本发明属于育种技术，具体涉及一种掌叶覆盆子种子繁殖的方法。
背景技术：
掌叶覆盆子(Rubus chingii Hu)为《中国药典》收录的“覆盆子”，隶属于蔷薇科悬钩子属，别名大号角公、牛奶母等，为多年生落叶小灌木，属药食同源植物，现已广泛应用于药品、保健品、化妆品和化工等行业。
近年来研究表明，掌叶覆盆子是一种开发前途十分广阔的植物资源，掌叶覆盆子的根、茎、叶均可入药；其未成熟青果加工后即作为中药材入药，果实味甘、酸、性温、归肾、膀胱经，具有益肾、固精、缩尿等功能，用于肾虚、小便频数、阳萎早泄、遗精滑精等症。掌叶覆盆子果实为聚合浆果，成熟果实富含氨基酸、维生素E、维生素C、维生素B、维生素PP、超氧化物歧化酶、矿质元素和挥发性等成分，用于食疗和保健，可作为人体良好的氨基酸源。掌叶覆盆子可直接用于各类食品加工业，如果汁、果酱、果粉、果酒、糕点、冷饮等。全国年需求量在500t以上，随着掌叶覆盆子开发利用的不断深入，其用量将越来越大。
但是，目前生产所用原料大多数来自于野生，规范化种植处于起步阶段，而且苗木基本来自野生资源采挖移植和分株繁殖，繁殖系数低。而掌叶覆盆子种子重量轻，体积很小，休眠程度深，繁殖难，掌叶覆盆子种子快速繁殖体系没有建立，不利于掌叶覆盆子产业发展，不利于其杂种优势和遗传规律的研究。
据《云南农业大学学报》2007年第3期，段修安、王仕玉、朱映安在《不同化学药剂处理对树莓种子发芽率和幼苗株高的影响》的文章中报道，化学试剂处理掌叶覆盆子种子最高发芽率仅31％；《经济林研究》2001年第4期，付顺华、吴家森、余永清和朱玉球等在《掌叶覆盆子种子特性与发芽试验研究》的文章中报道，种子发芽率为50％，但需要低温湿沙贮藏265天，时间漫长，需要冰箱低温长期培养，加上发芽不整齐，这给包括移苗在内的苗期管理增加了难度，既费工又耗时，这对于掌叶覆盆子种子的快速繁殖是极为不利的。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种掌叶覆盆子种子繁殖的方法，所述方法简单经济快速，打破掌叶覆盆子种子休眠，加大繁殖系数，完善了掌叶覆盆子快速繁殖体系。
为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
第一方面，本发明提供了一种掌叶覆盆子种子繁殖的方法，所述方法包括如下步骤：所述种子经过预处理、酸蚀、高锰酸钾处理、赤霉素(GA3)处理和低温沙藏后，进行播种育苗、栽培即可得到掌叶覆盆子。
优选地，所述预处理包括如下具体步骤：
摘取成熟掌叶覆盆子果实，去掉萼片和果柄，留下球形的聚合瘦果，搓碎，用清水将果肉冲洗掉，晾干后保存。
优选地，所述保存的温度为20-30℃，例如可以是20℃、21℃、22℃、23℃、24℃、25℃、26℃、27℃、28℃、29℃或30℃。优选为23-25℃。
优选地，所述保存的湿度为15-60％，例如可以是15％、16％、18％、20％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、30％、31％、32％、33％、35％、36％、38％、40％、42％、43％、45％、48％、50％、52％、55％、56％、58％或60％，优选为20-50％，进一步优选为25-40％。
优选地，所述酸蚀包括如下具体步骤：将酸与预处理后的种子混合搅拌，浸泡后用水冲洗。
本发明中，所述酸蚀的作用为碳化种壳，即减弱或消除种壳机械障碍。
本发明中，所述用水冲洗是为了漂洗去种子上的硫酸，冲水同时轻柔的搓洗，将碳化的部分搓洗下来。
优选地，所述酸为质量分数大于75％的浓硫酸，优选为98％的浓硫酸。例如可以是75％的浓硫酸、80％的浓硫酸、85％的浓硫酸或90％的浓硫酸。优选地，所述浸泡时间为15-35min，例如可以是15min、16min、17min、19min、20min、21min、23min、25min、26min、27min、28min、30min、31min、32min、33min、34min或35min，优选为20-30min，进一步优选为25min。
