一种用水培甘蓝室内大量饲养小菜蛾的方法与流程

本发明涉及一种用水培甘蓝室内大量饲养小菜蛾的方法。

二、

背景技术：

小菜蛾Plutella xylostella(L.)属鳞翅目，菜蛾科，别名:小青虫、两头尖、吊丝虫，主要危害甘蓝、青花菜、芥菜、花椰菜、白菜、油菜、萝卜等40种十字花科作物，是世界性十字花科蔬菜的重要害虫之一(冯夏等，2011)，具有远距离迁飞的能力(邢鲲等，2015)。小菜蛾分布广，繁殖力高，生活周期短，世代重叠，抗药性发展快(梁沛等，2001)等特点，成为昆虫抗药性、生理学、病理学、毒理学等领域重要的研究对象(杨峰山，2004),是实验室昆虫研究、生物农药毒力效价测试的标准虫种(林坤，2011)。

小菜蛾Plutella xylostella L的室内人工饲养是开展小菜蛾各项研究的基础。目前，小菜蛾实验室饲养常用的方法有柯礼道和方菊莲(1981)用发芽菜籽法，刘传秀等(1981)用萝卜苗蛭石法，这两种用幼苗饲养的方法，饲料容易获取，但幼苗提供的食物量有限，难以大量饲养，且小菜蛾幼虫生长发育过程中，转接次数多，部分若虫不能转移，虫量损失大，且容易染病，化蛹后蛹不便大批量收集和保存。陈宗麒等(2001)利用莲花白作为小菜蛾的饲料，杨峰山等(2004)用甘蓝苗饲养小菜蛾，都能得到大量发育整齐的供试虫源，但寄主植物栽培期长，易受其它害虫如菜青虫、蚜虫等虫危害，管理困难，受气候、土壤、场地等条件的限制，饲料不能及时供应，培育成本高。许勤(2005)、莫美华(2007)用人工饲料饲养小菜蛾，需要特殊的配方，操作起来比较复杂，一般的实验室使用有一定的局限性。林坤等(2011)用青菜萝卜苗法，小菜蛾在青菜萝卜苗上产卵，卵孵化后用市场上购回的甘蓝叶饲养，需2d更换1次，保证菜叶的新鲜度困难，频繁的转接，对小菜蛾生长不利，且易感病。

三、

技术实现要素：

为了解决现有技术中饲养小菜蛾的各种问题，本发明在前人研究的基础上，综合上述饲养方法，探索出利用市场上购回的甘蓝，对其进行一系列处理后，用于小菜蛾饲养的方法。本文将为室内大量继代饲养小菜蛾提供一种低成本简易的饲养方法。

具体的，本发明采用的技术方案是：

一种用水培甘蓝室内大量饲养小菜蛾的方法，所述方法包括以下步骤：

(1)培养寄主植物

选取生长健壮、结球平滑的甘蓝，剥除残叶，横切除去叶球上部的三分之一，再切去底部的部分根茎，露出新鲜的根茎组织，将茎的底面切口用体积分数75％的乙醇水溶液浸泡1分钟后,取出放入无菌杯中,用质量分数0.1％高锰酸钾水溶液处理根茎切口10分钟，再用无菌水冲洗2-3次后，再将茎的底面切口沾生长素溶液30秒，取出晾干，得到处理后的叶球；所述生长素溶液按以下方法配制：将萘乙酸溶于体积分数95％的乙醇中配制得到1mg/ml浓度的母液，然后将母液用蒸馏水稀释到浓度1000ppm；

将处理后的叶球放入装有水或含饱和水的基质的培养容器中，使茎的底面切口深入水面下0.5-1cm，所得水培甘蓝即可用于小菜蛾饲养；所述基质为蛭石或珍珠岩。

(2)饲养小菜蛾

将小菜蛾50～150头蛹(优选100头蛹)放入产卵箱，在温度24±1℃，相对湿度70％，光周期L:D＝18：8的条件下培养羽化，待50％以上成虫羽化后，把步骤(1)的水培甘蓝放入产卵箱中产卵24h，取出，接卵后的水培甘蓝在人工气候箱中，在温度24℃，相对湿度70％、光周期L∶D＝16∶8、光照强度4000lx的条件下饲养小菜蛾至化蛹。

