一种白花蛇舌草组培工艺的制作方法

文档序号:14394780阅读:340来源:国知局

本发明涉及白花蛇舌草组织培养育苗技术领域,尤其涉及一种白花蛇舌草组培工艺。



背景技术:

白花蛇舌草(hedyotisdiffusawilld)为茜草科一年生披散草本,高15-50cm,根细长,分枝,白花。茎略带方形或扁圆柱形,光滑无毛,从基部发出多分枝,花期春季,种子细小黄棕色;一年可收两季,春种8月收,秋种11月收。生长在海拔800米的地区,多生长在水田、田埂和湿润的旷地。主要分布在国内的福建、广东、香港、广西、海南、安徽、云南等地区;其味苦、淡,性寒,主要功效是清热解毒、消肿散结、利尿除湿,毒蛇咬伤等症,近年来发现白花蛇舌草对癌症和肝炎有较好的作用,临床用量较大。

但是,白花蛇舌草多为野生,家种很少,野生白花蛇舌草伪品较多,有水线草、纤花耳草、漆姑草、蚤缀、粟米草,伪品在新鲜时可通过细小的植株特征辨别,但干品和种子很难区分真伪。

而传统的白花蛇草育种方法是将白花蛇舌草种子直接播种到大田,这样的播种存在以下问题:

(1)种子质地较轻,播撒不均匀,较密的地方会影响长势;

(2)大田杂草多,混有伪品品种容易掺进白花蛇舌药材或种子;

(3)大田受温度,干湿度的影响,萌发率和成活率偏低,生长速度慢;

(4)和组织培养相比,没有种苗增殖阶段。



技术实现要素:

为了克服现有技术的不足,本发明的目的之一在于提供一种白花蛇舌草组培工艺,用经鉴定为正品的白花蛇舌草种植留种的种子进行组织培养,得到纯净的种苗后移栽在无白花蛇舌草伪品种子锯末基质上种植,可以得到正品白花蛇舌草和纯净种子,将获取的纯净种子进行人工种植,即得到正品白花蛇舌草。

本发明的目的之一采用如下技术方案实现:

一种白花蛇舌草组培工艺,包括:

外植体的选择与消毒步骤:取晒干去掉种壳的白花蛇舌草种子,进行消毒,得到无菌种子;

播种步骤:将所述无菌种子播种到第一1/2ms培养基中,消毒瓶盖后封好盖子,然后转到培养室中培养,种子萌发后,继续培养至种苗长2-3cm,获取一级母瓶;

继代培养步骤:将所述一级母瓶转到第二1/2ms培养基中,种苗长至5-6cm时,获取二级母瓶;

生根培养步骤:所述二级母瓶继续在所述第二1/2ms培养基中生长65-75天后,转到ms培养基中培养20-45天,获取生根瓶苗;

炼苗步骤:所述生根瓶苗在培养室中继续培养后,移到室外环境,接着用多菌灵稀释液浸泡根部,得到移栽苗;

驯化移栽步骤:将所述移栽苗移栽到基质中进行驯化,即成。

进一步地,在所述外植体的选择与消毒步骤中:选择生长4-5个月的白花蛇舌草植株,在7月下旬至8月上旬,整株采摘靠植株根部的种子,切除顶端不成熟部分,将种子成熟部分的茎杆一起晒干后,碾压出种子,去掉蜡质种壳,筛除杂质和灰份,然后放到洁净烧杯并移至接种室,在无菌操作台上进行消毒。

进一步地,在所述外植体的选择与消毒步骤中:进行消毒时,用75%的医用酒精浸泡30-60s,浸泡期间用镊子不断搅拌,接着用无菌水冲洗3-4次;最后用浓度为45-50%的次氯酸钠消毒6-8min,无菌水冲洗4-5次,得到无菌种子。

进一步地,在所述播种步骤,所述第一1/2ms培养基的成分如下:硝酸钾1890-1900mg/l,硝酸铵1640-1650mg/l,二水氯化钙440-445mg/l,七水硫酸镁370-375mg/l,磷酸二氢钾160-170mg/l,碘化钾0.8-0.83mg/l,硼酸6.0-6.2mg/l,四水硫酸锰22.3-23.0mg/l,七水硫酸锌8.6-9.0mg/l,钼酸钠0.2-0.25mg/l,五水硫酸铜0.025-0.028mg/l,氯化钴0.028-0.03mg/l,硫酸亚铁27.5-29mg/l,乙二胺四乙酸二钠23-25mg/l,肌醇96-100mg/l,烟酸0.2-0.3mg/l,盐酸吡哆醇0.25-0.35mg/l,盐酸硫胺素0.2-0.3mg/l,甘氨酸0.8-0.9mg/l,质量浓度为2%的蔗糖,琼脂粉4.8g/l,用酸碱指示剂将所述第一1/2ms培养基的ph调至5.8-6.0。

