一种铁皮石斛的栽培方法与流程

文档序号:11391058阅读:294来源:国知局

本发明涉及一种铁皮石斛的栽培方法,特别是一种石斛碱含量高的铁皮石斛的栽培方法。



背景技术:

铁皮石斛别称铁皮兰、吊兰、云南铁皮、铁皮吊兰,是兰科石斛属多年生草本植物,铁皮石斛是石斛类药材的上品,素有“中华仙草-药中黄金”之美称,以茎入药,含有多糖、石斛碱、生物碱等有效成分,具有滋阴清热、生津益胃、润喉明目等功效,在抗肿瘤、提高人体免疫力、治疗胃肠道疾病、抗衰老、抗氧化、抗血小板聚集、降低血糖、治疗白内障等方面均有良好疗效。

现代药理学研究表明,铁皮石斛对非特异性及特异性免疫均有增强作用,在抗肿瘤、抗氧化、降低血糖以及白内障的治疗等方面,药理作用显著。其化学成分较复杂,已确定的化合物类型主要有:生物碱类、多糖类、菲类、联苄母核类,其中生物碱类、多糖类药理活性较为显著。石斛碱型倍半萜类生物碱为石斛属植物特有,其中石斛碱是最早发现,研究最多的生物碱;金钗石斛碱与非甾体类抗炎药药理作用相似,具有免疫调节、抗炎、扩张血管等作用。

随着铁皮石斛的保健功效被人们广泛的认识和接受,野生铁皮石斛已远远不能满足人们的需求。人们已经开始采用人工栽培铁皮石斛,铁皮石斛的栽培方法中,培养基是铁皮石斛赖以生存的条件,不同的培养原料和配方可对铁皮石斛的生长、产量和活性成分等产生重要的影响。现有技术中铁皮石斛用的培养基及现有栽培方法,不利于产出的铁皮石斛的品质保证。特别是不能保证铁皮石斛中石斛碱含量,使得最终得到的铁皮石斛中石斛碱含量低。



技术实现要素:

本发明的目的,是提供一种铁皮石斛的栽培方法,本发明方法培养铁皮石斛时,最终产出的铁皮石斛品质好,有效成分含量高,特别是石斛碱的含量的高。

本发明是这样实现的。

一种铁皮石斛的栽培方法,取铁皮石斛原球茎,经组织培养、移栽、管理和采收,即得。

前述的铁皮石斛的栽培方法,具体包括以下步骤:

(1)取铁皮石斛原球茎,于生根培养基中培养,直至长出1-2片真叶高度为1.5-2.5cm的铁皮石斛幼苗;

(2)取高度为1.5-2.5cm、含1-2片真叶的铁皮石斛幼苗,接种于幼苗培养基中,培养50-60天,得铁皮石斛移栽幼苗;

(3)取铁皮石斛移栽幼苗移栽到大棚中,所述大棚宽6-8米,长20-50米,硼高1.7-2.5米,棚顶覆盖塑料薄膜和70-80%遮阴度的遮阴网,棚内安装自来水管,棚四周和入口装有防虫网;棚内搭建畦底架空的种植畦,用木架作为种植畦的框架,然后铺设孔径为0.3-0.5cm的塑料平板作为基质支撑面,然后在畦面上铺设4-6cm的基质;

(4)在种植畦的基质上挖2-3cm深的小洞,取铁皮石斛移栽幼苗,用0.3-0.5%的高锰酸钾稀释液浸根消毒后,将幼苗根部放入小洞内,然后用基质盖好,栽培密度为100-200丛/平方米,每丛2-5株,丛距为5-10cm;

(5)保证大棚内温度白天保持在18-22℃,夜晚15-20℃,湿度控制在80%-90%,移栽后移栽后10-15天喷施0.4-0.6%尿素水溶液;

(6)控制基质正常含水量在30-40%,空气湿度保持60%-70%,每10-15天喷1次水,可每15-20天喷1次0.5%~0.8%磷酸二氢钾水溶液;

(7)每月用40%乐果乳油1000倍水溶液或50%马拉硫磷1000倍水溶液喷施进行叶面防治,防虫采用防虫网;

(8)采收:11月至次年4月份间进行采收,剪大留小,剪老留嫩。

前述的铁皮石斛的栽培方法,所述步骤(1)中,所述生根培养基为:在每升ms培养基中添加1-3mgnaa、维生素c2-5mg、陈皮粉末3-8mg、琼脂3-8mg和土豆泥1-5mg,混匀,即得。

