本发明涉及水产养殖技术领域，具体涉及一种黑斑石斑鱼的人工繁殖方法。
背景技术：
黑斑石斑鱼，(学名：Epinephelus tukula)俗名金钱斑，又名蓝身大石斑，为辐鳍鱼纲鲈形目鲈亚目鮨科石斑鱼属的鱼类。分布于印度西太平洋区，从红海、东非至澳洲昆士兰海域，栖息深度10-150米，体长可达200厘米，重量110公斤。
黑斑石斑鱼为世界名贵暖水性鱼类，其主要生活在珊瑚礁区，为底栖性鱼类，属肉食性，以鱼类、甲壳类等为食，可做为食用鱼及游钓鱼。体型仅次于鞍带石斑鱼，生长较快，是极具养殖前途的石斑鱼物种。
目前，各种石斑鱼类均遭到持续的滥捕，多种石斑鱼类面临绝种危机。过度的捕捞，使得鱼的数量大幅下跌，导致成功繁殖的机会锐减。其中，黑斑石斑鱼国内外市场苗种并无供应，仅少量苗种来自天然海域。
技术实现要素：
本发明目的在于提供一种黑斑石斑鱼的人工繁殖方法，通过对黑斑石斑鱼的亲本培育，促使亲鱼产卵，然后用受精卵孵化出仔鱼、培育成能供养殖的鱼种，为规模化发展黑斑石斑鱼养殖提供合理的、孵化率高的解决方案。
一种黑斑石斑鱼的人工繁殖方法，包括以下步骤：
(1)亲本选择
a.雌性亲本：选择8龄以上、体重20-40kg、体型正常、无病害、活力强的黑斑石斑鱼作为雌性亲本；
b.雄性亲本：选择8龄以上、体重25-40kg、体型正常、无病害、活力强的黑斑石斑鱼作为雄性亲本；
(2)亲本的培育池塘
培育亲本的池塘面积为2亩，水深3－3.5m，设进、排水口各1个，培育密度75－100尾/亩，雌雄比例为1：(0.5-1)；
(3)非繁殖季节亲鱼的培育
a.饲料及投喂：饲料种类为冰冻的蓝圆鲹、鲐鱼，切成合适亲鱼口径的小块，每二天投喂饲料1次，每次投喂以亲鱼停止摄食为度，每次投喂量为亲鱼体重的2.5％－3.0％；
b.培育水温与水质控制：在热带地区取露天池塘的自然水温进行亲鱼培育；
c.水质管理：每三天换水1次，换水量为池塘水量的25％，保持水体透明度在35－45cm；
(4)繁殖前的强化培育
a.培育水温：在热带地区，亲鱼的强化培育自11月至3月间进行，取自然水温，11月份池塘水温27－28℃开始，此后水温逐渐下降，至1月份时，水温为18－20℃，3月份时，水温上升至23－24℃；
b.强化培育中饲料的种类与用量：饲料种类分三种，第一种是5份鱿鱼+1份牡蛎，第二种是人工软颗粒饲料，含4份鳗鱼粉+6份鱼浆，混合后每公斤饲料添加维生素C 3克、维生素E 3克，制成软颗粒投喂，第三种是鲐鱼或蓝圆鲹，三种饲料轮换使用，每三天投喂1次，每次投喂量为亲鱼体重的2.0％－3.0％，投喂时间在上午进行；
c.水质管理：每5天换水1次，换水量为池塘水量的25％－30％，保持水体透明度在50cm以上；
(5)人工繁殖
a.催产时机的选择：在热带地区，经过强化培育的亲鱼一般三月份开始逐渐达到性腺成熟，日常管理中应注意观察，一旦发现亲鱼体色变深，即可进行人工催产；
b.催产剂与剂量：HCG-(200-400)单位+LHRH-(4-6)微克/kg体重，二种催产剂分别用0.6％氯化钠溶液溶解后，混匀后使用；
C.催产剂注射方式：将亲鱼从培育池塘捕起，选择腹部大、生殖孔微红的个体进行药物催产，采用腹腔注射方式，注射时间选择在10：00-12:00时进行，注射后，立即将亲鱼放回池塘；
