本发明涉及一种微生物制剂及其制备方法，具体涉及一种具防治线虫的复合微生物可湿性粉剂及其制备方法，属于农业微生物
技术领域：
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背景技术：
：近年来，由于连作面积的不断扩大，以及不科学用药，致使线虫发展蔓延速度较快，抗性增强，作物死苗率不断增加，从而造成了作物严重减产，甚至绝产，品质降低，已经严重影响了农作物生产。市场上存在多种防治线虫的菌剂，但是由于菌种单一、助剂不亲和等原因，造成了运输、储存困难，存在货架期短等弊端。技术实现要素：为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种防治线虫的复合微生物可湿性粉剂及其制备方法。为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：一种防治线虫的复合微生物可湿性粉剂，由有效成分和助剂组成，其特征在于，前述有效成分为：由保藏编号为cgmccno.13761的淡紫拟青霉发酵得到的淡紫拟青霉粉剂和由保藏编号为cgmccno.13763的草酸青霉发酵得到的草酸青霉粉剂；前述助剂为：高岭土、扩散剂nno和木质素磺酸钠。前述的防治线虫的复合微生物可湿性粉剂，其特征在于，前述淡紫拟青霉粉剂的孢子含量≥120亿/克，前述草酸青霉粉剂的孢子含量≥120亿/克。前述的防治线虫的复合微生物可湿性粉剂，其特征在于，以质量百分比计，各组分的含量如下：前述的防治线虫的复合微生物可湿性粉剂，其特征在于，制备方法如下：step1：将保藏编号为cgmccno.13761的淡紫拟青霉和保藏编号为cgmccno.13763的草酸青霉分别接种在pda平板培养基上，27℃暗培养7d，将培养好的平板作为原种；step2：将step1培养好的原种分别接种在pda液体培养基上，27℃、121rpm暗培养4d，将发酵好的液体作为种子液；step3：将麦麸加水控制湿度在20％，121℃灭菌30min，作为发酵培养基；step4：将step2培养好的种子液分别加入到step3制得的发酵培养基中，27℃静置暗培养14d；step5：将step4制得的发酵液分别烘干，粉碎，过100目筛子，得到孢子含量≥120亿/克的淡紫拟青霉粉剂和孢子含量≥120亿/克的草酸青霉粉剂；step6：将step5制得的淡紫拟青霉粉剂、草酸青霉粉剂与高岭土、扩散剂nno和木质素磺酸钠混合均匀，即得。本发明的有益之处在于：(1)本发明的复合微生物可湿性粉剂，同时含有淡紫拟青霉和草酸青霉，两种菌剂作用互补，能够有效防治线虫；选用高岭土、扩散剂nno和木质素磺酸钠作为助剂，亲和性好，保证了孢子的存活性和稳定性，延长了保存时间，进而减少了运输和储藏成本；(2)本发明的复合微生物可湿性粉剂，淡紫拟青霉可以寄生线虫卵，分泌次生代谢产物抑制线虫生长，草酸青霉在防治线虫的同时还可以防治土传病害；(3)本发明的复合微生物可湿性粉剂，草酸青霉具有解磷解钾的作用，可以促进植物生长。具体实施方式以下结合具体实施例对本发明作具体的介绍。第一部分：制备淡紫拟青霉粉剂1、筛选分离菌株将山东寿光大棚采集的土壤稀释10-5，均匀涂布在含有氨苄抗生素的pda培养基上分离培养，挑选真菌单菌落。2、鉴定菌株利用its序列进行分子鉴定，选择淡紫拟青霉菌株。3、菌株保藏我们将筛选分离得到的淡紫拟青霉于2017年03月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏编号为cgmccno.13761。4、培养原种将保藏编号为cgmccno.13761的淡紫拟青霉接种在pda平板培养基上，27℃暗培养7d，将培养好的平板作为原种。5、培养种子液将前面培养好的原种接种在pda液体培养基上，27℃、121rpm暗培养4d，将发酵好的液体作为种子液。6、制作发酵培养基将麦麸加水控制湿度在20％，121℃灭菌30min，作为发酵培养基，待用。7、发酵将前面培养好的种子液加入到前面制得的麦麸发酵培养基中，27℃静置暗培养14d。