本发明涉及一种新型的骨质疏松模型的构建方法及采用的饲养配方。
背景技术：
有报道用小鼠、大鼠、兔、羊、猴等动物复制骨质疏松模型。其中大小鼠的骨哈弗氏重构不明显，12个月后骨骼疾病有较大的差异，而且大小鼠的血量较小，无法进行连续的采血和多种指标的分析。而兔、羊、猪、狗无明显的性周期和绝经表现，且对去除卵巢的组织学反应与人类不同等因素限制了其应用。恒河猴保持经常性的直立体位，生物力学与人类最为相似；体内器官系统包括免疫系统、内分泌系统，骨代谢与人类接近。恒河猴有与人类女性类似的性周期和绝经情况。利用恒河猴骨质疏松模型评价新型骨质疏松治疗药物，研究开发受体靶向药物并药物效果进行评价，这对未来治疗方案和临床应用具有重要指导意义。由于目前骨质疏松治疗药物与方法并不能有效的治愈骨质疏松，因此建立非人类灵长类骨质疏松模型为新型药物与靶向治疗提供评价具有迫切需求。
技术实现要素：
为了改善上述问题，本发明提供一种新型的骨质疏松模型的构建方法及采用的饲养配方。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
一种新型的骨质疏松模型的构建方法，对进行了双侧卵巢摘除手术的雌性恒河猴饲喂超纯水，饲喂24～28周即得骨质疏松模型。
具体包括以下步骤：
(1)取8～10岁雌性恒河猴，进行双侧卵巢摘除手术；
(2)根据恒河猴的恢复情况，给予青霉素进行抗菌消炎、盐酸曲马多进行术后镇痛、止血敏以助于手术创口愈合；
(3)术后每天饲喂超纯水，饲喂24～28周即得骨质疏松模型。
进一步地，所述雌性恒河猴进行双侧卵巢摘除手术之前和手术之后均采用低ca饮食进行饲养24～28周。
再进一步地，在进行双侧卵巢摘除手术前后，雌性恒河猴的饲养条件为：饲养温度18～26℃，相对湿度40％～70％，每小时换气次数不小于8次；喂食时间：上午08:00-09:00，喂食100g，下午14:00-15:00，喂食100g。
更进一步地，青霉素注射量为80万u/次，2次/天；盐酸曲马多的注射量为50mg/次，1次/天；止血敏的注射量0.5g/次，2次/天。
一种新型的骨质疏松模型的构建方法中采用的饲养配方，在进行双侧卵巢摘除手术前后均采用以下原料进行饲喂，按重量百分比计，小麦麸10～13％、次粉28～32％、玉米35～40％、大米蛋白粉14～18％、玉米油3～5％、预混料1～3％。
进一步地，所述小麦麸11％、次粉30％、玉米37％、大米蛋白粉16％、玉米油4％、预混料2％。
再进一步地，所述预混料中未添加ca剂。
本发明与现有技术相比，具有以下优点及有益效果：
本发明可以成功建立恒河猴骨质疏松模型，模型与临床病人相似度高，操作过程简单，易重复，可以用于啮齿类及其他动物模型无法完成的生物技术新药的评价和筛选。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明，本发明的实施方式包括但不限于下列实施例。
本发明试验研究如下：
恒河猴饲养环境条件：
饲养温度：18～26℃；相对湿度：40％～70％；
通风：每小时换气次数不小于8次，使用100％的全新风(无空气循环)；
照明时间：自动光照，每12hr明暗交替，7:30pm关灯，次日7:30am开灯。
动物笼具：700*860*2100双层不锈钢笼；饲养密度：1只/笼。
饲喂时间：上午08:00-09:00，给食100g；下午14:00-15:00，给食100g。
其他实验题在达到试验条件之前，按上述方法进行喂养，兽医密切观察实验体状态。
在进行构建骨质疏松模型时，采用低ca饮食进行喂养，然后进行去除双侧卵巢。在进行手术之前具体的喂食配方如下：按重量百分比计，小麦麸11％、次粉30％、玉米37％、大米蛋白粉16％、玉米油4％、预混料(未添加ca剂)2％。
值得说明的是，采用上述原料配置成粗蛋白19％、粗脂肪6％、粗纤维3％、ca0.09％、碳水化合物72％，且预混料中不添加任何ca剂的配合饲料。成年人每日需要的ca量为800mg/天，恒河猴的代谢速率是人的3倍，恒河猴每日需ca量约为2400mg/天。发明人是每天给食200g，根据设计的配方，试验中恒河猴ca的每日摄入量为180mg/天，远远低于需要量的2400mg。
一、试验材料与方法
1.1试验材料：8-10岁雌性恒河猴12只，无结核杆菌、寄生虫、沙门氏菌、志贺氏菌和b病毒感染；
1.2主要试剂：超纯水，其他常规药品，上述喂食配方；
1.3主要仪器：纯水机：gn-ro-80型；双能x射线骨密度仪：geprodigy；恒温动物手术台：dwv-ⅱhw；病人监护仪：geb40i。
