本发明涉及植物组织培养技术领域，具体是一种白及种子表面消毒及接种的方法。
背景技术：
白及是兰科植物白及属的一种，为多年生草本花卉，是我国民间传统珍贵中药材之一，市场需求量很大。近年来，人为过度采挖和天然生境遭到破坏使野生白及资源急剧减少，濒临灭绝。白及已被中国列为重点保护的野生药用植物之一。白及种子细如粉尘，只有在显微镜下才能看清，没有胚乳，处于原胚阶段，缺乏营养。多数兰科植物靠其自身营养常难于萌发，营养来源也成为研究者试图实现兰花种子萌发的关键因素而备受重视。
兰科植物的果实为蒴果，在自然条件下蒴果成熟以后开裂，释放种子。由于蒴果是封闭结构，未开裂时其种子洁净无菌，可以直接用于种子的无菌萌发。目前多数无菌萌发试验常用表面消毒剂包括75％酒精、NaClO溶液、升汞溶液等，采用的消毒方法只需对种荚进行表面消毒即可。但兰花果实在贮藏时期易于开裂，一旦开裂则容易受到污染，且不易进行表面消毒，影响其无菌萌发成功率。
针对微小种子表面消毒的试验技术目前已有报道，但尚无针对兰科植物种子的合适消毒方法的报道。因此探寻合适的兰科植物种子表面消毒技术，并减少其对萌发率的影响，对于兰科植物无菌萌发及离体快速繁殖的应用具有重要意义。
白及植物种子十分细小且质量轻，常规表面消毒方法较为复杂，且消毒效果较差，容易造成种子的损失、消毒时间不均匀及接种不均匀。
技术实现要素：
本发明要解决的问题是提供一种白及种子表面消毒及接种的方法，能够有效控制消毒时间，保证表面消毒效果，种子均匀分散于培养基表面，且操作简便，对种子活力无影响，能够提高种子利用率，在短时间内获得大量白及幼苗，保护白及植物资源。
本发明提供的技术方案是：一种白及种子表面消毒及接种的方法，包括如下步骤：
(1)配置洗洁精分散剂：在一升蒸馏水中加入洗洁精0.036ml，搅匀，装入玻璃瓶中，盖紧盖子备用，
(2)高压蒸汽灭菌：将0.45微米滤膜和10ml注射器用纸包紧密封，与装有洗洁精分散剂的玻璃瓶、蒸馏水一起放入高压蒸汽灭菌锅中，在121℃条件灭菌21-25分钟，取出放入烘箱在55℃条件下烘干，
(3)白及种子表面消毒及接种：在超净工作台中将滤膜放入注射器针头与针管之间夹紧，取白及种子放入针管中，用装有白及种子的针管吸取75％酒精10ml浸泡种子30秒打出酒精，再吸取0.1％升汞10ml，灭菌7-10分钟，每隔两分钟摇晃一次针管，之后打出升汞，吸取10ml无菌水清洗种子，打出无菌水，共清洗五次，将经过消毒后的白及种子，去掉针头与滤膜，再用针管吸取经灭菌的洗洁精分散剂10ml，摇匀，往每瓶培养基中打出种子与分散剂的混合液0.5ml，轻轻晃动瓶子，白及种子均匀分散在培养基表面，盖好培养瓶盖子，即可进行培养。
所述无菌水为高温高压灭菌的蒸馏水。
除另有说明外，本发明所述的百分比均为质量百分比，各组分含量百分数之和为100％。
本发明突出的技术效果在于：
1、能够有效控制消毒时间，保证表面消毒效果，且操作简便。
2、对种子活力无影响，能够提高种子利用率，在短时间内获得大量白及幼苗，保护白及植物资源。
3、能够使白及种子均匀分散在培养基表面，避免种子相互粘在一起，影响萌发。
4、此项消毒方法能够应用于其他兰科植物种子及类似微小种子的消毒中，增加种子的保存时间。
具体实施方式
以下通过实施例对本发明的技术方案作进一步描述。
实施例1
本发明所述的白及种子表面消毒及接种的方法的一个实例，包括如下步骤：
