本发明涉及一种乔木的快速繁殖方法，更具体地说，本发明涉及一种桢楠的快速繁殖方法，属于树木繁殖技术领域。
背景技术：
桢楠为樟科常绿大乔木，属于国家二级保护植物，也是中国的特产树种，并且具有极高的经济价值。桢楠木材优良，纹理直而结构细密，不易变形和开裂，具芳香气，为建筑、家具等的珍贵用材。其木材和枝叶含芳香油，蒸馏可得楠木油，是高级香料。同时，该种为高大乔木，树姿优美，树干通直，叶终年不谢，是著名的庭园观赏和城市绿化树种。
桢楠极其珍贵，其生长速度非常慢，一般桢楠长成为栋梁材要上百年。在稀少得不能获得的今天，为了挽救桢楠不致绝种，早在天然林保护工程实施前的1984年国务院环境保护委员会公布的“珍稀濒危保护植物名隶”中，桢楠就明显的列入其中。1999年8月的“重点保护植物名录”中，再次将桢楠列为保护对象。因此，研究桢楠的快速繁殖方法，不仅可以缩短桢楠的生长周期，加快其成材速度，还可以充实国内在桢楠繁育方面的理论体系，完善桢楠的保护工作。
国家知识产权局于2013.12.18公开了一件公开号为CN103444531A，名称为“一种金丝楠木组织培养的快繁方法”的发明，该发明涉及一种金丝楠木组织培养的快繁方法，包括以下步骤：（1）选种，预处理、浸泡后放入基质中萌发，待胚分化后转移培养；（2）取幼嫩萌条作为外植体进行芽诱导培养；（3）取新生的幼嫩苗切段进行生根培养；（4）将不定丛芽接种到增殖培养基中进行增殖培养；（5）将增殖培养获得的不定丛芽接种到生根培养基中进行生根培养；（6）炼苗与移栽。本发明采用幼苗茎段组织生根培养，和不定丛芽诱导增殖培养相结合，合理驯化，循环取材，最大程度的保留了金丝楠木的完整基因组，提高了金丝楠木的成活率和品质，加快了金丝楠木的生长速度。
上述现有技术金丝楠木与桢楠有一定区别。另外，先培育种子，再进行组织培养，培育繁殖时间较长；采用的培养基使得成活率较低。
技术实现要素：
本发明旨在解决现有技术组织培养的问题，提供一种桢楠的快速繁殖方法，采取组织培养，能够有效缩短桢楠的繁殖时间，提高出芽率和成活率，且培育壮苗。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案为：
一种桢楠的快速繁殖方法，其特征在于：包括以下方法步骤：
A、外植体的选取与灭菌
选用桢楠的嫩茎上芽体作为培养材料，先用自来水冲洗，再用洗衣粉溶液漂洗，再用自来水冲洗，接着置于75%的乙醇溶液中处理，然后再经0.1%的升汞消毒后用无菌水冲洗，用无菌吸水纸吸干水分，切去外植体变色的部分后,置于无菌培养皿中备用；
B、芽体的萌发
将灭菌处理后的芽体接种在WPM+NAA1.0mg/L+6-BA2.0mg/L+PVP6mg/L培养基上，pH值为5.8-6.0，培养温度为23-27℃，每天光照12小时，光照强度1700Lx，接种后芽体萌发，然后形成带叶的小苗；
C、愈伤组织诱导
取初始诱导培养中的芽体，放入在WPM+NAA2.0mg/L+6-BA4mg/L+PVP6mg/L培养基中培养14-16天，培养温度为23-27℃；
D、分化和增殖培养
将步骤B得到的小苗切下转接于WPM+NAA2.0mg/L+6-BA6.0mg/L+PVP10mg/L培养基上，直至形成丛生芽，pH值为5.8-6.0，培养温度23-27℃，每天光照14小时，光照强度2000Lx，24-26天为一个生长周期；
E、生根培养
将分化和增值培养后形成的小苗放在Ms+NAA2.0mg/L+6-BA4.0mg/L+PVP10mg/L生根培养基上，pH值为5.8-6.0，培养温度23-27℃，每天光照16小时，光照强度2000Lx，19-21天形成完整植株；
F、炼苗和移栽
将有生根的桢楠幼苗的培养基瓶盖打开，室温下炼苗2-4天后，取出幼苗，放入清水中把根部的琼脂清洗干净，移载到沙土或富养土中，移栽43-47天，成活。
本发明在步骤A中，所述洗衣粉溶液的浓度为5%，所述用用洗衣粉溶液漂洗的时间为5-6min。