1.4试验方法
1.4.1恒河猴l1-l4腰椎骨密度检测，在正式构建模型之前，使用双能x射线骨密度仪检测实验猴l1-l4腰椎，排除实验猴自身骨密度相关疾病的可能。
1)根据动物最近一次的体重以10mg/kg剂量的氯胺酮肌肉注射，若动物在检查过程中提前苏醒或挣扎，兽医根据情况补充麻醉，但原则上每次补充不超过首次注射剂量的1/3。动物在检查前约5min进行麻醉。
2)将恒河猴上下肢固定于检查台上，将恒河猴脊椎部位摆直。
3)启动geprodigy双能x射线骨密度仪对恒河猴l1-l4进行骨密度扫描，并记录存档。
4)一次性静脉采血针穿刺上肢静脉或下肢隐静脉，5ml真空采血管(黄头促凝管)采血5ml，抽出一次性静脉采血针，消毒棉球止血，标记，用作后期骨钙素、β-胶联降解产物(β-ctx)的检测。
5)检测完毕后，将麻醉中的实验猴转移到转移笼中，观察直至苏醒。
1.4.2双侧卵巢摘除和超纯水诱导骨质疏松模型
1)双侧卵巢摘除手术，按照20mg/kg剂量的戊巴比妥钠静脉推注麻醉动物，将手术部位的毛剃除干净，使用碘酊消毒后再使用75％酒精脱碘，消毒完毕后，铺放创巾，用手术刀将恒河猴肚脐下方2cm处沿正中线开口4～5cm，切开肌肉腹膜、暴露腹腔。将腹腔中的结肠移开后，即可看到卵巢、子宫、膀胱等组织。用镊子将1侧卵巢轻轻抬高后，使用医用pga3-0可吸收性外科缝线结扎输卵管和血管，随后用剪刀剪断，将卵巢取出。以同样方法取出另外1侧卵巢。2侧卵巢全部取出后，将伤口进行两层缝合，一层为肌肉和腹膜，采用医用pga3-0可吸收性外科缝线缝合，缝合模式采用单纯连续缝合。一层为皮肤，采用医用真丝编织线2-0缝合，缝合模式采用单纯间断缝合。手术过程中，由兽医进行动物的生命体征监护，观察动物呼吸、脉搏及麻醉状态，并使用病人监护仪监控术中动物血压，并记录。兽医根据手术过程中动物的状态，判断是否进行追加麻醉剂，以保障动物在整个手术过程中处于完全麻醉状态。
2)将恒河猴转移至饲养笼中，观察至猴苏醒。
3)兽医根据动物恢复情况，给予青霉素(80万u/次，2次/天)进行抗菌消炎、盐酸曲马多(50mg/次，1次/天)进行术后镇痛、止血敏(0.5g/次，2次/天)以助于手术创口愈合。
4)术后每天观察动物的精神状态、呼吸及伤口愈合状态，并记录。
5)术后每天饲喂超纯水和低ca饮食(按重量百分比计，小麦麸11％、次粉30％、玉米37％、大米蛋白粉16％、玉米油4％、预混料(未添加ca剂)2％)，饲喂24～28周即得骨质疏松模型。
1.4.3构建模型后对双能x光骨密度检测，确定骨密度变化程度，评估模型是否成功，试验方法同1.4.1。
通过对模型的研究和检测，先提供以下实施例：
实施例1
一种新型的骨质疏松模型的构建方法，对进行了双侧卵巢摘除手术的雌性恒河猴饲喂超纯水，饲喂24～28周即得骨质疏松模型。具体包括以下步骤：
(1)取8～10岁雌性恒河猴，进行双侧卵巢摘除手术；
(2)根据恒河猴的恢复情况，给予青霉素进行抗菌消炎、盐酸曲马多进行术后镇痛、止血敏以助于手术创口愈合；
(3)术后每天饲喂超纯水，饲喂24～28周即得骨质疏松模型。
具体地，所述雌性恒河猴进行双侧卵巢摘除手术之前和手术之后均采用低ca饮食进行饲养24～28周。
具体地，在进行双侧卵巢摘除手术前后，雌性恒河猴的饲养条件为：饲养温度18～26℃，相对湿度40％～70％，每小时换气次数不小于8次；喂食时间：上午08:00-09:00，喂食100g，下午14:00-15:00，喂食100g。
具体地，青霉素注射量为80万u/次，2次/天；盐酸曲马多的注射量为50mg/次，1次/天；止血敏的注射量0.5g/次，2次/天。
实施例2
一种新型的骨质疏松模型的构建方法中采用的饲养配方，在进行双侧卵巢摘除手术前后均采用以下原料进行饲喂，按重量百分比计，饲喂的原料为：小麦麸11％、次粉30％、玉米37％、大米蛋白粉16％、玉米油4％、预混料2％。具体地，所述预混料中未添加ca剂。
实施例3
一种新型的骨质疏松模型的构建方法中采用的饲养配方，在进行双侧卵巢摘除手术前后均采用以下原料进行饲喂，按重量百分比计，饲喂的原料为：小麦麸12％、次粉29％、玉米38％、大米蛋白粉15％、玉米油3％、预混料3％。具体地，所述预混料中未添加ca剂。
实施例4
一种新型的骨质疏松模型的构建方法中采用的饲养配方，在进行双侧卵巢摘除手术前后均采用以下原料进行饲喂，按重量百分比计，饲喂的原料为：小麦麸13％、次粉28％、玉米36％、大米蛋白粉17％、玉米油4％、预混料2％。具体地，所述预混料中未添加ca剂。
按照上述实施例，便可很好地实现本发明。