前述的铁皮石斛的栽培方法,所述生根培养基为:在每升ms培养基中添加2mgnaa、维生素c3.5mg、陈皮粉末6mg、琼脂6mg和土豆泥3mg,混匀,即得。

前述的铁皮石斛的栽培方法,所述步骤(2)中,所述幼苗培养基主要由按重量份计算的玉米糊100-120份、淫羊藿粉末50-60份和当归粉末50-60份混匀后得到。

前述的铁皮石斛的栽培方法,所述幼苗培养基主要由按重量份计算的玉米糊110份、淫羊藿粉末55份和当归粉末55份混匀后得到。

前述的铁皮石斛的栽培方法,所述基质主要由按重量份计算的黄豆渣10-20份、马铃薯泥10-20份、香蕉泥10-20份、椰子汁20-30份和中药渣50-60份混匀后得到。

前述的铁皮石斛的栽培方法,所述基质主要由按重量份计算的黄豆渣15份、马铃薯泥15份、香蕉泥15份、椰子汁25份和中药渣55份混匀后得到。

前述的铁皮石斛的栽培方法,所述中药渣主要由按重量份计算的忍冬藤5-15份、丹参10-20份、肉桂5-15份、鸡内金10-20份、山楂5-15份、白芨5-15份和茵陈5-15份按下述方法制备:忍冬藤、丹参、肉桂、鸡内金、山楂、白芨和茵陈,加8-12倍量水浸泡20-30min后,煎煮2-3h,过滤,取滤渣,干燥,粉碎成粗颗粒,即得。

前述的铁皮石斛的栽培方法,所述中药渣主要由按重量份计算的忍冬藤10份、丹参15份、肉桂10份、鸡内金15份、山楂10份、白芨10份和茵陈10份按下述方法制备:忍冬藤、丹参、肉桂、鸡内金、山楂、白芨和茵陈,加10倍量水浸泡25min后,煎煮2.5h,过滤,取滤渣,干燥,粉碎成粗颗粒,即得。

申请人对本发明进行了大量的实验研究,部分实验如下:

实验例1石斛碱含量考察.

1材料与方法

1.1材料

1.1.1铁皮石斛1:按实施例1进行栽培,采收得到铁皮石斛1。

1.1.2铁皮石斛2:栽培时,培养基中不含忍冬藤、丹参、肉桂、鸡内金、山楂、白芨和茵陈,其余方法同实施例1进行栽培后,采收得到铁皮石斛2。

1.2仪器和试剂

石斛碱标准品:成都曼思特生物技术有限公司,must-12080608。ae240电子天平:瑞士meitler;hh-s数控恒温水浴锅:金华市文华科教实验仪器厂;bm510旋转蒸发仪:日本yamato公司;6890n气相色谱仪:美国安捷伦公司;uv-2450紫外分光光度计:日本岛津公司;甲醇(色谱纯):天津市科密欧化学试剂有限公司;其余试剂均为分析纯;苯酚:上海凌峰化学试剂有限公司;硫酸:上海凌峰化学试剂有限公司。

2方法

2.1供试品溶液的制备

2.1.1供试品溶液1的制备:

取本发明铁皮石斛(铁皮石斛1)样品,置烘箱中50℃,干燥,粉碎,过三号筛,取过滤后药材粉末3.34g,加200ml90%乙醇,回流1小时,过滤,倾出上清液,再加100ml90%乙醇,回流1小时,倾出上清液,合并上述2次上清液,置旋转蒸发仪浓缩,水浴锅50℃蒸干,干燥品加甲醇溶解,定容至25ml,即得供试品溶液1。

2.1.2供试品溶液2的制备

取铁皮石斛2样品,置烘箱中50℃,干燥,粉碎,过三号筛,取过滤后药材粉末3.34g,加200ml90%乙醇,回流1小时,过滤,倾出上清液,再加100ml90%乙醇,回流1小时,倾出上清液,合并上述2次上清液,置旋转蒸发仪浓缩,水浴锅50℃蒸干,干燥品加甲醇溶解,定容至25ml,即得供试品溶液2。

2.2对照品溶液的制备

精密称取石斛碱对照品50.01lmg至100ml量瓶中,加甲醇定容至刻度,摇匀,得500.1mg/l石斛碱对照品母液。50.01mg/l溶液,作为对照品溶液,备用。

2.3色谱条件

色谱柱:db-1毛细管柱(30mm×0.25mm,0.25um);程序升温:初始温度为80℃,以10℃/min的速率升温至250℃,保持5分钟;进样口温度为250℃,检测器温度为250℃,进样量10ul,理论塔板数按石斛碱计,不低于10000。

2.4标准曲线制备

精密量取对照品溶液0.2、0.5、0.8、1.0、2.0、4.0ml分别置于10ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀。按上述色谱条件测定。以峰面积积分为纵坐标,对照品进样量为横坐标进行线性回归,回归方程为a=0.7522c-0.0252,r=0.9997,表明石斛碱在0.10-2.00ug范围内具有良好的线性关系。