d.亲鱼产卵：注射催产剂的次日可观察到亲鱼产卵，亲鱼产卵通常在16:00-19:00进行，持续1-2h；
(6)受精卵的收集与处理：
收集受精卵时，在培育池的增氧机前5～6m处设置集卵网，利用增氧机开动产生的水流，将受精卵收集到集卵网内，事先准备一洗卵盆，盆内放一只20目的手抄网，将受精卵倒入手抄网里，让受精卵从网目中滤下，撤去手抄网，然后用瓢在洗卵盆内顺时针轻轻地搅动，使水在盆内旋转，再以一条软管用虹吸法将聚集的坏卵和杂物去除，重复此法1～2次，用40目手抄网将受精卵捞起，新鲜海水冲洗后，称重，放入孵化网箱内；
(7)受精卵的孵化
准备一个容积500L、底部设有排水阀的孵化桶，在孵化桶内放置气石充气，将经受精卵放入孵化桶中孵化，受精卵孵化条件为水温23－30℃，盐度28－33，pH7.8～8.5，孵化密度为250－300万粒受精卵/m3，每2小时换水一次，每次换水量为孵化桶容积的一半，以保持孵化桶内海水的清新。
在本发明中，所述步骤(3)中，培育过程中需要定期消毒、防病：每十天对亲鱼池消毒防病1次，上旬用10％聚维铜碘溶液全池遍洒1次，使池塘水体呈0.1毫克/升浓度，中旬用二氧化氯全池遍洒1次，使池塘水体呈0.3毫克/升浓度，下旬用醋酸铜遍洒1次，使池塘水体呈0.5毫克/升浓度，防止细菌病、寄生虫病的发生。
在本发明中，所述步骤(5)b中，将300000单位HCG溶解在100ml0.6％氯化钠溶液中，再将5000微克LHRH溶解在100ml0.6％氯化钠溶液中，然后将二种溶液混合，每公斤亲鱼体重注射混合液0.2ml，注射时，先称取亲鱼体重，根据体重计算用量。
在本发明中，所述步骤(6)中，集卵网囊网长6m，囊口高1.2m，末端开口径约0.4m，两侧各设长6m左右的翼网，翼网中间高1.2m，末端高0.9m。
在本发明中，所述步骤(7)中，排除坏卵和杂物的方法：让气石停止充气10～15min，正常的受精卵在停气后会上浮，而死卵或未受精卵及少量杂物将沉于孵化桶的底部，开启孵化桶底部的排水阀，缓慢排水，将死卵或未受精卵及杂物排出，一边排水一边检查，当排出的水中出现正常受精卵时，则关闭排水阀，停止排水，恢复充气，并向孵化桶补充海水至正常水位，同时，要将所排出的受精卵收集称重，以便计算受精卵数量。
综上所述，本发明一种黑斑石斑鱼的人工繁殖法的有益效果为：
(1)黑斑石斑鱼是一个极其养前景的物种，本发明通过人工繁殖，获得批量的仔鱼，用于养殖生产。
(2)在本发明中，强化培育部分尤为重要，由于黑斑石斑鱼的性腺发育，需要有一个低温培育过程，然后在水温上升的过程中达到性腺成熟，并且，在上述降温继而升温的过程，需要配合合适的营养，营养不足很难使亲鱼性腺快速发育，营养过剩又使亲鱼体内积累过多的脂肪，本发明以三种饲料轮换使用的方法，能有效地促使亲鱼性腺得到很好的发育。
(3)在受精卵的收集和处理步骤中，提供了排除坏卵和杂物的方法，能更精确的收集受精卵并进行称重。
(4)通过本方法培育出的仔鱼养殖性能好，肉质鲜美，性价比高。
具体实施方式
以下将结合实施例对本发明的构思及产生的技术效果进行清楚、完整的描述，以充分地理解本发明的目的、特征和效果。显然，所描述的实施例只是本发明的一部分实施例，而不是全部实施例，基于本发明的实施例，本领域的技术人员在不付出创造性劳动的前提下所获得的其他实施例，均属于本发明保护的范围。