优选地，所述用水冲洗的时间为8-30min，例如可以是8min、9min、10min、11min、12min、15min、16min、18min、20min、21min、23min、25min、26min、28min或30min，优选为10-25min。
优选地，所述高锰酸钾处理包括如下具体步骤：将酸蚀后的种子与高锰酸钾溶液混合，浸泡后用水冲洗，晾干。
本发明中，所述高锰酸钾处理的作用是为了对种子进行消毒。
优选地，所述高锰酸钾溶液的质量分数为0.1-0.8％，例如可以是0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％或0.8％，优选为0.2-0.5％，进一步优选为0.2％。
优选地，所述浸泡时间为6-20min，例如可以是6min、7min、8min、9min、10min、11min、12min、13min、15min、16min、18min或20min，优选为8-15min，进一步优选为10min。
优选地，所述用水冲洗的水为无菌水。
优选地，所述冲洗的次数为2-10次，例如可以是2次、3次、4次、5次、6次、7次、8次、9次或10次，优选为3-5次。
优选地，所述GA3处理包括如下具体步骤：将高锰酸钾处理后的种子用赤霉素溶液浸泡，优选为用赤霉素和硝酸钾的混合溶液浸泡。
本发明中，所述赤霉素处理的作用为提供种子一定的外界环境条件，使种子中GA和ABA两种激素之间相互作用或含量比例发生变化，可对种子的萌发进行调控，即GA增加或GA/ABA值增加，解除种子休眠。
优选地，所述GA3的浓度为1-10mg/L，例如可以是1mg/L、2mg/L、3mg/L、4mg/L、5mg/L、6mg/L、7mg/L、8mg/L、9mg/L或10mg/L，优选为2-6mg/L，进一步优选为2mg/L。
优选地，所述硝酸钾的浓度为20-40mg/L，例如可以是20mg/L、21mg/L、22mg/L、23mg/L、24mg/L、25mg/L、26mg/L、27mg/L、28mg/L、29mg/L、30mg/L、31mg/L、33mg/L、34mg/L、35mg/L、36mg/L、38mg/L或40mg/L，优选为25-36mg/L，进一步优选为34mg/L。
优选地，所述浸泡时间为15-45h，例如可以是15h、16h、17h、18h、20h、21h、23h、25h、26h、28h、30h、31h、33h、35h、36h、38h、40h、41h、43h、45h，优选为24-36h。
优选地，所述低温沙藏包括如下具体步骤：将GA3处理后的种子埋在沙子中层积。
本发明中，所述埋在沙子中种子经历4±1℃的低温层积，可有效解除种子休眠。
优选地，所述沙子与种子的体积比为(1-8):1，例如可以是1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1或8:1，优选为(2-5):1，进一步优选为3:1。
优选地，所述沙子的含水量为50-80％，例如可以是50％、51％、52％、53％、55％、56％、58％、60％、61％、63％、65％、68％、70％、71％、73％、75％、78％或80％，优选为60-75％，进一步优选为70％。
优选地，所述层积的时间为25-60天，例如可以是25天、26天、27天、28天、29天、30天、31天、33天、35天、36天、38天、40天、41天、43天、45天、48天、50天、51天、53天、55天、58天或60天，优选为28-40天，进一步优选为30天。