本发明在步骤A中，所述用自来水冲洗的时间都为30-35min。
本发明在步骤A中，所述75%的乙醇溶液中处理的时间为10-30秒。
本发明在步骤B中，接种后7-9天芽体萌发，14-16天形成带叶的小苗。
本发明在步骤C中，愈伤组织诱导过程为暗培养。
本发明在步骤D中，增殖系数为5以上。
本发明所述的WPM培养基配方为：无机盐：NH4N03 400mg/L、Ca(NO3)2·4H2O 556mg/L、K2SO4 990mg/L、CaCl2·2H2O 96mg/L、KH2PO4 170mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L、MgSO4·7H2O 370mg/L、MnSO4·H2O 22.4mg/L、ZnSO4·7H2O 8.6mg/L、CuSO4·5H2O 0.25mg/L、FeSO4·7H2O 27.8mg/L、Na2-EDTA 37.3mg/L；有机物：肌醇 100mg/L、维生素B1 1.0mg/L、烟酸 0.5mg/L、维生素B6 0.5mg/L、甘氨酸 2.0mg/L、蔗糖 20g/L、琼脂 6g/L、pH为5.2。
本发明所述的MS培养基配方为：无机盐:NH4N03 l650mg/L、KNO3 1900mg/L、CaCl2·2H2O 440mg/L、MgSO4·7H2O 370mg/L、KH2PO4 170mg/L 、Na2-EDTA 37.3mg/L、 FeSO4·7H2O 27.8mg/L、H3BO3 6.2mg/L、MnSO4·4H2O 22.3mg/L、ZnSO4·7H2O 8.6mg/L、KI 0.83mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L、CuSO4·5H2O 0.025mg/L、CoCl2·6H2O 0.025mg/L；有机物：肌醇 100mg/L、烟酸 0.5mg/L、维生素B6 0.5mg/L、维生素B1 0.1mg/L、甘氨酸 2.0mg/L。
本发明带来的有益技术效果：
1、本发明的目的是提供桢楠的快速繁殖方法，非常适合大规模生产，具有配方效果佳，出芽率高，培养时间短，植株生长旺盛，可操作性强，应用价值高的优点。
2、本发明直接利用优良桢楠母树上的芽体进行组培，无疑缩短了培育时间，并且节约成本。本发明选取了WPM培养基和MS培养基，在初代培养过程中，以WPM为基本培养基更有利于芽体的分化和成活。而在生根培养过程中，MS培养基更利于生根及后期培育壮苗，从而提高桢楠小苗的成活率。生根率达到95%以上，移载成活率达到95%以上。
具体实施方式
实施例1
一种桢楠的快速繁殖方法，其特征在于：包括以下方法步骤：
A、外植体的选取与灭菌
选用桢楠的嫩茎上芽体作为培养材料，先用自来水冲洗，再用洗衣粉溶液漂洗，再用自来水冲洗，接着置于75%的乙醇溶液中处理，然后再经0.1%的升汞消毒后用无菌水冲洗，用无菌吸水纸吸干水分，切去外植体变色的部分后,置于无菌培养皿中备用；
B、芽体的萌发
将灭菌处理后的芽体接种在WPM+NAA1.0mg/L+6-BA2.0mg/L+PVP6mg/L培养基上，pH值为5.8，培养温度为23℃，每天光照12小时，光照强度1700Lx，接种后芽体萌发，然后形成带叶的小苗；
C、愈伤组织诱导
取初始诱导培养中的芽体，放入在WPM+NAA2.0mg/L+6-BA4mg/L+PVP6mg/L培养基中培养14天，培养温度为23℃；
D、分化和增殖培养
将步骤B得到的小苗切下转接于WPM+NAA2.0mg/L+6-BA6.0mg/L+PVP10mg/L培养基上，直至形成丛生芽，pH值为5.8，培养温度23℃，每天光照14小时，光照强度2000Lx，24天为一个生长周期；
E、生根培养
将分化和增值培养后形成的小苗放在Ms+NAA2.0mg/L+6-BA4.0mg/L+PVP10mg/L生根培养基上，pH值为5.8，培养温度23℃，每天光照16小时，光照强度2000Lx，19天形成完整植株；
