一种连续开花结果匍匐型高油酸花生品种的培育方法与流程

本发明属于花生新品种技术领域，具体涉及一种连续开花结果匍匐型高油酸花生品种的培育方法。

背景技术：

花生是我国重要的油料作物和经济作物，对调整农村产业结构，增加农民收入具有重要作用。目前我国花生品种类型分五大类，主产区所用的花生类型绝大多数为株型直立、连续开花的中间类型；因为直立型品种，结实范围小，为获得高产，只有加大种植密度，所以用种量很大，种子成本很高。

油酸是一种单价不饱和脂肪酸，亚油酸是双价不饱和脂肪酸。花生油酸和亚油酸之和占花生脂肪酸总量的80％左右，油酸多，亚油酸就少。研究已经表明，油酸含量高不但可减缓花生及其制品的氧化酸败速度，而且可降低血液中对人体健康有害的低密度胆固醇的含量，同时不影响对人体健康有益的高密度胆固醇的含量。为了降低种子成本，同时质量好，食用后对人身健康有益，培育连续开花结果、产量高、产油酸高的花生品种非常必要。

目前，花生品种选育常用的方法是选择所需的性状的亲本进行杂交，例如，申请公开号为cn104813921的专利公开了采用多粒型亲本与高产耐低温的亲本杂交，后代自交得到产量比对照增产10％的品系，得到高产多粒的花生新品种；申请公开号为cn102283098的专利公开了采用高油酸和高蛋白花生品种杂交，后代自交得到高产、高油酸高蛋白的花生品种，其中高油酸产量达到54.6％～58.2％。

技术实现要素：

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种连续开花结果匍匐型高油酸花生品种的培育方法，所述培养方法培育的花生品种具有花生产量高、油酸含量高的特点。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种连续开花结果匍匐型高油酸花生品种的培育方法，包括以下步骤：

1)交替开花结果、匍匐类型或来源于交替开花结果、匍匐型后代的亲本和连续开花结果、油酸含量在75％以上、直立类型的亲本进行杂交或反交，得到f1子代；

2)将所述步骤1)得到的f1子代自交得到f2子代，选择连续开花、匍匐型单株；

3)扩增所述步骤2)中的连续开花、匍匐型单株的δ12脂肪酸脱氢酶基因序列，选择a基因组δ12脂肪酸脱氢酶基因在448bp处碱基g突变为碱基a，同时b基因组δ12脂肪酸脱氢酶基因在442bp处有碱基a插入的单株为高油酸、连续开花、匍匐型单株；

4)将所述步骤3)中得到的高油酸、连续开花、匍匐型单株进行自交，得到f3子代，选择连续开花、匍匐型、高油酸兼顾荚果饱满、单株果多的花生单株；

5)每代自交后得到f4～f7子代，选择目标性状；所述目标性状为连续开花、高油酸，并且单株果多、荚果饱满、性状稳定一致；

6)将f7子代自交得到f8子代，从f8子代中选择产量比直立型亲本增产10％以上的单株，得到连续开花结果匍匐型高油酸花生品种。

优选的，所述步骤1)中的亲本河北高油品系，所述河北高油品系来自于粤油551与spi210555的杂交后代，所述spi210555为交替开花结果、匍匐类型的花生野生种。

优选的，所述步骤1)中连续开花结果、油酸含量为76.8％的亲本为开农17-6。

优选的，所述步骤2)、步骤4)、步骤5)和步骤6)中自交前，还包括剔除伪杂种和劣株。

优选的，所述步骤3)中a基因组扩增δ12脂肪酸脱氢酶基因的引物为fad2-1a-f和fad2-r。

优选的，b基因组扩增δ12脂肪酸脱氢酶基因的引物为fad2-1b-f和fad2-r。

优选的，所述步骤4)中每株花生单株中果的数量为60个～80个。

优选的，所述步骤5)中性状稳定包括株高、株型和生育期农艺性状。

本发明提供了一种连续开花结果匍匐型高油酸花生品种的培育方法，培育得到花生品种具有连续开花结果、匍匐型、高油酸的性状。直立型植株结果范围小，若要获得高产，必须加大密度，导致种子用量就会大，成本就高；若仅是匍匐型，而不是连续开花，虽然可以达到小密度，减少种子成本的目的，但是由于是交替开花，结果不集中，容易导致产量低，且不好收获。本发明将连续开花结果、匍匐型、高油酸的性状集中选育到花生新品种中，能够保证高产的同时保证高油酸的性状。