1、配置洗洁精分散剂：
在一升蒸馏水中加0.036ml洗洁精，搅匀，装入玻璃瓶中，盖紧盖子备用。
2、高压蒸汽灭菌：
将0.45微米滤膜和10ml注射器用纸包紧密封，与装有洗洁精分散剂的玻璃瓶、蒸馏水一起放入高压蒸汽灭菌锅中，在121℃条件灭菌25分钟。取出放入烘箱在55℃条件下烘干。
3、白及种子表面消毒及接种：在超净工作台中将滤膜放入注射器针头与针管之间夹紧，取出白及种子放入针管中，用装有白及种子的针管吸取75％酒精10ml浸泡种子25秒打出酒精，再吸取0.1％升汞10ml，灭菌10分钟，每隔两分钟摇晃一次针管，之后打出升汞，吸取无菌水10ml清洗种子，打出无菌水，共清洗五次，然后去掉针头与滤膜，再用针管吸取洗洁精分散剂10ml，摇匀，往每瓶培养基中打出种子与分散剂的混合液0.5ml，轻轻晃动瓶子，白及种子即可均匀分散在培养基表面，盖好培养瓶盖子，即可进行培养。用此方法播种能够使白及种子均匀分散于培养基表面，白及苗长势良好，种子几乎都可播入瓶内，减少浪费，污染率为5％。
实施例2
本发明所述的白及种子表面消毒及接种的方法的另一个实例，包括如下步骤：
1、配置洗洁精分散剂：
在一升蒸馏水中加0.036ml洗洁精，搅匀，装入玻璃瓶中，盖紧盖子备用。
2、高压蒸汽灭菌：
将0.45微米滤膜和10ml注射器用纸包紧密封，与装有洗洁精分散剂的玻璃瓶、蒸馏水一起放入高压蒸汽灭菌锅中，在121℃条件灭菌25分钟。取出放入烘箱在55℃条件下烘干。
3、白及种子表面消毒及接种：在超净工作台中将滤膜放入注射器针头与针管之间夹紧，将白及种子放入针管中，用装有白及种子的针管吸取75％酒精10ml浸泡种子30秒打出酒精，再吸取0.1％升汞10ml，灭菌10分钟，每隔两分钟摇晃一次针管，之后打出升汞，吸取无菌水10ml清洗种子，打出无菌水，共清洗五次，然后去掉针头与滤膜，再用针管吸取洗洁精分散剂10ml，摇匀，往每瓶培养基中打出种子与分散剂的混合液0.5ml，轻轻晃动瓶子，白及种子即可均匀分散在培养基表面，盖好培养瓶盖子，即可进行培养。用此方法播种能够使白及种子均匀分散于培养基表面，白及苗长势良好，种子几乎都可播入瓶内，减少浪费，污染率3％。
实施例3
本发明所述的白及种子表面消毒及接种的方法的再一个实例，包括如下步骤：
1、配置洗洁精分散剂：
在一升蒸馏水中加0.036ml洗洁精，搅匀，装入玻璃瓶中，盖紧盖子备用。
2、高压蒸汽灭菌：
将0.45微米滤膜和10ml注射器用纸包紧密封，与装有洗洁精分散剂的玻璃瓶、蒸馏水一起放入高压蒸汽灭菌锅中，在121℃条件灭菌25分钟。取出放入烘箱在55℃条件下烘干。
3、白及种子表面消毒及接种：在超净工作台中将滤膜放入注射器针头与针管之间夹紧，将白及种子放入针管中，用装有白及种子的针管吸取75％酒精10ml浸泡种子30秒打出酒精，再吸取0.1％升汞10ml，灭菌7分钟，每隔两分钟摇晃一次针管，之后打出升汞，吸取无菌水10ml清洗种子，打出无菌水，共清洗五次，然后去掉针头与滤膜，再用针管吸取洗洁精分散剂10ml，摇匀，往每瓶培养基中打出种子与分散剂的混合液0.5ml，轻轻晃动瓶子，白及种子即可均匀分散在培养基表面，盖好培养瓶盖子，即可进行培养。用此方法播种能够使白及种子均匀分散于培养基表面，白及苗长势良好，种子几乎都可播入瓶内，减少浪费，污染率7％。