一种桢楠的快速繁殖方法与流程

技术特征：

1.一种桢楠的快速繁殖方法，其特征在于：包括以下方法步骤：

A、外植体的选取与灭菌

选用桢楠的嫩茎上芽体作为培养材料，先用自来水冲洗，再用洗衣粉溶液漂洗，再用自来水冲洗，接着置于75%的乙醇溶液中处理，然后再经0.1%的升汞消毒后用无菌水冲洗，用无菌吸水纸吸干水分，切去外植体变色的部分后,置于无菌培养皿中备用；

B、芽体的萌发

将灭菌处理后的芽体接种在WPM+NAA1.0mg/L+6-BA2.0mg/L+PVP6mg/L培养基上，pH值为5.8-6.0，培养温度为23-27℃，每天光照12小时，光照强度1700Lx，接种后芽体萌发，然后形成带叶的小苗；

C、愈伤组织诱导

取初始诱导培养中的芽体，放入在WPM+NAA2.0mg/L+6-BA4mg/L+PVP6mg/L培养基中培养14-16天，培养温度为23-27℃；

D、分化和增殖培养

将步骤B得到的小苗切下转接于WPM+NAA2.0mg/L+6-BA6.0mg/L+PVP10mg/L培养基上，直至形成丛生芽，pH值为5.8-6.0，培养温度23-27℃，每天光照14小时，光照强度2000Lx，24-26天为一个生长周期；

E、生根培养

将分化和增值培养后形成的小苗放在Ms+NAA2.0mg/L+6-BA4.0mg/L+PVP10mg/L生根培养基上，pH值为5.8-6.0，培养温度23-27℃，每天光照16小时，光照强度2000Lx，19-21天形成完整植株；

F、炼苗和移栽

将有生根的桢楠幼苗的培养基瓶盖打开，室温下炼苗2-4天后，取出幼苗，放入清水中把根部的琼脂清洗干净，移载到沙土或富养土中，移栽43-47天，成活。

2.根据权利要求1所述的一种桢楠的快速繁殖方法，其特征在于：在步骤A中，所述洗衣粉溶液的浓度为5%，所述用用洗衣粉溶液漂洗的时间为5-6min。

3.根据权利要求1或2所述的一种桢楠的快速繁殖方法，其特征在于：在步骤A中，所述用自来水冲洗的时间都为30-35min。

4.根据权利要求1或2所述的一种桢楠的快速繁殖方法，其特征在于：在步骤A中，所述75%的乙醇溶液中处理的时间为10-30秒。

5.根据权利要求1所述的一种桢楠的快速繁殖方法，其特征在于：在步骤B中，接种后7-9天芽体萌发，14-16天形成带叶的小苗。

6.根据权利要求1所述的一种桢楠的快速繁殖方法，其特征在于：在步骤C中，愈伤组织诱导过程为暗培养。

7.根据权利要求1所述的一种桢楠的快速繁殖方法，其特征在于：在步骤D中，增殖系数为5以上。

8.根据权利要求1所述的一种桢楠的快速繁殖方法，其特征在于：所述的WPM培养基配方为：无机盐：NH₄N0₃ 400mg/L、Ca(NO₃)₂·4H₂O 556mg/L、K₂SO₄ 990mg/L、CaCl₂·2H₂O 96mg/L、KH₂PO₄ 170mg/L、Na₂MoO₄·2H₂O 0.25mg/L、MgSO₄·7H₂O 370mg/L、MnSO₄·H₂O 22.4mg/L、ZnSO₄·7H₂O 8.6mg/L、CuSO₄·5H₂O 0.25mg/L、FeSO₄·7H₂O 27.8mg/L、Na2-EDTA 37.3mg/L；有机物：肌醇 100mg/L、维生素B1 1.0mg/L、烟酸 0.5mg/L、维生素B6 0.5mg/L、甘氨酸 2.0mg/L、蔗糖 20g/L、琼脂 6g/L、pH为5.2。

9.根据权利要求1或8所述的一种桢楠的快速繁殖方法，其特征在于：所述的MS培养基配方为：无机盐:NH₄N0₃ l650mg/L、KNO₃ 1900mg/L、CaCl₂·2H₂O 440mg/L、MgSO₄·7H₂O 370mg/L、KH₂PO₄ 170mg/L 、Na2-EDTA 37.3mg/L、 FeSO₄·7H₂O 27.8mg/L、H₃BO₃ 6.2mg/L、MnSO₄·4H₂O 22.3mg/L、ZnSO₄·7H₂O 8.6mg/L、KI 0.83mg/L、Na₂MoO₄·2H2O 0.25mg/L、CuSO₄·5H₂O 0.025mg/L、CoCl₂·6H₂O 0.025mg/L；有机物：肌醇 100mg/L、烟酸 0.5mg/L、维生素B6 0.5mg/L、维生素B1 0.1mg/L、甘氨酸 2.0mg/L。