2.5精密度试验

精密吸取石斛碱对照品溶液l0ul,连续6次进样,记录峰面积,石斛碱峰面积的rsd为1.58%,表明仪器精密度良好。

2.6重复性试验

按上述方法制备6份供试品溶液1和供试品溶液2,按上述色谱条件进行测定。石斛碱峰面积的rsd分别为2.05%和2.06%。

2.7稳定性试验

取同一供试品溶液1,在室温下放置,分别于0、2、4、6、8、l2小时进样,记录石斛碱峰面积,rsd为2.88%。结果表明,供试品溶液1在12小时内稳定。

取同一供试品溶液2,在室温下放置,分别于0、2、4、6、8、l2小时进样,记录石斛碱峰面积,rsd为2.89%。结果表明,供试品溶液2在12小时内稳定。

2.8回收率试验

取已知含量0.46mg/g)的铁皮石斛粉末6份,每份约1.65g,精密称定。准确加入石斛碱对照品母液2ml,按上述方法制备供试品溶液1和供试品溶液2,在上述色谱条件下进行测定,计算回收率。结果平均回收率为97.1%和96.8%,rsd分别为2.5%和2.6%。

2.9样品含量测定

按上述供试品溶液1和供试品溶液2的制备方法和测定条件,分成6份,测定6份铁皮石斛1样品和6份铁皮石斛2样品中石斛碱的含量,记录结果,结果取平均值,结果见表1。

表1石斛碱含量测定结果

由表可知,本发明方法栽培得到的铁皮石斛,最终采收的铁皮石斛中石斛碱的含量较高。铁皮石斛的品质好。

与现有技术相比,本发明方法培养铁皮石斛时,最终产出的铁皮石斛品质好,有效成分含量高,特别是石斛碱的含量的高。

具体实施方式

实施例1。

一种铁皮石斛的栽培方法,具体包括以下步骤:

(1)取铁皮石斛原球茎,于生根培养基中培养,直至长出1-2片真叶高度为1.5-2.5cm的铁皮石斛幼苗;所述生根培养基为:在每升ms培养基中添加2mgnaa、维生素c3.5mg、陈皮粉末6mg、琼脂6mg和土豆泥3mg,混匀,即得;

(2)取高度为1.5-2.5cm、含1-2片真叶的铁皮石斛幼苗,接种于幼苗培养基中,培养55天,得铁皮石斛移栽幼苗;所述幼苗培养基由玉米糊110kg、淫羊藿粉末55kg和当归粉末55kg混匀后得到;

(3)取铁皮石斛移栽幼苗移栽到大棚中,所述大棚宽6-8米,长20-50米,硼高1.7-2.5米,棚顶覆盖塑料薄膜和75%遮阴度的遮阴网,棚内安装自来水管,棚四周和入口装有防虫网;棚内搭建畦底架空的种植畦,用木架作为种植畦的框架,然后铺设孔径为0.3-0.5cm的塑料平板作为基质支撑面,然后在畦面上铺设4-6cm的基质;

(4)在种植畦的基质上挖2-3cm深的小洞,取铁皮石斛移栽幼苗,用0.3-0.5%的高锰酸钾稀释液浸根消毒后,将幼苗根部放入小洞内,然后用基质盖好,栽培密度为100-200丛/平方米,每丛2-5株,丛距为5-10cm;

(5)保证大棚内温度白天保持在18-22℃,夜晚15-20℃,湿度控制在80%-90%,移栽后移栽后13天喷施0.4-0.6%尿素水溶液;

(6)控制基质正常含水量在30-40%,空气湿度保持60%-70%,每13天喷1次水,可每18天喷1次0.5%~0.8%磷酸二氢钾水溶液;

(7)每月用40%乐果乳油1000倍水溶液喷施,进行叶面防治,防虫采用防虫网;

(8)采收:11月至次年4月份间进行采收,剪大留小,剪老留嫩。

所述基质由黄豆渣15kg、马铃薯泥15kg、香蕉泥15kg、椰子汁25kg和中药渣55kg混匀后得到;所述中药渣由忍冬藤10kg、丹参15kg、肉桂10kg、鸡内金15kg、山楂10kg、白芨10kg和茵陈10kg按下述方法制备:忍冬藤、丹参、肉桂、鸡内金、山楂、白芨和茵陈,加10倍量水浸泡25min后,煎煮2.5h,过滤,取滤渣,干燥,粉碎成粗颗粒,即得。

实施例2.