同时，本发明提供的培育方法得到的花生新品种，油酸产量为81.3％，较现有技术中高油酸花生品种的油酸含量提高了48.9％。本发明提供的培育方法得到的花生新品种花育917在2016年全国北方片区域试验，表现连续开花结果、匍匐株型，平均亩产荚果378.6公斤，比直立型对照花育33号的336.5公斤增产12.5％，暂定名花育9120。从同一组合选育的花育917在2017年山东高密120亩单粒稀播试验示范中，平均亩产量达到543.6公斤，比直立型高产对照品种花育33的479.4公斤增产13.4％。

附图说明

图1为实施例1中fad2a’基因在448bp处碱基情况；

图2为实施例1中fad2b’基因在442bp处突变情况。

具体实施方式

本发明提供了一种连续开花结果匍匐型高油酸花生品种的培育方法，包括以下步骤：

1)交替开花结果、匍匐类型的亲本和连续开花结果、油酸含量在75％以上、直立类型的亲本进行杂交或反交，得到f1子代；

2)将所述步骤1)得到的f1子代自交得到f2子代，选择连续开花、匍匐型单株；

3)扩增所述步骤2)中的连续开花、匍匐型单株的δ12脂肪酸脱氢酶基因序列，选择a基因组δ12脂肪酸脱氢酶基因(fad2a’基因)在448bp处碱基g突变为碱基a(如图1)，同时b基因组δ12脂肪酸脱氢酶基因(fad2b’基因)在442bp处有碱基a插入(如图2)的单株为高油酸、连续开花、匍匐型单株；

4)将所述步骤3)中得到的高油酸、连续开花、匍匐型单株进行自交，得到f3子代，选择连续开花、匍匐型、高油酸兼顾荚果饱满、单株果多的花生单株；

5)f4～f7子代分别自交，选择目标性状；所述目标性状为连续开花、高油酸，并且单株果多、荚果饱满、性状稳定一致；

6)将f7子代自交得到f8子代，从f8子代中选择产量比直立型亲本增产10％以上的单株，得到连续开花结果匍匐型高油酸花生品种。

本发明将交替开花结果、匍匐类型的亲本和连续开花结果、油酸含量在75％以上、直立类型的亲本进行杂交，得到f1子代。

本发明中，所述连续开花结果、油酸含量在75％以上、直立类型的的亲本优选为开农17-6。所述开农17-6来自开农30(连续开花、中间型)和开选01-6(交替开花，高油酸)的杂交后代。本发明对所述开农30和开选01-6的来源没有特殊限定，采用本领域所熟知的开农30和开选01-6的花生品系即可。本发明中，所述开农30和开选01-6的花生品系来自于河南省开封农业科学院。

本发明中，所述交替开花结果、匍匐型的亲本优选为河北高油品系。所述河北高油为粤油551(连续开花、珍珠豆型)和spi210555(交替开花、匍匐型)杂交后代。本发明对所述粤油551和spi210555的来源没有特殊限定，采用本领域所熟知的粤油551和spi210555的花生品系即可。本发明中，所述粤油551和spi210555的花生品系来自于广东省农业科学院作物研究所。

本发明中，所述交替开花结果、匍匐类型的亲本和连续开花结果、油酸含量在75％以上、直立类型的亲本进行正交或反交均可。

本发明中，所述交替开花结果、匍匐类型的亲本和连续开花结果、油酸含量在75％以上、直立类型的亲本的种子数优选独立不得少于60个荚果。

本发明对所述杂交的方法没有特殊限制，采用本领域技术人员所熟知的杂交方案即可。

得到f1子代后，本发明将所述f1子代自交得到f2子代，在所述f2子代中选择连续开花、匍匐型单株。

本发明中，自交前，优选还包括剔除伪杂种和劣株。

得到的f2子代中会出现四种性状的单株，具体为连续开花、直立型，交替开花、直立型，连续开花、匍匐型和交替开花、匍匐型四种类型，选择连续开花、匍匐型单株有利于得到高产且开花结果集中的子代。

得到连续开花、匍匐型单株后，本发明扩增所述连续开花、匍匐型单株的δ12脂肪酸脱氢酶基因序列，在a基因组选择δ12脂肪酸脱氢酶基因在448bp处碱基g突变为碱基a，同时在b基因组选择δ12脂肪酸脱氢酶基因在442bp处有碱基a插入的单株为高油酸、连续开花、匍匐型单株。

