱导培养基中，在25?28°C、光照 度1000?15001UX、光照时间12h/d的条件下培养70d，白芨的基部膨大形成鳞茎，经过测 量，形成的鳞茎大多直径为4?7_，平均直径为5. 81_，这时可进行驯化移栽，其中，所述 的鳞茎诱导培养基组成为：萘乙酸2mg/L+蔗糖230g/L+香蕉泥80g/L+l/2MS培养基+琼脂 6g/L+pH 5. 8 ；
[0028] (5)将步骤（4)得到的成苗从瓶内取出用清水冲洗去除培养基后，移置铺有驯化 栽培基质的苗床上，并遮阴保湿，驯化6个月后，即可进行大田移栽。
[0029] 实施例2 :
[0030] 与实施例1基本相同，步骤（2)、步骤（3)、步骤（4)中种子萌发，原球茎分化培养、 鳞茎诱导培养三个阶段分别以表1所列培养基组合进行筛选，以优选最适培养基组合配 方。表1说明如下：
[0031] ①培养基配方优化主要是设计不同的基础培养基、激素浓度、天然附加物等对培 养基进行了优化设计，培养环境为温度25°c、光照度1000?15001UX、光照时间12h/d培养 室内。
[0032] ②针对生产，不同的培养阶段设计了三组培养基配方，种子萌发阶段主要观察种 子萌发的快慢、长势、颜色（翠绿为佳）等指标判断配方是否合理；原球茎分化阶段主要观 察白芨原球茎的分化率及分化后小苗高度（越高越好）、粗度（越粗越好）、玻璃化程度（越 低越好）等指标判断配方是否合理；鳞茎诱导培养阶段，主要通关观察白芨苗基部的膨大 程度（越大越好）、玻璃化程度（越低越好）、颜色等指标来判断配方的好坏。通过观察和 各项指标的测定，并用"★"和"☆"的多少代表配方的好坏，★越多表示越好，☆比★要低 一个等次。
[0033] 表1培养基配方筛选
[0034]
【权利要求】
1. 一种快速繁殖白芨试管苗的方法，其特征在于，包括以下步骤： (1) 选取白芨人工授粉后120d的塑果，依次用去污剂和水清洗后移入接种室内，在 超净工作台上用75v/v%酒精水溶液浸泡45?60s后,放置于氯化萊水溶液中浸泡10? 15min，得到白芨无菌塑果； (2) 将步骤（1)中所得的白芨无菌塑果在超净台上用解剖刀剖开，取出种子，接种于液 体培养基上，在22?25°C、80?120转/min的条件下，培养45d，过滤得到白芨原球茎； (3) 将步骤（2)中所得的白芨原球茎接种于原球茎分化培养基上，在25?28°C、光照 强度1000?15001ux、光照时间11?13h/d的条件下培养75d，得到白芨小苗； (4) 将步骤（3)中所得的白芨小苗接种到鳞茎诱导培养基中，在25?28°C、光照度 1000?15001ux、光照时间11?13h/d的条件下培养70d，选取基部形成直径4?7mm鳞茎 的白蓝； (5) 将步骤（4)中选取的白芨用水清洗后，移置到铺有驯化栽培基质的苗床上，遮阴 80%，驯化6个月后，即可进行大田移栽。
2. 根据权利要求1所述的快速繁殖白芨试管苗的方法，其特征在于，步骤（1)中，所 述的去污剂为普通家用洗衣液；所述的氯化汞水溶液中，氯化汞的质量分数为0. 1 %? 0· 15%。
3. 根据权利要求1所述的快速繁殖白芨试管苗的方法，其特征在于，步骤（2)中，所述 的液体培养基为的组分为：N6培养基+萘乙酸0. 5?1. 0mg/L+蔗糖25?30g/L，pH5. 6? 5. 8〇
4. 根据权利要求1所述的快速繁殖白芨试管苗的方法，其特征在于，步骤（2)中的培养 条件为：在22?25°C条件下，前7d给予暗培养，之后光照强度为1000?15001u X，光照时 间 11 ?13h/d。
5. 根据权利要求1所述的快速繁殖白芨试管苗的方法，其特征在于，步骤（3)中，所述 的原球茎分化培养基的组分为：N6培养基+萘乙酸0. 5?1. 5mg/L+蔗糖25?30g/L+香 蕉泥 60 ?80g/L+ 琼脂 4. 5 ?6g/L，ρΗ5· 6 ?5. 8。
6. 根据权利要求1所述的快速繁殖白芨试管苗的方法，其特征在于，步骤（4)中，所述 的鳞茎诱导培养基的组分为：1/2MS培养基+萘乙酸1?2mg/L+蔗糖25?30g/L+香蕉泥 60 ?80g/L+ 琼脂 4. 5 ?6g/L，pH 5. 6 ?5. 8 ;
7. 根据权利要求1所述的快速繁殖白芨试管苗的方法，其特征在于，步骤（5)中，所述 的的驯化栽培基质由田园土、泥炭土和蛭石以重量比1 :1 :〇. 5组成。
【文档编号】A01H4/00GK104255496SQ201410489589
【公开日】2015年1月7日 申请日期:2014年9月23日 优先权日:2014年9月23日
【发明者】史俊, 席刚俊, 徐超, 蒋新宇, 杨鹤同 申请人:江苏农林职业技术学院