化蛹后的小菜蛾可重复操作步骤(2)，在产卵箱中培养至50％以上成虫羽化后，再放入新鲜的水培甘蓝进行产卵、饲养，每个水培甘蓝可用于200-300头小菜蛾一个完整世代的饲养。

所述步骤(1)中，优选将处理后的叶球放入装水的培养容器中，使茎的底面切口深入水面下0.5-1cm，所得水培甘蓝用于小菜蛾饲养。直接用水培养效果优于基质培养。

本发明所用的甘蓝(Brassica oleracea L.)，可直接于市场购买获得，一般为结球甘蓝又称包心菜、洋白菜、圆白菜等。

所述步骤(1)中，优选每隔3天换1次水，进一步，在水培甘蓝开始长根后，每次换水时加入营养液，由营养液原液与水按照体积比1:1000混合配制得到。所述营养液原液可直接购买获得，各类植物或果蔬营养液均可用于本发明，本发明实施例中使用的是施可得园艺产品公司生产的家庭园艺浓缩营养液。

本发明利用市场上购回的甘蓝，对其进行一系列处理培养后，得到水培甘蓝用于饲养小菜蛾饲养，可取得较好的饲养结果，饲养的小菜蛾蛹重7.15mg，蛹的羽化率91.85％，单雌产卵86.70粒，卵的孵化率94.32％，与盆栽甘蓝、蛭石萝卜苗法饲养的小菜蛾有显著差异。该方法操作简单，成本低，栽培期短，饲料随时供应，方便了室内小菜蛾的大量饲养。

本发明方法成本低廉，操作简易，能够保证小菜蛾的正常发育和繁殖，与普通盆栽植物培养相比省工、省时，栽培期短，培育成本低，不受气候、土壤等条件限制，更加便捷。

四、附图说明

图1水培甘蓝处理、饲养小菜蛾的过程图，从左到右，分别为未处理的甘蓝、切除叶球上部的三分之一和部分根茎的甘蓝，24℃温度下培养生根10天的甘蓝、饲养小菜蛾的甘蓝。

图2不同温度下水培甘蓝根系生长20天后生根的对比图。

图3用不同饲养方法饲养小菜蛾实例图。

五、具体实施方式

下面以具体实施例来对本发明的技术方案作进一步说明，但本发明的保护范围不限于此。

实施例1

1材料与方法

1.1材料与设备

甘蓝(Brassica oleracea L.)，购买市场出售的结球甘蓝(又称包心菜、洋白菜、圆白菜等)；

营养液：家庭园艺浓缩营养液(施可得园艺产品公司)；

养虫箱：45×45×45cm；

培养容器：高10-15cm，口径6-10cm的玻璃容器；

指形管:直径1.5cm，高6cm

RXZ-380B型智能人工气候箱(宁波江南仪器有限公司)；

NAA(萘乙酸1-Naphthaleneacetic acid，陕西森郎生物化工有限公司)；

高锰酸钾(Potassium Permanganate，郑州帝科化工产品有限公司)。

1.2方法

1.2.1寄主植物的培养

生长素的配制：准确称取NAA原药，以95％的酒精为溶剂，配成1mg/ml母液备用。取母液用蒸馏水稀释成1000ppm的生长素溶液。

水培材料的切取与消毒：选取生长健壮，结球平滑的甘蓝，首先剥除外残叶2-3片，用利刀横切除去叶球上部的三分之一，再用刀切去底部部分根茎，露出新鲜的根茎组织，茎的底面切口，用体积分数75％的酒精浸泡1分钟后,取出放入无菌杯中,用质量浓度0.1％高锰酸钾水溶液处理10分钟,再用无菌水冲洗切口2-3次后，再将茎的底面切口沾配制好的生长素溶液30秒，取出晾干。将处理后叶球放入加有蒸馏水的培养容器(高10-15cm，口径6-10cm)中，使茎的底面切口，深入水面0.5-1cm，即可作为饲养寄主备用。水培甘蓝处理、饲养小菜蛾的过程图如图1所示。

1.2.2不同温度对水培甘蓝生根的影响

温度设4个处理，分别为16、20、24、28℃，每处理4次重复，相对湿度70％、光周期L∶D＝16∶8、光照强度4000lx)，每隔3d换1次水，开始长根后，每次换水，加入营养液1:1000(营养液原液与蒸馏水体积比1:1000配制得到)，每天进行观察并记录根的生长状况。记录每个处理开始生根的时间、根停止生长时间及侧根开始生长时间，根停止生长测量根长，记录侧根数。

