本发明涉及中药材种植，尤其是涉及到红杆铁皮石斛种苗用于生产高品质
产品的繁殖方法。
背景技术：
铁皮石斛Dendrobium candidum Wall． Ex Lindl是《中华人民共和国药典》收载的名贵中药，是我国传统名贵中药。味甘，性微寒；入胃、肾经，具有益胃生津、滋阴清热的功效，用于热病津伤，口干烦渴，胃阴不足，食少干呕，病后虚热不退，阴虚火旺，骨蒸劳热，目暗不明，筋骨痿软。是兰科石斛属药用植物中最为珍稀的品种，它生长缓慢、自然繁殖率极低。近年来，由于铁皮石斛原生地生境破坏、气候变迁和滥采滥挖严重，自然生长环境日益恶化，野生资源频临枯竭，目前生产铁皮石斛种苗，主要采用了组织培养无性繁殖技术，这种技术易造成铁皮石斛种性混杂和不断退化，品种内一致性差，世代之间遗传稳定性差等问题。导致我国铁皮石斛产业存在优良新品种缺乏、后备品种不足、品种结构不合理、优良品种覆盖率低等问题。种植企业亟需获得种性优良品质纯正的种苗用于生产。铁皮石斛又分为青杆铁皮石斛和红杆铁皮石斛，红杆铁皮石斛相对青杆铁皮石斛长得稍慢些，不过其抵抗能力较好，耐寒性较好，药性功效较好，售价高，因此大多数年种植企业选择红杆铁皮石斛种苗进行种植。现有种植企业在种苗种植中大都采用人工杂交授粉、无菌播种、壮苗培养和管苗移栽的繁殖方法，虽然根据繁殖地点、气候、土壤和生长环境不同，具体的繁殖方法也有不同，但到目前为止，现有技术中种苗生产出来的红杆铁皮石斛枝条红杆率不超过90%，红杆铁皮石斛的品质不够好，产量也不高。
技术实现要素：
针对上述现有技术方法培育的红杆铁皮石斛种苗生产出来的红杆铁皮石斛所存在的问题，本发明提供了一种可使红杆铁皮石斛枝条红杆率达到98 %以上，红杆铁皮石斛品质好、药用价值高，产量高的红杆铁皮石斛种苗繁殖方法。
本发明所述的红杆铁皮石斛人工杂交提纯复壮繁殖方法包括以下步骤：
A、野生原种的采集
分别采集安徽天柱山和齐云山的野生铁皮石斛原种植株，栽培于花盆中，
B、原种筛选
从上述原种植株中，筛选出3年生以上生长健壮、萌枝力强和枝条红杆率为100%的原种植株作为杂交亲本备用,
C、人工授粉
在上述筛选的原种植株夏秋开花期间，以天柱山野生铁皮石斛原种植株作父本，以齐云山野生铁皮石斛原种植株作母本，进行人工杂交授粉,
D、提纯复壮
待原种植株蒴果成熟时,采收外观紫红色，且着色均匀，端正饱满尚未开裂的果实，经无菌操作处理后，在无菌条件下，将果实切口，将果实中的种子播撒于萌发培养基上发芽生长成幼苗，幼苗再经生根培养后，获得实生苗进行栽培；再在上述栽培的实生苗植株中选择生长健壮、萌枝力强和枝条红杆率达到100%的实生苗植株进行异花授粉，待蒴果成熟时,采收外观紫红色且着色均匀，端正饱满尚未开裂的果实作为种子，留种子作为生产备用,
E、培养育苗
a、通过无菌操作，将上述留作生产备用的种子，播撒于萌发培养基上发芽生长，经过20-30天完成萌发培养，所述萌发培养基由下列原料配制而成：1/2MS＋5%的蕨根粉＋5g/L的酵母粉＋2g/L的牛肉膏＋5g/L的活性炭，
b、幼苗生根培养
将萌发培养基生长出的原球茎接种于生根培养基上，所述生根培养基由下列原料配比制成：MS＋10%的红龙果＋5%的蕨根粉＋5%的椰子汁＋5g/L的活性炭，经过30-40天可完成幼苗生根培养；
F、炼苗出苗
炼苗移栽前，将幼苗小心取出，用50%多菌灵1000倍液将根部培养基冲洗干净得到种苗，种苗凉干后装箱出售。
进一步地，本发明所述方法步骤E中的a和b之间还包括：
将萌发培养基上发芽生长出的原球茎接种于增殖培养基上，经过20-30天完成原球茎增殖培养，所述增殖培养基由下列原料配制而成：MS＋10%的红龙果＋5%的蕨根粉＋3g/L的牛肉膏＋5g/L的活性炭，
本发明所述方法种植的种苗生产出来的铁皮石斛枝条红杆率达到98-100%，品质为上品，产量高。