F、炼苗和移栽
将有生根的桢楠幼苗的培养基瓶盖打开，室温下炼苗2天后，取出幼苗，放入清水中把根部的琼脂清洗干净，移载到沙土或富养土中，移栽43天，成活。
实施例2
一种桢楠的快速繁殖方法，其特征在于：包括以下方法步骤：
A、外植体的选取与灭菌
选用桢楠的嫩茎上芽体作为培养材料，先用自来水冲洗，再用洗衣粉溶液漂洗，再用自来水冲洗，接着置于75%的乙醇溶液中处理，然后再经0.1%的升汞消毒后用无菌水冲洗，用无菌吸水纸吸干水分，切去外植体变色的部分后,置于无菌培养皿中备用；
B、芽体的萌发
将灭菌处理后的芽体接种在WPM+NAA1.0mg/L+6-BA2.0mg/L+PVP6mg/L培养基上，pH值为6.0，培养温度为27℃，每天光照12小时，光照强度1700Lx，接种后芽体萌发，然后形成带叶的小苗；
C、愈伤组织诱导
取初始诱导培养中的芽体，放入在WPM+NAA2.0mg/L+6-BA4mg/L+PVP6mg/L培养基中培养16天，培养温度为27℃；
D、分化和增殖培养
将步骤B得到的小苗切下转接于WPM+NAA2.0mg/L+6-BA6.0mg/L+PVP10mg/L培养基上，直至形成丛生芽，pH值为6.0，培养温度27℃，每天光照14小时，光照强度2000Lx，26天为一个生长周期；
E、生根培养
将分化和增值培养后形成的小苗放在Ms+NAA2.0mg/L+6-BA4.0mg/L+PVP10mg/L生根培养基上，pH值为6.0，培养温度27℃，每天光照16小时，光照强度2000Lx，21天形成完整植株；
F、炼苗和移栽
将有生根的桢楠幼苗的培养基瓶盖打开，室温下炼苗4天后，取出幼苗，放入清水中把根部的琼脂清洗干净，移载到沙土或富养土中，移栽47天，成活。
实施例3
一种桢楠的快速繁殖方法，其特征在于：包括以下方法步骤：
A、外植体的选取与灭菌
选用桢楠的嫩茎上芽体作为培养材料，先用自来水冲洗，再用洗衣粉溶液漂洗，再用自来水冲洗，接着置于75%的乙醇溶液中处理，然后再经0.1%的升汞消毒后用无菌水冲洗，用无菌吸水纸吸干水分，切去外植体变色的部分后,置于无菌培养皿中备用；
B、芽体的萌发
将灭菌处理后的芽体接种在WPM+NAA1.0mg/L+6-BA2.0mg/L+PVP6mg/L培养基上，pH值为5.9，培养温度为25℃，每天光照12小时，光照强度1700Lx，接种后芽体萌发，然后形成带叶的小苗；
C、愈伤组织诱导
取初始诱导培养中的芽体，放入在WPM+NAA2.0mg/L+6-BA4mg/L+PVP6mg/L培养基中培养15天，培养温度为25℃；
D、分化和增殖培养
将步骤B得到的小苗切下转接于WPM+NAA2.0mg/L+6-BA6.0mg/L+PVP10mg/L培养基上，直至形成丛生芽，pH值为5.9，培养温度25℃，每天光照14小时，光照强度2000Lx，25天为一个生长周期；
E、生根培养
将分化和增值培养后形成的小苗放在Ms+NAA2.0mg/L+6-BA4.0mg/L+PVP10mg/L生根培养基上，pH值为5.9，培养温度25℃，每天光照16小时，光照强度2000Lx，20天形成完整植株；
F、炼苗和移栽
将有生根的桢楠幼苗的培养基瓶盖打开，室温下炼苗3天后，取出幼苗，放入清水中把根部的琼脂清洗干净，移载到沙土或富养土中，移栽45天，成活。
实施例4
一种桢楠的快速繁殖方法，其特征在于：包括以下方法步骤：
A、外植体的选取与灭菌
选用桢楠的嫩茎上芽体作为培养材料，先用自来水冲洗，再用洗衣粉溶液漂洗，再用自来水冲洗，接着置于75%的乙醇溶液中处理，然后再经0.1%的升汞消毒后用无菌水冲洗，用无菌吸水纸吸干水分，切去外植体变色的部分后,置于无菌培养皿中备用；
B、芽体的萌发
将灭菌处理后的芽体接种在WPM+NAA1.0mg/L+6-BA2.0mg/L+PVP6mg/L培养基上，pH值为5.9，培养温度为24℃，每天光照12小时，光照强度1700Lx，接种后芽体萌发，然后形成带叶的小苗；