1.2.3不同基质对甘蓝生根的影响

基质设3个处理，分别为自来水、含饱和水(饱和水，就是有充足的水份，又不出现明水)的蛭石和含饱和水的珍珠岩，每处理4次重复，在温度24℃、相对湿度70％、光周期L∶D＝16∶8、光照强度4000lx条件下比较不同基质对甘蓝生根的影响，培养条件同1.2.2。

1.2.4不同饲养方法对小菜蛾繁殖率的影响

设3个处理，分别为盆栽甘蓝、蛭石萝卜苗和步骤1.2.1制备的水培甘蓝，每处理4次重复。盆栽甘蓝和萝卜苗分别按照陈宗麒等(2001)“莲花白培育法”、刘传秀等(1981)“萝卜苗蛭石法”准备。

供试小菜蛾是室内多代饲养的种群，把收集到的小菜蛾100头蛹放到产卵箱(45×45×45cm),在(温度24±1℃，RH 70％-75％，L:D＝16：8)的条件下培养羽化，50％以上成虫羽化后，把不同的寄主植物分别放到不同产卵箱中产卵24h，取出，接卵后的寄主在温度24℃，相对湿度70％、光周期L∶D＝16∶8、光照强度4000lx条件下饲养至化蛹。称量20头蛹重，并且将不同寄主饲养后的蛹分别放入产卵箱中培养羽化，在上述相同的条件下培养，羽化后，记录羽化率，并把当天羽化的成虫配对置于指形管(直径1.5cm，高6cm)内，管口塞上棉花，管中放吸有15％蜂蜜水的棉花球，共配50对，记录卵量，卵的孵化率、羽化率等繁殖数据。

1.2.5数据计算

用SPSS Duncan法进行差异显著性分析。

2结果与分析2.1不同处理下水培甘蓝根系生长情况

图2为不同温度下水培甘蓝根系生长20d后生根的对比图。表1为不同温度处理甘蓝根系生长量的统计数据，从表1和图2可以看出，16℃处理下，甘蓝生根速度慢，且生根数量较少，根长势也不好，处理30d后，根的生长量不大，诱导的新根上没有侧根产生；20℃处理下生根速度较慢，处理30d后，生根数量多，但根的生长量不大，根长36.20mm，诱导的新根上有侧根产生；24、28℃处理下生根速度快，且生根数量较多，处理30d后，根的生长量大，根长达80mm，诱导的新根上侧根旺盛，24℃开始生根的时间是第7天，生根所需时间为20d,28℃开始生根的时间是第6天，生根所需时间为12d。从图2和表1可以看出，24℃和28℃水诱甘蓝生根处理30d后，根系最长，且侧根生长旺盛，与15℃、20℃处理间差异显著。

表2为不同基质处理甘蓝根系生长量的统计数据，从表2可以看出，在24℃的条件下，水、蛭石和珍珠岩3种不同材料作为水培甘蓝的基质，对甘蓝生根速度、根的生长量有显著的影响，纯碎采用水作为水培甘蓝的基质效果更佳。

表1不同温度处理甘蓝根系生长量

注：小写字母不相同表示差异显著(P＝0.05)。

表1中的根长为平均根长。

表2不同基质处理甘蓝根系生长量

注：小写字母不相同表示差异显著(P＝0.05)。

表2中的根长为平均根长。

2.2不同饲养方法对小菜蛾繁殖率的影响

用不同饲养方法饲养小菜蛾实例图如图3所示。表3为不同饲养方法对小菜蛾繁殖率的影响数据表，从表3的结果可以看出，用水培甘蓝饲养的小菜蛾与盆栽甘蓝、蛭石萝卜苗法饲养的小菜蛾在蛹重、羽化率、单雌产卵量、孵化率上差异均显著，说明室内用水培甘蓝苗饲养小菜蛾是可行的，是能够保证小菜蛾的正常发育、繁殖的，而且效果要好于其他几种条件的处理。并且本发明水培甘蓝制作简单，成本低，栽培期短，饲料随时供应，方便了室内小菜蛾的大量饲养。与普通盆栽植物培养相比省工、省时，栽培期短，培育成本低，不受气候、土壤等条件限制，更加便捷。

表3不同饲养方法对小菜蛾繁殖率的影响

注：小写字母不相同表示差异显著(P＝0.05)。