进一步地,在所述播种步骤中:将所述无菌种子用灭菌后的勺子播种到第一1/2ms培养基上,消毒瓶盖后封好盖子,然后转到培养室中培养,培养室的温度为24-26℃,光照强度为2000-2500lx,光照时间为10-12小时/天,种子萌发后,继续培养至种苗长2-3cm,获取一级母瓶。

进一步地,在所述继代培养步骤中:将所述一级母瓶在无菌操作台上转到第二1/2ms培养基后,在温度为24-26℃,光照强度为2000-2500lx,光照时间为10-12小时/天的条件下培养30-40天;所述第二1/2ms培养基的成分如下:硝酸钾1890-1900mg/l,硝酸铵1640-1650mg/l,二水氯化钙440-445mg/l,七水硫酸镁370-375mg/l,磷酸二氢钾160-170mg/l,碘化钾0.8-0.83mg/l,硼酸6.0-6.2mg/l,四水硫酸锰22.3-23.0mg/l,七水硫酸锌8.6-9.0mg/l,钼酸钠0.2-0.25mg/l,五水硫酸铜0.025-0.028mg/l,氯化钴0.028-0.03mg/l,硫酸亚铁27.5-29mg/l,乙二胺四乙酸二钠23-25mg/l,肌醇96-100mg/l,烟酸0.2-0.3mg/l,盐酸吡哆醇0.25-0.35mg/l,盐酸硫胺素0.2-0.3mg/l,甘氨酸0.8-0.9mg/l,吲哚乙酸0.2mg/l,6苄基腺嘌呤1.5mg/l,质量浓度为3%的蔗糖,琼脂粉4.8g/l,土豆汁35g/l,活性碳粉0.3g/l,用酸碱指示剂将所述第二1/2ms培养基的ph调至5.8-6.0。

进一步地,在所述生根培养步骤中:将所述二级母瓶在无菌操作台上转至ms培养基中;所述ms培养基的成分如下:硝酸钾3790-3800mg/l,硝酸铵3290-3300mg/l,二水氯化钙870-880mg/l,七水硫酸镁730-740mg/l,磷酸二氢钾330-340mg/l,碘化钾1.62-1.66mg/l,硼酸12.0-12.44mg/l,四水硫酸锰44.6-46mg/l,七水硫酸锌17.2-18mg/l,钼酸钠0.4-0.5mg/l,五水硫酸铜0.05-0.06mg/l,氯化钴0.05-0.06mg/l,硫酸亚铁55-58mg/l,乙二胺四乙酸二钠46-50mg/l,肌醇192-200mg/l,烟酸0.4-0.6mg/l,盐酸吡哆醇0.5-0.7mg/l,盐酸硫胺素0.4-0.6mg/l,甘氨酸1.6-1.8mg/l,吲哚乙酸1.6mg/l,6苄基腺嘌呤0.4mg/l,质量浓度为3%的蔗糖,琼脂粉4.8g/l,土豆汁35g/l,香蕉汁25g/l,活性碳粉0.3g/l,用酸碱指示剂将所述ms培养基的ph调至5.8-6.0。

进一步地,在所述炼苗步骤中:所述生根瓶苗在培养室培养65-75天后,移到室外环境中放置15-20天。

进一步地,所述生根瓶苗移到室外环境中放置15-20天后,打开瓶盖放置3-5天,将苗倒出,用稀释了800-1000倍的多菌灵稀释液浸泡白花蛇舌草瓶苗根部5-10min后,洗净阴干水分,得到移栽苗。

进一步地,在所述驯化移栽步骤中:所述基质由杀菌剂和锯末混合均匀而成,杀菌剂和锯末的质量比为1:20。

相比现有技术,本发明的有益效果在于:

(1)本发明所提供的白花蛇舌草组培工艺,用白花蛇舌草种子组培繁殖时细节工作注意,确保后续的操作顺利,第一是采收成熟度较好的种子;第二是种子消毒彻底,消毒彻底才能保证种子播种后培养基不感染,但是白花蛇舌草种子不宜用升汞消毒,不论时间长短,升汞都会将种子杀死导致不萌发,用刺激性较小的次氯酸钠消毒后种子的萌发率在95%左右。

