本发明涉及植物培养
技术领域：
，具体涉及一种建兰试管开花的培养方法。
背景技术：
：建兰是地生植物，生于疏林下、灌丛中、山谷旁或草丛中，海拔600-1800米。产中国安徽、浙江、江西、福建、台湾、湖南、广东、海南、广西、四川西南部、贵州和云南。广泛分布于东南亚和南亚各国，北至日本。兰花在自然条件下繁殖率极低且开花较困难，因此试管开花也越来越多地运用到兰花培养中去，所述试管开花即离体开花，是利用组培的手段，使植物能够在离体培养过程中实现开花这一生理状态。兰科植物的试管开花研究，不仅对兰花的开花过程、开花机制的研究有重要意义，也对兰花的育种工作，提前了解所育新品种的性状以及对兰花生产的商业价值提供有益的技术支持。但是在建兰试管开花方面还未见报道和运用。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种开花诱导率高、长势良好的建兰试管开花的培养方法。为了达到上述目的，本发明采用的技术方案为：一种建兰试管开花的培养方法，包括以下步骤：(1)材料初选：选取无病虫害长势良好的建兰试管苗，试管苗高为3～6cm，根3～6条，叶2～3片；(2)预培养：将选取后的建兰试管苗放置在初代培养基中进行培养，培养时间为50～60d，培养温度为22～25℃，光照时间为14h/d，光照强度为1600～2000lx，每10天更换一次初代培养基，所述初代培养基为：MS+1～3mg/L6-BA+0.1～0.2mg/LNAA+28～32g/L蔗糖+5～9g/L琼脂+0.1～0.2g/L活性炭；(3)花芽诱导预处理：选取预培养后生长一致、长势健康、无虫害污染的建兰苗株放置在预培养基中进行预培养，培养时间为22～27d，培养温度为22～25℃，光照时间为14h/d，光照强度为1600～2000lx，所述预培养基为：MS+2～4mg/LPP333+28～32g/L蔗糖+5～9g/L琼脂+0.1～0.2g/L活性炭；(4)诱导开花：对花芽诱导预处理后的苗株根部进行修剪，然后放置在诱导开花培养基中进行培养，培养时间为100～120d，培养温度为22～25℃，光照时间为14h/d，光照强度为1600～2000lx，每30天更换一次诱导开花培养基，所述诱导开花培养基为：MS+0.3～0.5mg/LTDZ+0.1～0.2mg/L2,4-D+0.8～1.2mg/LZT+28～32g/L蔗糖+5～9g/L琼脂+0.1～0.2g/L活性炭。如上所述的一种建兰试管开花的培养方法，进一步说明为，所述初代培养基为：MS+1.5mg/L6-BA+0.15mg/LNAA+30g/L蔗糖+6g/L琼脂+0.15g/L活性炭。如上所述的一种建兰试管开花的培养方法，进一步说明为，所述预培养基为：MS+3mg/LPP333+30g/L蔗糖+6g/L琼脂+0.15g/L活性炭。如上所述的一种建兰试管开花的培养方法，进一步说明为，所述诱导开花培养基为：MS+0.4mg/LTDZ+0.1mg/L2,4-D+1.0mg/LZT+30g/L蔗糖+6g/L琼脂+0.15g/L活性炭。本发明的有益效果是：本方法能够大大提高建兰的开花诱导率，其中通过加入PP333能增加苗株的花芽诱导率，从而使花朵的数量明显增多，通过TDZ、2,4-D和ZT之间的组合，能够促进花芽的形成，花芽形成较快且花芽开放正常、花期长，长势良好。同时通过生物技术手段，满足了商业化生产的需求，为企业规模化、产业化培养开花建兰提供了技术支持，同时满足了开花建兰市场的需要。具体实施方式下面对本发明具体实施方式做进一步的阐述。本发明提供了一种建兰试管开花的培养方法，适用于建兰使用。该方法具体包括以下步骤：(1)材料初选：选取无病虫害长势良好的建兰试管苗，试管苗高为3～6cm，根3～6条，叶2～3片；试管苗不做限定，可以为组织培养而来，也可以为分株培养而来；选取无病虫害长势良好的建兰，主要是为了提高建兰的开花诱导率，从而减少成本，提高效率。