所述MS为MS培养基，有1/2MS、1/4MS、MS等，所需药品原料在市场上均可购买，MS特点是无机盐和离子浓度较高，是较稳定的离子平衡溶液，它的硝酸盐含量高，其养分的数量和比例合适，能满足植物细胞的营养和生理需要因而适用范围比较广，多数植物组织培养快速繁殖用它作为培养基的基本培养基。
所述蒴果为合生心皮复雌发育而成的果实。所述红龙果、蕨根粉中含有丰富中的植物细胞生长营养成份，所述牛肉膏具有高的蛋白胨，可提高植物所需的蛋白质，所述活性碳可除自臭、去毒和吸附，有利于植物的生长。
本发明的创新点：一是采集安徽天柱山和齐云山的野生铁皮石斛原种植株进行栽培，到第二年夏天在上述栽培的原种植株中筛选出生3年以上生长健壮、萌枝力强和红杆率达到100%的原种植株作为杂交亲本和杂交母亲进行杂交授粉结成果实；二是在果实中取种子进行育苗栽培，再先择生长健壮、萌枝力强和红杆率达到100%的培育植株进行异花授粉，待蒴果成熟时,采收外观紫红色且着色均匀，端正饱满尚未开裂的果实作为种子备用；三是用上述备用的种子在特定的MS基本培养基的基础上增加蕨根粉、红龙果、椰子汁、活性炭和牛肉膏组份制成了适合红杆铁皮石斛种苗培育的萌发培养基、增殖培养基和生根培养基，并在萌发培养基、增殖培养基和生根培养基上进行培养室多级育苗和大棚移栽。
用本发明所述繁殖方法所得到的红杆铁皮石斛种苗种性优良纯正，植株萌发力强，一年生枝条暗红色，二年生枝条红黑色，枝条红杆率达到98-100%，品质好，枝条红杆率越高，药用疗效和价值高，产量高。
具体实施方式
实施例1，所述红杆铁皮石斛人工杂交提纯复壮繁殖方法包括以下步骤：
一、野生原种的采集
分别采集安徽天柱山和齐云山的野生铁皮石斛原种植株，栽培于花盆中，培养基质为水苔，每盆中各种1株，种植后3天方可浇水，成活后按常规管理。
二、原种筛选
第二年夏天从上述原种植株中，筛选3年生以上生长健壮、萌枝力强和红杆率达到100%的原种植株作为杂交亲本备用。
三、人工授粉
在上述筛选择的原种植株夏秋开花期间，以天柱山野生铁皮石斛原种植株作父本，以齐云山野生铁皮石斛原种植株作母本，进行人工杂交授粉。
四、提纯复壮
待当年秋季蒴果成熟时,采收外观紫红色且着色均匀，端正饱满尚未开裂的果实，经无菌操作处理后，在无菌条件下，将果实切开一个口子，再把果实中的种子播撒于萌发培养基上发芽生长成幼苗，幼苗再经生根培养后，获得优质实生苗进行栽培。
三年后，在上述栽培的植株中选择生长健壮、萌枝力强和红杆率达到100%的培育植株进行异花授粉，待蒴果成熟时,采收外观紫红色且着色均匀，端正饱满尚未开裂的果实作为种子，留种子作为生产备用。
五、三级培养育苗
（一）种子萌发培养
通过无菌操作，将上述留作生产备用的种子，播撒于萌发培养基上发芽生长，每个果实播撒5个培养瓶，经过20-30天可完成萌发培养。所述萌发培养基由下列原料配制而成：1/2MS＋5%的蕨根粉＋5g/L的酵母粉＋2g/L的牛肉膏＋5g/L的活性炭，所述5%的蕨根粉是指加入原料总重量5%的蕨根粉，所述5g/L的酵母粉＋2g/L的牛肉膏＋5g/L的活性炭是指每升原料中分别加入5g酵母粉、2g牛肉膏和5g活性炭，培养瓶直径为9.4cm，高度为14.9cm，每瓶装萌发培养基110g。如制取500克（测得体积为0.25升）萌发培养基，其中蕨根粉加入重量为25克，酵母粉、牛肉膏和活性炭加入量分别为1.25克、0.5克和1.25克，而1/2MS 重量为500-25-1.25-0.5-1.25＝472克，其发芽率达到98%。
（二）幼苗生根培养
将萌发培养基生长出的原球茎接种于生根培养基上，每个萌发培养基瓶可接种300-500个生根培养瓶，每个生根培养瓶上分布25个接种点有幼苗约100株。所述生根培养基由下列原料配制而成：MS＋10%的红龙果＋5%的蕨根粉＋5%的椰子汁＋5g/L的活性炭，所述10%的红龙果＋5%的蕨根粉＋5%的椰子汁是指分别加入原料总重量10%的红龙果、原料总重量5%的蕨根粉和原料总重量5%的椰子汁，所述5g/L的活性炭是指每升原料中加入5g活性炭，经过30-40天可完成幼苗生根培养，苗高达到6.3cm,根数10.1；