8、制成粉剂将前面制得的发酵液烘干，粉碎，过100目筛子，即得到淡紫拟青霉粉剂。经检测，淡紫拟青霉粉剂中孢子的含量为300亿/克。第二部分：制备草酸青霉粉剂1、筛选分离菌株将山东寿光大棚采集的土壤稀释10-5，均匀涂布在含有氨苄抗生素的pda培养基上分离培养，挑选真菌单菌落。2、鉴定菌株利用its序列进行分子鉴定，选择草酸青霉菌株。3、菌株保藏我们将筛选分离得到的草酸青霉于2017年03月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏编号为cgmccno.13763。4、培养原种将保藏编号为cgmccno.13763的草酸青霉接种在pda平板培养基上，27℃暗培养7d，将培养好的平板作为原种。5、培养种子液将前面培养好的原种接种在pda液体培养基上，27℃、121rpm暗培养4d，将发酵好的液体作为种子液。6、制作发酵培养基将麦麸加水控制湿度在20％，121℃灭菌30min，作为发酵培养基，待用。7、发酵将前面培养好的种子液加入到前面制得的麦麸发酵培养基中，27℃静置暗培养14d。8、制成粉剂将前面制得的发酵液烘干，粉碎，过100目筛子，即得到草酸青霉粉剂。经检测，草酸青霉粉剂中孢子的含量为400亿/克。第三部分：制备复合微生物可湿性粉剂将第一部分制得的淡紫拟青霉粉剂、第二部分制得的草酸青霉粉剂与高岭土、扩散剂nno和木质素磺酸钠混合均匀，即得本发明的复合微生物可湿性粉剂。以质量百分比计，各组分的含量如下：第四部分：复合微生物可湿性粉剂的性能测评1、线虫防治效果在山东昌乐某南瓜大棚，选取四亩地，一亩地使用本发明的复合微生物菌剂1kg，一亩地使用淡紫拟青霉粉剂1kg，一亩地使用草酸青霉粉剂1kg，这三组作为实验组，施用方法是对根部土壤进行冲施，一亩地不使用任何处理，这一组作为对照组。比较结果如下：在山东寿光某黄瓜大棚，选取四亩地，一亩地使用本发明的复合微生物菌剂1kg，一亩地使用淡紫拟青霉粉剂1kg，一亩地使用草酸青霉粉剂1kg，这三组作为实验组，施用方法是对根部土壤进行拌土施用，一亩地不使用任何处理，这一组作为对照组。比较结果如下：由此可见：在本发明的复合微生物可湿性粉剂中，淡紫拟青霉和草酸青霉这两种菌剂作用互补，能够有效防治线虫。2、粉剂的亲和性将发酵完成的淡紫拟青霉和草酸青霉按比例混合，得到孢子含量淡紫拟青霉150亿/克和草酸青霉160亿/克的复合微生物可湿性粉剂。将得到的复合微生物可湿性粉剂放于阴凉处，放置时间从2015年12月10日持续到2016年12月10日。2016年12月10日将放置的菌剂重新稀释涂板，检测活菌数，检测结果如下：活菌数淡紫拟青霉130亿/克草酸青霉140亿/克由此可见：本发明的复合微生物可湿性粉剂亲和性好，保证了孢子的存活性和稳定性，延长了保存时间。3、其他功效(1)防治土传病害试验在温室条件下(25℃)进行，将花盆装入己灭菌的土壤，待用。该试验设5个处理：处理1：先播种棉花幼苗，用立枯丝核菌菌悬液浇灌土壤，然后浇灌本发明的复合微生物可湿性粉剂的水溶剂。处理2：先播种棉花幼苗，浇灌本发明的复合微生物可湿性粉剂的水溶剂，然后浇灌立枯丝核菌菌悬液。处理3：先播种棉花幼苗，浇灌立枯丝核菌菌悬液。处理4：先播种棉花幼苗，浇灌本发明的复合微生物可湿性粉剂的水溶剂。处理5：先播种棉花幼苗，用水浇灌，作为对照。每个处理10个花盆，每盆播种一棵幼苗，试验设四次重复。检测发病率，检测结果如下：由此可见：本发明的复合微生物可湿性粉剂在防治线虫的同时还可以防治土传病害。(2)促进植物生长用本发明的复合微生物可湿性粉剂与水混合均匀，对一亩地的辣椒幼苗进行冲施，调查辣椒幼苗的长势和产量。设对照组，用清水浇灌一亩地的辣椒幼苗，调查辣椒幼苗的长势和产量。经调查，辣椒幼苗的长势和产量如下：实验组(平均值)对照组(平均值)株高48cm36cm产量0.80kg/株0.38kg/株由此可见：本发明的复合微生物可湿性粉剂在防治线虫的同时还具有促进植物生长的作用。需要说明的是，上述实施例不以任何形式限制本发明，凡采用等同替换或等效变换的方式所获得的技术方案，均落在本发明的保护范围内。当前第1页12