(2)本发明所提供的白花蛇舌草组培工艺,在组织培养播种培养基采用1/2ms培养基,只添加蔗糖和琼脂粉;第三阶段都采用ms培养基,在培养基里添加一定浓度的植物生长激素;第一阶段若采用1/2ms和ms培养基对比,对种苗的萌发生长无影响,采用1/2ms培养基可以节约原料;第三阶段是白花蛇舌草的生根阶段,需要用ms培养基才能为其生长提供充足的营养;利用植物组织培养技术,前期在培养基上生长,保证白花蛇舌草育种的纯正,生长过程中不受外界伪品的干扰,后期移栽在无杂质的基质中,不受混淆平品种的干扰,保证了白花蛇舌草品种纯净度。

具体实施方式

下面,结合具体实施方式,对本发明做进一步描述,需要说明的是,在不相冲突的前提下,以下描述的各实施例之间或各技术特征之间可以任意组合形成新的实施例。

一种白花蛇舌草组培工艺,包括:

外植体的选择与消毒步骤:取晒干去掉种壳的白花蛇舌草种子,进行消毒,得到无菌种子;

播种步骤:将无菌种子播种到第一1/2ms培养基中,消毒瓶盖后封好盖子,然后转到培养室中培养,种子萌发后,继续培养至种苗长2-3cm,获取一级母瓶;

继代培养步骤:将一级母瓶转到第二1/2ms培养基中,种苗长至5-6cm时,获取二级母瓶;

生根培养步骤:二级母瓶继续在第二1/2ms培养基中生长65-75天后,转到ms培养基中培养20-45天,获取生根瓶苗;

炼苗步骤:生根瓶苗在培养室中继续培养后,移到室外环境,接着用多菌灵稀释液浸泡根部,得到移栽苗;

驯化移栽步骤:将移栽苗移栽到基质中进行驯化,即成。

作为优选的实施方式,在外植体的选择与消毒步骤中:选择生长4-5个月的白花蛇舌草植株,在7月下旬至8月上旬,整株采摘靠植株根部的种子(白花蛇舌草春播秋收,由根部到顶端边开花边结果,所以收集种子的时候尽量采摘靠根部的以保证种子的成熟度),切除顶端不成熟部分,将种子成熟部分的茎杆一起晒干后,碾压出种子(用包纱布的棒槌碾压),去掉蜡质种壳,筛除杂质和灰份,然后放到洁净烧杯并移至接种室,在无菌操作台上进行消毒;首先用75%的医用酒精浸泡30-60s(75%酒精相对其它消毒试剂消毒更彻底,时间更短),浸泡期间用镊子不断搅拌,接着用无菌水冲洗3-4次;最后用浓度为45-50%的次氯酸钠消毒6-8min,无菌水冲洗4-5次,得到无菌种子,放到超净工作台上的无菌盘里备用。

作为优选的实施方式,在播种步骤中:将无菌种子用高温灭菌后的勺子播种到第一1/2ms培养基上,消毒瓶盖后封好盖子,然后转到培养室中培养,培养室的温度为24-26℃,光照强度为2000-2500lx,光照时间为10-12小时/天,种子萌发后(7-10天左右种子开始萌发),继续培养至种苗长2-3cm(生长20天左右),获取一级母瓶;第一1/2ms培养基的成分如下:硝酸钾1890-1900mg/l,硝酸铵1640-1650mg/l,二水氯化钙440-445mg/l,七水硫酸镁370-375mg/l,磷酸二氢钾160-170mg/l,碘化钾0.8-0.83mg/l,硼酸6.0-6.2mg/l,四水硫酸锰22.3-23.0mg/l,七水硫酸锌8.6-9.0mg/l,钼酸钠0.2-0.25mg/l,五水硫酸铜0.025-0.028mg/l,氯化钴0.028-0.03mg/l,硫酸亚铁27.5-29mg/l,乙二胺四乙酸二钠23-25mg/l,肌醇96-100mg/l,烟酸0.2-0.3mg/l,盐酸吡哆醇0.25-0.35mg/l,盐酸硫胺素0.2-0.3mg/l,甘氨酸0.8-0.9mg/l,质量浓度为2%的蔗糖,琼脂粉4.8g/l,用酸碱指示剂将第一1/2ms培养基的ph调至5.8-6.0。

