本发明涉及一种微体繁殖方法，具体来说涉及一种植物快繁与优质苗培育方法，特别是一种切花月季“卡罗拉”的微体繁殖方法。
背景技术：
月季(Rosa hybrida L.)是蔷薇科(Rosaceae)蔷薇属(Rosa L.)植物，是我国十大名花之一，被誉为“花中皇后”，象征和平友谊、爱情、美好，升华人们的心灵，具有极高的观赏价值和商业价值，现有技术中，切花月季“卡罗拉”的组培快繁中，容易出现茎段初代培养中易污染褐变，茎增殖和芽分化的细弱，生根壮苗率低和移栽成活率低等技术难点。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种切花月季“卡罗拉”的微体繁殖方法，利用组织培养技术快速繁殖切花月季“卡罗拉”，是提高“卡罗拉”质量和数量，获得大量整齐一致的种苗的最佳方法，本发明针对“卡罗拉”的形态特征，已成功研发出用茎段为材料，进行茎段切割、消毒、初代培养、增殖培养、生根培养和试管苗移栽等一系列关键技术，解决了“卡罗拉”大规模生产的技术瓶颈。
本发明的构成：一种切花月季“卡罗拉”的微体繁殖方法，其特征在于：所述微体繁殖方法，包括如下步骤：
(1) 外植体的选择与灭菌
首先选用生长季节新发的幼嫩茎段，要求生长健壮，无病虫害，无木质化，带腋芽，实验材料在自来水下冲洗30 min，边洗边用毛刷刷洗表面，在高浓度的洗涤液中浸泡20 min，自来水下冲净；在超净工作台上，先用75％酒精消毒30 S，再用0.1％升汞液消毒l0min，无菌水漂洗6次；最后用无菌滤纸吸干表面水分；
(2) 初代培养
用解剖刀将带腋芽的茎段切割成0.5-0.8cm的长度，接入到1/2 MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L+蔗糖20g/L +琼脂8-10g/L的诱导培养基中，pH 5.7，茎段刚接入培养基时，要放到培养温度为15 -20℃的黑暗条件下培养5-7天，然后放到光照强度为1800-2000 Lux 的日光灯下培养30-40 d，光照时间12h/d；
（3）继代培养
初代获得的芽长至1cm时，接入增殖培养基1/2 MS+6-BA 1.0 mg/L +NAA mg/L+蔗糖20g/L +琼脂8-10g/L，pH 5.6，每隔2-3个月继代一次，经过反复分割继代培养，获得大量的根状茎，在光强为1800-2000 lux 的日光灯下培养30-40 d，温度25±1℃，光照时间12h/d；
（4）生根培养
到芽高长至3-4cm时转至生根壮苗培养，放在温度25±1℃，光强2000 lux日光灯下培养2-3个月，光照时间12h/d，在培养后期的1个月，放在温室内，生根培养基：1/2 MS+NAA0.5 mg/L+IBA 0.1 mg/ L+活性炭2-3g/L +蔗糖20g/L +琼脂8-10g/L；
（5）试管苗移栽
待小苗高6-7cm，有5-7条根时移栽，基质填埋于根茎部位，先放在高湿、1600 lux 的弱光条件缓苗7-10d，再放到20-25℃，空气湿度相对70%的条件下，1-2月喷施1/1000的营养液和抗菌剂。
切花月季“卡罗拉”的微体繁殖方法，其特征在于“所述基质是蛭石，营养液是MS大量元素，抗菌剂是百菌清。
与现有技术比较，本发明解决了茎段初代培养中易污染褐变，茎增殖和芽分化的细弱，生根壮苗率低和移栽成活率低等技术难点，提出一种既能解决上述技术难题，又能降低生产成本，实现“卡罗拉”规模化优质组培苗生产的方法，即切花月季“卡罗拉”的微体繁殖方法。
具体实施方式
以下通过实施例结合本发明的有益效果作进一步说明：
切花月季“卡罗拉”的微体繁殖方法，包括如下步骤：
(1) 外植体的选择
选用生长季节新发的幼嫩茎段，要求生长健壮，无病虫害，无木质化，带腋芽。
（2）消毒灭菌
实验材料在自来水下冲洗30 min，边洗边用毛刷刷洗表面，在高浓度的洗涤液中浸泡20 min，自来水下冲净；在超净工作台上，先用75％酒精消毒30 S，再用0.1％升汞液消毒l0min，无菌水漂洗6次；最后用无菌滤纸吸干表面水分。
（3）茎段的切割
在超净工作台中用解剖刀将消毒后的茎段切割成5-8cm带腋芽的小段，尽量保证腋芽的完整性，以免生长点受损。
(4) 初代培养
用解剖刀将带腋芽的茎段切割成0.5-0.8cm的长度，接入到1/2 MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L+蔗糖20g/L +琼脂8-10g/L的诱导培养基中，pH 5.7，茎段刚接入培养基时，要放到培养温度为15 -20℃的黑暗条件下培养5-7天，然后放到光照强度为1800-2000 Lux 的日光灯下培养30-40 d，光照时间12h/d。
（5）继代培养
初代获得的芽长至1cm左右时，接入增殖培养基1/2 MS+6-BA 1.0 mg/L +NAA mg/L+蔗糖20g/L +琼脂8-10g/L。，pH 5.6，每隔2-3个月继代一次，经过反复分割继代培养，获得大量的根状茎，在光强为1800-2000 lux 的日光灯下培养30-40 d，温度25±1℃，光照时间12h/d。
（6）生根培养
到芽高长至3-4cm时转至生根壮苗培养，放在温度25±1℃，光强2000 lux日光灯下培养2-3个月，光照时间12h/d，在培养后期的1个月，放在温室内，生根培养基：1/2 MS+NAA0.5 mg/L+IBA 0.1 mg/ L+活性炭2-3g/L +蔗糖20g/L +琼脂8-10g/L。
（7）试管苗移栽
待小苗高6-7cm，有5-7条根时移栽，基质填埋于根茎部位，先放在高湿、1600 lux 的弱光条件缓苗7-10d，再放到20-25℃，空气湿度相对70%的条件下，1-2月喷施1/1000的营养液和抗菌剂。
切花月季“卡罗拉”的微体繁殖方法，其特征在于“所述基质是蛭石，营养液是MS大量元素，抗菌剂是百菌清。
切花月季“卡罗拉”的微体繁殖方法以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，任何未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。