优选地，所述播种育苗、栽培具体包括如下步骤：将层积后的种子播种于营养土中，光照培养，出苗移栽，得到掌叶覆盆子的种苗；
优选地，所述营养土的pH为5-7，例如可以是5、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9或7，优选为5.5-6.5，进一步优选为5.5。
优选地，所述种子播种于营养土的深度为3-8mm，例如可以3mm、4mm、5mm、6mm、7mm或8mm，优选为4-7mm，进一步优选为5mm。
优选地，所述光照的光周期为黑暗光照交替进行。
优选地，所述黑暗的时间为6-10h，例如可以是6h、7h、8h、9h或10h，优选为8h。
优选地，所述黑暗的温度为10-20℃，例如可以是10℃、11℃、12℃、13℃、14℃、15℃、16℃、17℃、18℃、19℃或20℃，优选为12-18℃，进一步优选为15℃。
优选地，所述光照的时间为14-18h，例如可以是14h、15h、16h、17h或18h，优选为16h。
优选地，所述光照的温度为25-32℃，例如可以是25℃、26℃、27℃、28℃、29℃、30℃、31℃或32℃，优选为28-30℃，进一步优选为30℃。
优选地，所述光照度为800-1200Lux，例如可以是800Lux、810Lux、820Lux、830Lux、850Lux、860Lux、880Lux、900Lux、920Lux、950Lux、980Lux、1000Lux、1020Lux、1050Lux、1080Lux、1100Lux、1120Lux、1150Lux、1180Lux或1200Lux，优选为900-1100Lux，进一步优选为1000Lux。
作为优选技术方案，所述掌叶覆盆子种子繁殖的方法包括如下步骤：
(1)预处理：摘取成熟掌叶覆盆子果实，去掉萼片和果柄，留下球形的聚合瘦果，搓碎，用清水将果肉冲洗掉，晾干后在温度20-30℃，湿度15-60％下保存；
(2)酸蚀：将98％的浓硫酸与预处理后的种子混合搅拌，浸泡15-35min后用水冲洗8-30min；
(3)高锰酸钾处理：将酸蚀后的种子与质量分数为0.1-0.8％高锰酸钾溶液混合，浸泡6-20min后用无菌水冲洗2-10次，晾干；
(4)赤霉素处理：将高锰酸钾处理后的种子用浓度为1-10mg/L赤霉素和浓度为20-40mg/L硝酸钾混合溶液浸泡15-45h；
(5)低温沙藏：将赤霉素处理后的种子埋在含水量为50-80％的沙子中层积25-60天，所述沙子与种子的体积比为(1-8):1；
(6)栽培：将层积后的种子播种于pH为5-7的营养土中，播种深度为3-8mm，光照培养，出苗后将幼苗施肥一次后，待掌叶覆盆子幼苗长到4-5片真叶后移栽到苗床，得到掌叶覆盆子的种苗，所述光照培养的光照周期为：10-20℃的黑暗6-10h+25-32℃的光照14-18h，光照度为800-1200Lux。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
(1)本发明条件简单，操作容易，掌叶覆盆子种子发芽快，发芽率高，超过70％，发芽整齐，掌叶覆盆子种苗品质更高，便于移栽；
(2)本发明可以打破种子的休眠，相对于掌叶覆盆子采挖野生资源和分株繁殖及扦插繁殖，繁殖系数较大，克服了掌叶覆盆子分株繁殖繁殖系数低和扦插繁殖病毒积累及种质衰退的缺点；
(3)本发明的掌叶覆盆子种子繁殖方法受季节和地理环境因素的影响较小，繁殖各个环节技术易于控制，可大量繁殖掌叶覆盆子，利于掌叶覆盆子生理和遗传规律等的研究；
(4)本发明方法对环境无污染，所使用的药品主要是H2SO4、GA3和KNO3，H2SO4，后期只有废液需要处理，但处理这些药物废液的价格便宜，GA3是常用植物生长激素，对环境污染小，KNO3对环境没有污染，便于产业化生产掌叶覆盆子种子繁殖。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1