一种黑斑石斑鱼的人工繁殖方法，包括以下步骤：
(1)亲本选择
a.雌性亲本：选择8龄以上、体重20-40kg、体型正常、无病害、活力强的黑斑石斑鱼作为雌性亲本。
b.雄性亲本：选择8龄以上、体重25-40kg、体型正常、无病害、活力强的黑斑石斑鱼作为雄性亲本。
(2)亲本的培育池塘
培育亲本的池塘面积为2亩，水深3－3.5m，设进、排水口各1个，培育密度75－100尾/亩，雌雄比例为1：(0.5-1)。
(3)非繁殖季节亲鱼的培育
a.饲料及投喂：饲料种类为冰冻的蓝圆鲹、鲐鱼，切成合适亲鱼口径的小块，每二天投喂饲料1次，每次投喂以亲鱼停止摄食为度，每次投喂量为亲鱼体重的2.5％－3.0％；
b.培育水温与水质控制：在热带地区取露天池塘的自然水温进行亲鱼培育；
c.水质管理：每三天换水1次，换水量为池塘水量的25％，保持水体透明度在35－45cm。作为优选方案，水池需定期消毒、防病：每十天对亲鱼池消毒防病1次，上旬用10％聚维铜碘溶液全池遍洒1次，使池塘水体呈0.1毫克/升浓度，中旬用二氧化氯全池遍洒1次，使池塘水体呈0.3毫克/升浓度，下旬用醋酸铜遍洒1次，使池塘水体呈0.5毫克/升浓度，防止细菌病、寄生虫病的发生。
(4)繁殖前的强化培育
a.培育水温：在热带地区，亲鱼的强化培育自11月至3月间进行，取自然水温，11月份池塘水温27－28℃开始，此后水温逐渐下降，至1月份时，水温为18－20℃，3月份时，水温上升至23－24℃。作为优选方案，将精液取出后，注入试管密封，4℃下暂存，备用，暂存的精液在一周内仍有授精能力。作为另一个优选方案，可选择采用控温池塘培育亲鱼，可摹仿自然水温变化对水温进行调节，即从水温28℃开始进行强化培育，2个月内逐渐将水温降至18℃，然后，2个月内将水温逐渐升至25℃。
b.强化培育中饲料的种类与用量：饲料种类分三种，第一种是5份鱿鱼加1份牡蛎，第二种是人工软颗粒饲料，含4份鳗鱼粉加6份鱼浆，混合后每公斤饲料添加维生素C 3克、维生素E 3克，制成软颗粒投喂，第三种是鲐鱼或蓝圆鲹，三种饲料轮换使用，每三天投喂1次，每次投喂量为亲鱼体重的2.0％－3.0％，投喂时间在上午进行。强化培育部分在整个方法中尤为重要，由于黑斑石斑鱼的性腺发育，需要有一个低温培育过程，然后在水温上升的过程中达到性腺成熟，并且，在上述降温继而升温的过程，需要配合合适的营养，营养不足很难使亲鱼性腺快速发育，营养过剩又使亲鱼体内积累过多的脂肪，本发明以三种饲料轮换使用的方法，能有效地促使亲鱼性腺得到很好的发育。
c.水质管理：每5天换水1次，换水量为池塘水量的25％－30％，保持水体透明度在50cm以上。
(5)人工繁殖
a.催产时机的选择：在热带地区，经过强化培育的亲鱼一般三月份开始逐渐达到性腺成熟，日常管理中应注意观察，一旦发现亲鱼体色变深，即可进行人工催产。
b.催产剂与剂量：HCG-(200-400)单位+LHRH-(4-6)微克/kg体重，二种催产剂分别用0.6％氯化钠溶液溶解后，混匀后使用。作为优选方案，将300000单位HCG溶解在100ml0.6％氯化钠溶液中，再将5000微克LHRH溶解在100ml0.6％氯化钠溶液中，然后将二种溶液混合，每公斤亲鱼体重注射混合液0.2ml，注射时，先称取亲鱼体重，根据体重计算用量。