六、炼苗出苗
瓶中幼苗移栽前，需要揭开瓶盖放于培养室外栽培大棚内炼苗7天左右，适应自然环境后，将幼苗小心取出，用50%多菌灵1000倍液将根部培养基冲洗干净，凉干后装箱出售。
用实施例1制出的种苗生产出的铁皮石斛枝条红杆率达到98.5%，为红杆铁皮石斛上等品，按种植面积算,其干态枝条红杆的产量为每平方米1.17Kg。
实施例2，所述红杆铁皮石斛人工杂交提纯复壮繁殖方法包括以下步骤：
一、野生原种的采集
分别采集安徽天柱山和齐云山的野生铁皮石斛原种植株，栽培于花盆中，培养基质为水苔，每盆中各种1株，种植后3天方可浇水，成活后按常规管理。
二、原种筛选
第二年夏天从上述原种植株中，筛选3年生以上生长健壮、萌枝力强和枝条红杆率达到100%的原种植株作为杂交亲本备用。
三、人工授粉
在上述筛选择的原种植株夏秋开花期间，以天柱山野生铁皮石斛原种植株作父本，以齐云山野生铁皮石斛原种植株作母本，进行人工杂交授粉。
四、提纯复壮
待当年秋季蒴果成熟时,采收外观紫红色且着色均匀，端正饱满尚未开裂的果实，经无菌操作处理后，在无菌条件下，将果实切开一个口子，再把果实中的种子播撒于萌发培养基上发芽生长成幼苗，幼苗再经生根培养后，获得优质实生苗进行栽培。
三年后，在上述栽培的植株中选择生长健壮、萌枝力强和枝条红杆率达到100%的培育植株进行异花授粉，待蒴果成熟时,采收外观紫红色且着色均匀，端正饱满尚未开裂的果实作为种子，留种作为生产备用。
五、三级培养育苗
（一）种子萌发培养
通过无菌操作，将上述留作生产备用果实的种子，播撒于萌发培养基上发芽生长，每个果实播撒5个培养瓶，经过20-30天可完成萌发培养。所述萌发培养基由下列原料配制而成：1/2MS＋5%的蕨根粉＋5g/L的酵母粉＋2g/L的牛肉膏＋5g/L的活性炭，所述5%的蕨根粉是指加入原料总重量5%的蕨根粉，所述5g/L的酵母粉＋2g/L的牛肉膏＋5g/L的活性炭是指每升原料中分别加入5g酵母粉、2g牛肉膏和5g活性炭，培养瓶直径为9.4cm，高度为14.9cm，每瓶装萌发培养基110g。发芽率达到98%。
（二）原球茎增殖培养
将萌发培养基生长出的原球茎接种于增殖培养基上，每个萌发培养瓶可接种50-60个增殖培养瓶，经过20-30天可完成原球茎增殖培养，增殖培养基配
由下列原料配制而成：MS＋10%的红龙果＋5%的蕨根粉＋3g/L的牛肉膏＋5g/L的活性炭，所述10%的红龙果＋5%的蕨根粉是指分别加入原料总重量10%的红龙果和原料总重量5%的蕨根粉，所述3g/L的牛肉膏＋5g/L的活性炭是指每升原料中分别加入3g牛肉膏和5g活性炭，增殖系数达到10.7；
（三）幼苗生根培养
将增殖培养基生长出的原球茎接种于生根培养基上，每个增殖培养基瓶可接种300-500个生根培养瓶，每个生根培养瓶上分布25个接种点有幼苗约100株。所述生根培养基由下列原料配制而成：MS＋10%的红龙果＋5%的蕨根粉＋5%的椰子汁＋5g/L的活性炭，所述10%的红龙果＋5%的蕨根粉＋5%的椰子汁是指分别加入原料总重量10%的红龙果、原料总重量5%的蕨根粉和原料总重量5%的椰子汁，所述5g/L的活性炭是指每升原料中加入5g活性炭，经过30-40天可完成幼苗生根培养，苗高达到6.3cm,根数10.1；
六、炼苗出苗
瓶中幼苗移栽前，需要揭开瓶盖放于培养室外栽培大棚内炼苗7天左右，适应自然环境后，将幼苗小心取出，用50%多菌灵1000倍液将根部培养基冲洗干净，凉干后装箱出售。
用实施例2制出的种苗生产出的铁皮石斛枝条红杆率可达99.3%，为红杆铁皮石斛上等品，按种植面积算,其干态枝条红杆的产量为每平方米1.22Kg。