(2)预培养：将选取后的建兰试管苗放置在初代培养基中进行培养，培养时间为50～60d，培养温度为22～25℃，光照时间为14h/d，光照强度为1600～2000lx，每10天更换一次初代培养基，所述初代培养基为：MS+1～3mg/L6-BA+0.1～0.2mg/LNAA+28～32g/L蔗糖+5～9g/L琼脂+0.1～0.2g/L活性炭；通过预培养使为了再次筛选出不合格的建兰苗株，从而提高本方法的效率和成功率，同时通过一段时间的预培养，能够使苗株更加健壮，提高苗株的成活率；表1为初代培养基的多种实施例表1中给出了6种不同初代培养基的实施例，在本初代培养基的用量范围内，还可以有其他实施例，这里不一一进行阐述；作为优选，所述初代培养基为：MS+1.5mg/L6-BA+0.15mg/LNAA+30g/L蔗糖+6g/L琼脂+0.15g/L活性炭，即为表1中初代培养基1的成分及用量。(3)花芽诱导预处理：选取预培养后生长一致、长势健康、无虫害污染的建兰苗株放置在预培养基中进行预培养，培养时间为22～27d，培养温度为22～25℃，光照时间为14h/d，光照强度为1600～2000lx，所述预培养基为：MS+2～4mg/LPP333+28～32g/L蔗糖+5～9g/L琼脂+0.1～0.2g/L活性炭；通过PP333能阻止苗株顶端生长优势，促进侧芽滋生，延缓植物生长，抑制茎杆伸长，促进花芽分化，从而增加花芽的分化数量，使建兰的试管开花率显著提高。表2为预培养基的多种实施例表2中给出了6种不同预培养基的实施例，在本预培养基的用量范围内，还可以有其他实施例，这里不一一进行阐述；作为优选，所述预培养基为：MS+3mg/LPP333+30g/L蔗糖+6g/L琼脂+0.15g/L活性炭，即为表2中预培养基1的成分及用量。表3为不同浓度的PP333预处理对试管苗花芽诱导的影响处理编号PP333(mg/L)结果11单花芽，花芽小22有一部分双花芽，花芽较大33双花芽占多数，花芽较大44有一部分双花芽，花芽较大55植株矮化，花芽畸形表3中采用同样的预培养基进行培养，只是PP333浓度不同，从而确保对照试验的准确性。从表3中可以看出，PP333浓度过小对花芽的诱导无明显作用，PP333浓度过大，大多试管苗出现矮化现象，抑制了苗株的生长，所述PP333优选为2～4mg/L；(4)诱导开花：对花芽诱导预处理后的苗株根部进行修剪，主要是修剪苗株根部的烂根和多余的侧根，然后放置在诱导开花培养基中进行培养，培养时间为100～120d，培养温度为22～25℃，光照时间为14h/d，光照强度为1600～2000lx，每30天更换一次诱导开花培养基，所述诱导开花培养基为：MS+0.3～0.5mg/LTDZ+0.1～0.2mg/L2,4-D+0.8～1.2mg/LZT+28～32g/L蔗糖+5～9g/L琼脂+0.1～0.2g/L活性炭；通过添加TDZ，能够提高花芽诱导率，同时使建兰长势良好、叶片浓绿、气生根较少，除此之外，TDZ能使苗株基部不断分化生成类原球茎，继续培养可生出密集的分化小植株，增大了建兰的扩繁系数；2,4-D和ZT能使花芽形成较快，且花芽开放较正常、花期长，更利于建兰的试管花诱导；表4为诱导开花培养基的多种实施例表4中给出了6种不同诱导开花培养基的实施例，在本预培养基的用量范围内，还可以有其他实施例，这里不一一进行阐述；作为优选，所述诱导开花培养基为：MS+0.4mg/LTDZ+0.1mg/L2,4-D+1.0mg/LZT+30g/L蔗糖+6g/L琼脂+0.15g/L活性炭，即为表4中诱导开花培养基1的成分及用量。通过本建兰试管开花的生物技术手段，满足了商业化生产的需求，为企业规模化、产业化培养开花建兰提供了技术支持，同时满足了开花建兰市场的需要。本发明并不限于上述实例，在本发明的权利要求书所限定的范围内，本领域技术人员不经创造性劳动即可做出的各种变形或修改均受本专利的保护。当前第1页1 2 3