C、愈伤组织诱导
取初始诱导培养中的芽体，放入在WPM+NAA2.0mg/L+6-BA4mg/L+PVP6mg/L培养基中培养15天，培养温度为26℃；
D、分化和增殖培养
将步骤B得到的小苗切下转接于WPM+NAA2.0mg/L+6-BA6.0mg/L+PVP10mg/L培养基上，直至形成丛生芽，pH值为5.9，培养温度24℃，每天光照14小时，光照强度2000Lx，25天为一个生长周期；
E、生根培养
将分化和增值培养后形成的小苗放在Ms+NAA2.0mg/L+6-BA4.0mg/L+PVP10mg/L生根培养基上，pH值为5.9，培养温度26℃，每天光照16小时，光照强度2000Lx，20天形成完整植株；
F、炼苗和移栽
将有生根的桢楠幼苗的培养基瓶盖打开，室温下炼苗3天后，取出幼苗，放入清水中把根部的琼脂清洗干净，移载到沙土或富养土中，移栽46天，成活。
实施例5
在实施例1-4的基础上：
优选的，在步骤A中，所述洗衣粉溶液的浓度为5%，所述用用洗衣粉溶液漂洗的时间为5min。
优选的或者进一步的，在步骤A中，所述用自来水冲洗的时间都为30min。
优选的或者进一步的，在步骤A中，所述75%的乙醇溶液中处理的时间为10秒。
优选的，在步骤B中，接种后7天芽体萌发，14天形成带叶的小苗。
优选的，在步骤C中，愈伤组织诱导过程为暗培养。
优选的，在步骤D中，增殖系数为5以上。
优选的，所述的WPM培养基配方为：无机盐：NH4N03 400mg/L、Ca(NO3)2·4H2O 556mg/L、K2SO4 990mg/L、CaCl2·2H2O 96mg/L、KH2PO4 170mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L、MgSO4·7H2O 370mg/L、MnSO4·H2O 22.4mg/L、ZnSO4·7H2O 8.6mg/L、CuSO4·5H2O 0.25mg/L、FeSO4·7H2O 27.8mg/L、Na2-EDTA 37.3mg/L；有机物：肌醇 100mg/L、维生素B1 1.0mg/L、烟酸 0.5mg/L、维生素B6 0.5mg/L、甘氨酸 2.0mg/L、蔗糖 20g/L、琼脂 6g/L、pH为5.2。
优选的或者进一步的，所述的MS培养基配方为：无机盐:NH4N03 l650mg/L、KNO31900mg/L、CaCl2·2H2O 440mg/L、MgSO4·7H2O 370mg/L、KH2PO4 170mg/L 、Na2-EDTA 37.3mg/L、 FeSO4·7H2O 27.8mg/L、H3BO3 6.2mg/L、MnSO4·4H2O 22.3mg/L、ZnSO4·7H2O 8.6mg/L、KI 0.83mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L、CuSO4·5H2O 0.025mg/L、CoCl2·6H2O 0.025mg/L；有机物：肌醇 100mg/L、烟酸 0.5mg/L、维生素B6 0.5mg/L、维生素B1 0.1mg/L、甘氨酸 2.0mg/L。
实施例6
在实施例1-4的基础上：
优选的，在步骤A中，所述洗衣粉溶液的浓度为5%，所述用用洗衣粉溶液漂洗的时间为6min。
优选的或者进一步的，在步骤A中，所述用自来水冲洗的时间都为35min。
优选的或者进一步的，在步骤A中，所述75%的乙醇溶液中处理的时间为30秒。
优选的，在步骤B中，接种后9天芽体萌发，16天形成带叶的小苗。
优选的，在步骤C中，愈伤组织诱导过程为暗培养。
优选的，在步骤D中，增殖系数为5以上。