所述掌叶覆盆子种子繁殖的方法包括如下步骤：
(1)预处理：摘取成熟掌叶覆盆子果实，去掉萼片和果柄，留下球形的聚合瘦果，搓碎，用清水将果肉冲洗掉，晾干后在温度23-25℃，湿度20-50％下保存；
(2)酸蚀：将98％的浓硫酸与预处理后的种子混合搅拌，浸泡25min后用水冲洗10min，轻柔的搓掉碳化部分；
(3)高锰酸钾处理：将酸蚀后的种子与质量分数为0.2％高锰酸钾溶液混合，浸泡10min后用无菌水冲洗3-5次，晾干；
(4)赤霉素处理：将高锰酸钾处理后的种子用浓度为2mg/L赤霉素和浓度为34mg/L硝酸钾混合溶液浸泡24-36h；
(5)低温沙藏：将赤霉素处理后的种子埋在含水量为70％的沙子中层积30天，所述沙子与种子的体积比为3:1；
(6)栽培：将层积后的种子播种于pH为5.5的营养土中，播种深度为5mm，光照培养，出苗后将幼苗施肥一次后，待掌叶覆盆子幼苗长到4-5片真叶后移栽到苗床，得到掌叶覆盆子的种苗，所述光照培养的光照周期为：15℃的黑暗8h+30℃的光照16h，光照度为1000Lux。
制备得到的掌叶覆盆子的出苗率达到78％。
实施例2
所述掌叶覆盆子种子繁殖的方法包括如下步骤：
(1)预处理：摘取成熟掌叶覆盆子果实，去掉萼片和果柄，留下球形的聚合瘦果，搓碎，用清水将果肉冲洗掉，晾干后在温度20-23℃，湿度35-60％下保存；
(2)酸蚀：将75％的浓硫酸与预处理后的种子混合搅拌，浸泡15min后用水冲洗8min，轻柔的搓掉碳化部分；
(3)高锰酸钾处理：将酸蚀后的种子与质量分数为0.1％高锰酸钾溶液混合，浸泡20min后用无菌水冲洗2次，晾干；
(4)赤霉素处理：将高锰酸钾处理后的种子用浓度为1mg/L赤霉素和浓度为20mg/L硝酸钾混合溶液浸泡45h；
(5)低温沙藏：将赤霉素处理后的种子埋在含水量为50％的沙子中层积60天，所述沙子与种子的体积比为8:1；
(6)栽培：将层积后的种子播种于pH为5的营养土中，播种深度为8mm，光照培养，出苗后将幼苗施肥一次后，待掌叶覆盆子幼苗长到4-5片真叶后移栽到苗床，得到掌叶覆盆子的种苗，所述光照培养的光照周期为：10℃的黑暗6h+25℃的光照18h，光照度为800Lux。
制备得到的掌叶覆盆子的出苗率达到70％。
实施例3
所述掌叶覆盆子种子繁殖的方法包括如下步骤：
(1)预处理：摘取成熟掌叶覆盆子果实，去掉萼片和果柄，留下球形的聚合瘦果，搓碎，用清水将果肉冲洗掉，晾干后在温度26-30℃，湿度15-40％下保存；
(2)酸蚀：将85％的浓硫酸与预处理后的种子混合搅拌，浸泡35min后用水冲洗30min，轻柔的搓掉碳化部分；
(3)高锰酸钾处理：将酸蚀后的种子与质量分数为0.8％高锰酸钾溶液混合，浸泡6min后用无菌水冲洗10次，晾干；
(4)赤霉素处理：将高锰酸钾处理后的种子用浓度为10mg/L赤霉素和浓度为40mg/L硝酸钾混合溶液浸泡15h；
(5)低温沙藏：将赤霉素处理后的种子埋在含水量为80％的沙子中层积25天，所述沙子与种子的体积比为1:1；
(6)栽培：将层积后的种子播种于pH为7的营养土中，播种深度为3mm，光照培养，出苗后将幼苗施肥一次后，待掌叶覆盆子幼苗长到4-5片真叶后移栽到苗床，得到掌叶覆盆子的种苗，所述光照培养的光照周期为：20℃的黑暗10h+32℃的光照14h，光照度为800Lux。
制备得到的掌叶覆盆子的出苗率达到71％。
实施例4
所述掌叶覆盆子种子繁殖的方法包括如下步骤：
(1)预处理：摘取成熟掌叶覆盆子果实，去掉萼片和果柄，留下球形的聚合瘦果，搓碎，用清水将果肉冲洗掉，晾干后在温度23-26℃，湿度20-45％下保存；
(2)酸蚀：将90％的浓硫酸与预处理后的种子混合搅拌，浸泡20min后用水冲洗15min，轻柔的搓掉碳化部分；