本发明中，扩增fad2a基因的引物为fad2-1a-f和fad2-r；扩增fad2b基因的引物为fad2-1b-f和fad2-r。所述fad2-1a-f、fad2-1b-f和fad2-r引物及操作流程参考文献：花生ahfad2-1基因与油酸/亚油酸比值的关系.花生学报,2016,45(4):20-24。

扩增得到的pcr产物进行测序，所述测序委托上海生工进行测序。将测序得到的fad2a’基因和fad2b’基因分别进行比对，选择fad2a’基因(a基因组)在448bp处碱基g突变为碱基a，同时选择fad2b’基因(b基因组)在442bp处有碱基a插入的单株。

本发明中，所述a基因组δ12脂肪酸脱氢酶基因在448bp处碱基g突变为碱基a，同时b基因组δ12脂肪酸脱氢酶基因在442bp处有碱基a插入的单株，其油酸含量75％以上。

得到的高油酸、连续开花、匍匐型单株后，本发明将所述高油酸、连续开花、匍匐型单株进行自交，得到f3子代，选择连续开花、匍匐型、高油酸兼顾荚果饱满、单株果多的花生单株。

本发明中，所述自交前，优选还包括剔除伪杂种和劣株。

本发明中，所述每株花生单株中果的数量优选为60～80个。

每代自交分别f4～f7子代，选择目标性状；所述目标性状为连续开花、高油酸，并且单株果多、荚果饱满、性状稳定一致。

本发明中，所述每代自交前，优选还包括剔除伪杂种和劣株。所述劣株是和大多数植株的农艺性状差异大，如荚果数量少、株型不一致、开花习性不一样等。

本发明中，所述性状稳定包括株高、株型和生育期农艺性状。

得到f7子代后，本发明将f7子代自交得到f8子代，从f8子代中选择产量比直立型亲本增产10％以上的单株，得到连续开花结果匍匐型高油酸花生品种。f7子代自交前优选还包括剔除伪杂种和劣株。所述劣株是和大多数植株的农艺性状差异大，如荚果数量少、株型不一致、开花习性不一样等。

下面结合实施例对本发明提供的一种连续开花结果匍匐型高油酸花生品种的培育方法进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1

2008年以开农17-6(连续开花、中间型)---来自开农30(连续开花、中间型)和开选01-6(交替开花，高油酸)的杂交后代为母本；河北高油(连续开花、中间型)---来自《粤油551(连续开花、珍珠豆型)和spi210555(交替开花、匍匐型)》杂交后代为父本复合杂交，经系统选育而成的高产优质连续开花结果、匍匐型高油酸花生新品种。其选育过程如下：

2008年春f0代开农17-6x河北高油。山东莱西

2008年冬f1代剔除伪杂种和劣株，混收海南省三亚加代2009年春f2代选择连续开花、匍匐型单株，并对其进行δ12脂肪酸脱氢酶基因(fad2)序列比对。凡同时存在fad2a’基因在448bp处碱基g突变为a(图1)和fad2b’基因在442bp处有碱基a插入(图2)的单株就是高油酸花生，作为f3代材料进行选择。山东莱西

2009年冬f3代对f2代入选的材料选择连续开花、匍匐型、果多、果饱等单株。山东莱西

2010年f4代重复f3代的选择技术。山东莱西

2011年f5代重复f3代的选择技术，剔除劣株，对稳定一致的单株进行混收。山东莱西

2012年f6代品系产量比较。剔除劣株。山东莱西

2013年f7代品系产量比较。主要调查小区产量，农艺性状；抗性。山东莱西

2014年f8代品种比较试验。主要调查小区产量，农艺性状。山东莱西

2015年f9代品种比较试验。主要调查小区产量；测定油酸含量。山东青岛、莱西

2016年全国北方片区域试验，表现连续开花结果、匍匐株型，油酸含量81.3％；平均亩产荚果378.6公斤，比直立型对照花育33号的336.5公斤增产12.5％，选育得到的花生新品种暂定名为花育9120。

从同一组合选育的花育917在2017年山东高密120亩单粒稀播试验示范中，平均亩产量达到543.6公斤，比直立型高产对照品种花育33的479.4公斤增产13.4％。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。