优选的，所述的WPM培养基配方为：无机盐：NH4N03 400mg/L、Ca(NO3)2·4H2O 556mg/L、K2SO4 990mg/L、CaCl2·2H2O 96mg/L、KH2PO4 170mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L、MgSO4·7H2O 370mg/L、MnSO4·H2O 22.4mg/L、ZnSO4·7H2O 8.6mg/L、CuSO4·5H2O 0.25mg/L、FeSO4·7H2O 27.8mg/L、Na2-EDTA 37.3mg/L；有机物：肌醇 100mg/L、维生素B1 1.0mg/L、烟酸 0.5mg/L、维生素B6 0.5mg/L、甘氨酸 2.0mg/L、蔗糖 20g/L、琼脂 6g/L、pH为5.2。
优选的或者进一步的，所述的MS培养基配方为：无机盐:NH4N03 l650mg/L、KNO31900mg/L、CaCl2·2H2O 440mg/L、MgSO4·7H2O 370mg/L、KH2PO4 170mg/L 、Na2-EDTA 37.3mg/L、 FeSO4·7H2O 27.8mg/L、H3BO3 6.2mg/L、MnSO4·4H2O 22.3mg/L、ZnSO4·7H2O 8.6mg/L、KI 0.83mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L、CuSO4·5H2O 0.025mg/L、CoCl2·6H2O 0.025mg/L；有机物：肌醇 100mg/L、烟酸 0.5mg/L、维生素B6 0.5mg/L、维生素B1 0.1mg/L、甘氨酸 2.0mg/L。
实施例7
在实施例1-4的基础上：
优选的，在步骤A中，所述洗衣粉溶液的浓度为5%，所述用用洗衣粉溶液漂洗的时间为5-6min。
优选的或者进一步的，在步骤A中，所述用自来水冲洗的时间都为32min。
优选的或者进一步的，在步骤A中，所述75%的乙醇溶液中处理的时间为20秒。
优选的，在步骤B中，接种后8天芽体萌发，15天形成带叶的小苗。
优选的，在步骤C中，愈伤组织诱导过程为暗培养。
优选的，在步骤D中，增殖系数为5以上。
优选的，所述的WPM培养基配方为：无机盐：NH4N03 400mg/L、Ca(NO3)2·4H2O 556mg/L、K2SO4 990mg/L、CaCl2·2H2O 96mg/L、KH2PO4 170mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L、MgSO4·7H2O 370mg/L、MnSO4·H2O 22.4mg/L、ZnSO4·7H2O 8.6mg/L、CuSO4·5H2O 0.25mg/L、FeSO4·7H2O 27.8mg/L、Na2-EDTA 37.3mg/L；有机物：肌醇 100mg/L、维生素B1 1.0mg/L、烟酸 0.5mg/L、维生素B6 0.5mg/L、甘氨酸 2.0mg/L、蔗糖 20g/L、琼脂 6g/L、pH为5.2。
优选的或者进一步的，所述的MS培养基配方为：无机盐:NH4N03 l650mg/L、KNO31900mg/L、CaCl2·2H2O 440mg/L、MgSO4·7H2O 370mg/L、KH2PO4 170mg/L 、Na2-EDTA 37.3mg/L、 FeSO4·7H2O 27.8mg/L、H3BO3 6.2mg/L、MnSO4·4H2O 22.3mg/L、ZnSO4·7H2O 8.6mg/L、KI 0.83mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L、CuSO4·5H2O 0.025mg/L、CoCl2·6H2O 0.025mg/L；有机物：肌醇 100mg/L、烟酸 0.5mg/L、维生素B6 0.5mg/L、维生素B1 0.1mg/L、甘氨酸 2.0mg/L。
实施例8
在实施例1-4的基础上：
优选的，在步骤A中，所述洗衣粉溶液的浓度为5%，所述用用洗衣粉溶液漂洗的时间为5-6min。