(3)高锰酸钾处理：将酸蚀后的种子与质量分数为0.5％高锰酸钾溶液混合，浸泡12min后用无菌水冲洗5次，晾干；
(4)赤霉素处理：将高锰酸钾处理后的种子用浓度为8mg/L赤霉素和浓度为30mg/L硝酸钾混合溶液浸泡25h；
(5)低温沙藏：将赤霉素处理后的种子埋在含水量为60％的沙子中层积40天，所述沙子与种子的体积比为6:1；
(6)栽培：将层积后的种子播种于pH为6的营养土中，播种深度为4mm，光照培养，出苗后将幼苗施肥一次后，待掌叶覆盆子幼苗长到4-5片真叶后移栽到苗床，得到掌叶覆盆子的种苗，所述光照培养的光照周期为：12℃的黑暗7h+28℃的光照17h，光照度为900Lux。
制备得到的掌叶覆盆子的出苗率达到73％。
实施例5
所述掌叶覆盆子种子繁殖的方法包括如下步骤：
(1)预处理：摘取成熟掌叶覆盆子果实，去掉萼片和果柄，留下球形的聚合瘦果，搓碎，用清水将果肉冲洗掉，晾干后在温度25-28℃，湿度25-50％下保存；
(2)酸蚀：将98％的浓硫酸与预处理后的种子混合搅拌，浸泡30min后用水冲洗20min，轻柔的搓掉碳化部分；
(3)高锰酸钾处理：将酸蚀后的种子与质量分数为0.4％高锰酸钾溶液混合，浸泡15min后用无菌水冲洗8次，晾干；
(4)赤霉素处理：将高锰酸钾处理后的种子用浓度为4mg/L赤霉素和浓度为26mg/L硝酸钾混合溶液浸泡30h；
(5)低温沙藏：将赤霉素处理后的种子埋在含水量为70％的沙子中层积50天，所述沙子与种子的体积比为5:1；
(6)栽培：将层积后的种子播种于pH为6.5的营养土中，播种深度为4mm，光照培养，出苗后将幼苗施肥一次后，待掌叶覆盆子幼苗长到4-5片真叶后移栽到苗床，得到掌叶覆盆子的种苗，所述光照培养的光照周期为：18℃的黑暗8h+31℃的光照16h，光照度为1100Lux。
制备得到的掌叶覆盆子的出苗率达到75％。
对比例1
对比例1与实施例1的不同之处仅在于，所述掌叶覆盆子种子没有经过酸蚀这个步骤，其他繁殖的方法和试剂都与实施例1相同。
制备得到的掌叶覆盆子的出苗率达到5％，且出苗时间需要150天。
对比例2
对比例2与实施例1的不同之处仅在于，所述掌叶覆盆子种子没有经过赤霉素处理这个步骤，其他繁殖的方法和试剂都与实施例1相同。
制备得到的掌叶覆盆子的出苗率达到56％。
对比例3
对比例2与实施例1的不同之处仅在于，所述掌叶覆盆子种子没有经过低温沙藏处理这个步骤，其他繁殖的方法和试剂都与实施例1相同。
制备得到的掌叶覆盆子的出苗率达到43％。
综上所述，本发明条件简单，操作容易，掌叶覆盆子种子发芽快，发芽率高，超过70％，通过本发明方法可以打破种子的休眠，相对于掌叶覆盆子采挖野生资源和分株繁殖及扦插繁殖，繁殖系数较大，克服了掌叶覆盆子分株繁殖繁殖系数低和扦插繁殖病毒积累及种质衰退的缺点，受季节和地理环境因素的影响较小，繁殖各个环节技术易于控制，对环境无污染，便于产业化生产掌叶覆盆子种子繁殖。
本发明制备得到的掌叶覆盆子具有可观的经济效益，以20平方的培养室为例，每4个月为一个种苗生产周期计算，每年可以生产种苗3次，每次可以出苗10万株，每株价格为2元，每年种苗直接生产额就可达60万元；以6000株/hm2计算，可种植50hm2；种植后第二年即可结实，每公顷产药材“覆盆子”750kg，以200元/kg计算，年产值为15万元/hm2。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的工艺方法，但本发明并不局限于上述工艺步骤，即不意味着本发明必须依赖上述工艺步骤才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明所选用原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。