(1)取铁皮石斛原球茎,于生根培养基中培养,直至长出1-2片真叶高度为1.5-2.5cm的铁皮石斛幼苗;所述生根培养基为:在每升ms培养基中添加3mgnaa、维生素c5mg、陈皮粉末8mg、琼脂8mg和土豆泥5mg,混匀,即得;

(2)取高度为1.5-2.5cm、含1-2片真叶的铁皮石斛幼苗,接种于幼苗培养基中,培养60天,得铁皮石斛移栽幼苗;所述幼苗培养基由玉米糊120kg、淫羊藿粉末60kg和当归粉末60kg混匀后得到;

(3)取铁皮石斛移栽幼苗移栽到大棚中,所述大棚宽8米,长50米,硼高2.5米,棚顶覆盖塑料薄膜和80%遮阴度的遮阴网,棚内安装自来水管,棚四周和入口装有防虫网;棚内搭建畦底架空的种植畦,用木架作为种植畦的框架,然后铺设孔径为0.3-0.5cm的塑料平板作为基质支撑面,然后在畦面上铺设4-6cm的基质;

(4)在种植畦的基质上挖2-3cm深的小洞,取铁皮石斛移栽幼苗,用0.3-0.5%的高锰酸钾稀释液浸根消毒后,将幼苗根部放入小洞内,然后用基质盖好,栽培密度为100-200丛/平方米,每丛2-5株,丛距为5-10cm;

(5)保证大棚内温度白天保持在18-22℃,夜晚15-20℃,湿度控制在80%-90%,移栽后移栽后15天喷施0.4-0.6%尿素水溶液;

(6)控制基质正常含水量在30-40%,空气湿度保持60%-70%,每15天喷1次水,可每20天喷1次0.5%~0.8%磷酸二氢钾水溶液;

(7)每月用50%马拉硫磷1000倍水溶液喷施进行叶面防治,防虫采用防虫网;

(8)采收:11月至次年4月份间进行采收,剪大留小,剪老留嫩。

所述基质由黄豆渣20kg、马铃薯泥20kg、香蕉泥20kg、椰子汁30kg和中药渣60kg混匀后得到;所述中药渣由忍冬藤15kg、丹参20kg、肉桂15kg、鸡内金20kg、山楂15kg、白芨15kg和茵陈15kg按下述方法制备:忍冬藤、丹参、肉桂、鸡内金、山楂、白芨和茵陈,加12倍量水浸泡30min后,煎煮3h,过滤,取滤渣,干燥,粉碎成粗颗粒,即得。

实施例3.

(1)取铁皮石斛原球茎,于生根培养基中培养,直至长出1-2片真叶高度为1.5-2.5cm的铁皮石斛幼苗;所述生根培养基为:在每升ms培养基中添加1mgnaa、维生素c2mg、陈皮粉末3mg、琼脂3mg和土豆泥1mg,混匀,即得;

(2)取高度为1.5-2.5cm、含1-2片真叶的铁皮石斛幼苗,接种于幼苗培养基中,培养50天,得铁皮石斛移栽幼苗;所述幼苗培养基由玉米糊100kg、淫羊藿粉末50kg和当归粉末50kg混匀后得到;

(3)取铁皮石斛移栽幼苗移栽到大棚中,所述大棚宽6米,长20米,硼高1.7米,棚顶覆盖塑料薄膜和70%遮阴度的遮阴网,棚内安装自来水管,棚四周和入口装有防虫网;棚内搭建畦底架空的种植畦,用木架作为种植畦的框架,然后铺设孔径为0.3-0.5cm的塑料平板作为基质支撑面,然后在畦面上铺设4-6cm的基质;

(4)在种植畦的基质上挖2-3cm深的小洞,取铁皮石斛移栽幼苗,用0.3-0.5%的高锰酸钾稀释液浸根消毒后,将幼苗根部放入小洞内,然后用基质盖好,栽培密度为100-200丛/平方米,每丛2-5株,丛距为5-10cm;

(5)保证大棚内温度白天保持在18-22℃,夜晚15-20℃,湿度控制在80%-90%,移栽后移栽后10天喷施0.4-0.6%尿素水溶液;

(6)控制基质正常含水量在30-40%,空气湿度保持60%-70%,每10天喷1次水,可每15天喷1次0.5%~0.8%磷酸二氢钾水溶液;

(7)每月用40%乐果乳油1000倍水溶液喷施进行叶面防治,防虫采用防虫网;

(8)采收:11月至次年4月份间进行采收,剪大留小,剪老留嫩。

所述基质由黄豆渣10kg、马铃薯泥10kg、香蕉泥10kg、椰子汁20kg和中药渣50kg混匀后得到;所述中药渣由忍冬藤5kg、丹参10kg、肉桂5kg、鸡内金10kg、山楂5kg、白芨5kg和茵陈5kg按下述方法制备:忍冬藤、丹参、肉桂、鸡内金、山楂、白芨和茵陈,加8倍量水浸泡20min后,煎煮2h,过滤,取滤渣,干燥,粉碎成粗颗粒,即得。

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