优选的或者进一步的，在步骤A中，所述用自来水冲洗的时间都为33min。
优选的或者进一步的，在步骤A中，所述75%的乙醇溶液中处理的时间为15秒。
优选的，在步骤B中，接种后7天芽体萌发，15天形成带叶的小苗。
优选的，在步骤C中，愈伤组织诱导过程为暗培养。
优选的，在步骤D中，增殖系数为5以上。
优选的，所述的WPM培养基配方为：无机盐：NH4N03 400mg/L、Ca(NO3)2·4H2O 556mg/L、K2SO4 990mg/L、CaCl2·2H2O 96mg/L、KH2PO4 170mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L、MgSO4·7H2O 370mg/L、MnSO4·H2O 22.4mg/L、ZnSO4·7H2O 8.6mg/L、CuSO4·5H2O 0.25mg/L、FeSO4·7H2O 27.8mg/L、Na2-EDTA 37.3mg/L；有机物：肌醇 100mg/L、维生素B1 1.0mg/L、烟酸 0.5mg/L、维生素B6 0.5mg/L、甘氨酸 2.0mg/L、蔗糖 20g/L、琼脂 6g/L、pH为5.2。
优选的或者进一步的，所述的MS培养基配方为：无机盐:NH4N03 l650mg/L、KNO31900mg/L、CaCl2·2H2O 440mg/L、MgSO4·7H2O 370mg/L、KH2PO4 170mg/L 、Na2-EDTA 37.3mg/L、 FeSO4·7H2O 27.8mg/L、H3BO3 6.2mg/L、MnSO4·4H2O 22.3mg/L、ZnSO4·7H2O 8.6mg/L、KI 0.83mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L、CuSO4·5H2O 0.025mg/L、CoCl2·6H2O 0.025mg/L；有机物：肌醇 100mg/L、烟酸 0.5mg/L、维生素B6 0.5mg/L、维生素B1 0.1mg/L、甘氨酸 2.0mg/L。
实施例9
案例1：
选取1000个桢楠的嫩茎上芽体作为培养材料，清洗消毒后置于75％的乙醇溶液中处理10-30秒，然后再经0.1％的升汞消毒后用无菌水冲洗，用无菌吸水纸吸干水分，切去外植体变色的部分后,将灭菌处理后的芽体接种在WPM+NAA1.0mg/L+6-BA2.0mg/L+PVP6mg/L培养基上，pH值为5.8-6.0，培养温度（25±2）℃，每天光照为12小时，光照强度1700Lx，接种后8天芽体开始萌发，15天后有992株形成带叶的小苗。取出带叶小苗放入在WPM+NAA2.0mg/L+6-BA4mg/L+PVP6mg/L培养基中培养15天，条件为暗培养，培养温度（25±2）℃。接着将小苗切下转接于WPM+NAA2.0mg/L+6-BA6.0mg/L+PVP10mg/L培养基上，pH值为5.8-6.0，培养温度（25±2）℃，每天光照14小时，光照强度2000LX，继续培养，25天后986形成丛生芽。将丛生芽放在Ms+NAA2.0mg/L+6-BA4.0mg/L+PVP10mg/L的生根培养基上，pH值为5.8-6.0，培养温度（25±2）℃，每天光照16小时，光照强度2000LX，20天后981株形成完整植株。将装有981株桢楠幼苗的培养基瓶盖打开，室温下炼苗3天后，取出幼苗，放入清水中把根部的琼脂清洗干净，移载到沙土或富养土中，注意保水保温保湿，移栽45天后，有977株桢楠幼苗成活，成活率达到97.7%。
案例2：
与案例1基本相似，其不同之处在于：生根培养中选择WPM+NAA2.0mg/L+6-BA4.0mg/L+PVP10mg/L作为生根培养基。最终桢楠小苗存活958株，成活率达到95.8%。
案例3：
与案例1基本相似，其不同之处在于：生根培养后的桢楠小苗不经过炼苗而直接移栽到沙土或富养土中。最终桢楠小苗存活951株，成活率为95.1%。