c.注射方式：将亲鱼从培育池塘捕起，选择腹部大、生殖孔微红的个体进行药物催产，采用腹腔注射方式，注射后，立即将亲鱼放回池塘，注射时间选择在10:00-12:00时行；
d.亲鱼产卵：注射催产剂的次日可观察到亲鱼产卵，亲鱼产卵通常在16:00-19:00进行，持续1-2h，开始时雄鱼追逐雌鱼，产卵时两鱼齐头并进向前游动，突然身体垂直冲出水面，雌雄亲鱼同时完成产卵、排精，之后分开游动或下沉到池底；
(6)受精卵的收集与处理
收集受精卵时，在培育池的增氧机前5～6m处设置集卵网，利用增氧机开动产生的水流，将受精卵收集到集卵网内，事先准备一洗卵盆，盆内放一只20目的手抄网，将受精卵倒入手抄网里，让受精卵从网目中滤下，撤去手抄网，这样可除去大的杂物，然后用瓢在洗卵盆内顺时针轻轻地搅动，使水在盆内旋转，这样可使大部分坏死的卵和一些杂物聚集在旋涡中央，再以一条软管用虹吸法将聚集的坏卵和杂物去除，重复此法1～2次，用40目手抄网将受精卵捞起，新鲜海水洗一、二遍，称重，放入孵化网箱内。
其中，集卵网为一种小型张网，用80目尼龙筛绢网缝合而成，囊网长6m，囊口高1.2m，末端开口径约0.4m，两侧各设长6m左右的翼网，翼网中间高1.2m，末端高0.9m，集卵网的上下纲分别系结浮子和沉子，设置在叶轮增氧机前方收集受精卵，一般集卵时间在1.0h左右，应及时将受精卵取出，受精卵量大时，应提前取出，然后继续集卵，收取受精卵时，提取囊袋，将系在囊袋末端的绳子解开，准备一塑料桶，将受精卵流入桶里，迅速将收集到的受精卵带到岸上作进一步处理。
作为优选方案，排除坏卵和杂物的方法为：让气石停止充气10～15min，正常的受精卵在停气后会上浮，而死卵或未受精卵及少量杂物将沉于孵化桶的底部，开启孵化桶底部的排水阀，缓慢排水，将死卵或未受精卵及杂物排出，一边排水一边检查，当排出的水中出现正常受精卵时，则关闭排水阀，停止排水，恢复充气，并向孵化桶补充海水至正常水位，同时，要将所排出的受精卵收集称重，以便计算受精卵数量。
(7)受精卵的孵化
准备一个容积500L、底部设有排水阀的孵化桶，在孵化桶内放置气石充气，将经受精卵放入孵化桶中孵化，受精卵孵化条件为水温23－30℃，盐度28－33，pH7.8～8.5，孵化密度为250－300万粒受精卵/m3，每2小时换水一次，每次换水量为孵化桶容积的一半，以保持孵化桶内海水的清新，孵化过程中，发现其中有死卵或未受精卵要及时排除。
黑斑石斑鱼的受精卵经孵化8小时左右，胚胎发育至原肠期，即可将受精卵包装、运输至育苗场，受精卵在孵化24－26小时后，即可孵出仔鱼，用于人工育苗。黑斑石斑鱼受精卵的包装运输方法为尼龙袋充氧运输法，一只70cm×40cm的尼龙袋，装上过滤海水5－8L，约占尼龙袋容积的1/4，放入受精卵100g，排除袋内空气，充进氧气并扎紧袋口，再用纸箱或泡沫塑料箱包装好，立即装上运输工具。运输受精卵过程中，气温较高时，包装箱中可加上适量冰袋降温，适宜的运输温度为24－25℃度。
上述对本发明的实施方式作了详细说明，但是本发明并不限于上述实施方式，在本领域的普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下作出各种变化。