作为优选的实施方式,在继代培养步骤中:将一级母瓶在无菌操作台上转到第二1/2ms培养基后,在温度为24-26℃,光照强度为2000-2500lx,光照时间为10-12小时/天的条件下培养30-40天;第二1/2ms培养基的成分如下:硝酸钾1890-1900mg/l,硝酸铵1640-1650mg/l,二水氯化钙440-445mg/l,七水硫酸镁370-375mg/l,磷酸二氢钾160-170mg/l,碘化钾0.8-0.83mg/l,硼酸6.0-6.2mg/l,四水硫酸锰22.3-23.0mg/l,七水硫酸锌8.6-9.0mg/l,钼酸钠0.2-0.25mg/l,五水硫酸铜0.025-0.028mg/l,氯化钴0.028-0.03mg/l,硫酸亚铁27.5-29mg/l,乙二胺四乙酸二钠23-25mg/l,肌醇96-100mg/l,烟酸0.2-0.3mg/l,盐酸吡哆醇0.25-0.35mg/l,盐酸硫胺素0.2-0.3mg/l,甘氨酸0.8-0.9mg/l,吲哚乙酸0.2mg/l,6苄基腺嘌呤1.5mg/l,质量浓度为3%的蔗糖,琼脂粉4.8g/l,土豆汁35g/l,活性碳粉0.3g/l,用酸碱指示剂将第二1/2ms培养基的ph调至5.8-6.0。

作为优选的实施方式,在生根培养步骤中:将二级母瓶在无菌操作台上转至ms培养基中;ms培养基的成分如下:硝酸钾3790-3800mg/l,硝酸铵3290-3300mg/l,二水氯化钙870-880mg/l,七水硫酸镁730-740mg/l,磷酸二氢钾330-340mg/l,碘化钾1.62-1.66mg/l,硼酸12.0-12.44mg/l,四水硫酸锰44.6-46mg/l,七水硫酸锌17.2-18mg/l,钼酸钠0.4-0.5mg/l,五水硫酸铜0.05-0.06mg/l,氯化钴0.05-0.06mg/l,硫酸亚铁55-58mg/l,乙二胺四乙酸二钠46-50mg/l,肌醇192-200mg/l,烟酸0.4-0.6mg/l,盐酸吡哆醇0.5-0.7mg/l,盐酸硫胺素0.4-0.6mg/l,甘氨酸1.6-1.8mg/l,吲哚乙酸1.6mg/l,6苄基腺嘌呤0.4mg/l,质量浓度为3%的蔗糖,琼脂粉4.8g/l,土豆汁35g/l,香蕉汁25g/l,活性碳粉0.3g/l,用酸碱指示剂将ms培养基的ph调至5.8-6.0。

作为优选的实施方式,在炼苗步骤中:生根瓶苗在培养室培养65-75天后,生根良好,移到室外环境中放置15-20天(避免强光直射);接着打开瓶盖放置3-5天,将苗倒出并洗净培养基,用稀释了800-1000倍的多菌灵稀释液浸泡白花蛇舌草瓶苗根部5-10min后,洗净阴干水分,得到移栽苗。

作为优选的实施方式,在驯化移栽步骤中:基质由杀菌剂和锯末混合均匀而成,杀菌剂和锯末的质量比为1:20。

本发明实施例所提供的白花蛇舌草组培工艺,用白花蛇舌草种子组培繁殖时需要注意的细节第一是采收成熟度较好的种子;第二是种子消毒彻底,消毒彻底才能保证种子播种后培养基不感染,但是白花蛇舌草种子不宜用升汞消毒,不论时间长短,升汞都会将种子杀死导致不萌发,用刺激性较小的次氯酸钠消毒后种子的萌发率在95%左右。在组织培养播种培养基采用1/2ms培养基,只添加蔗糖和琼脂粉、第三阶段都采用ms培养基,在培养基里添加一定浓度的植物生长激素;第一阶段1/2ms和ms培养基对比,对种苗的萌发生长无影响,采用1/2ms培养基可以节约原料;第三阶段是白花蛇舌草的生根阶段,需要用ms培养基才能为其生长提供充足的营养;利用植物组织培养技术,前期在培养基上生长,保证白花蛇舌草育种的纯正,生长过程中不受外界伪品的干扰,后期移栽在无杂质的基质中,不受混淆平品种的干扰,保证了白花蛇舌草品种纯净度。

以下是本发明具体的实施例,在下述实施例中所采用的原材料、设备等除特殊限定外均可以通过购买方式获得。

实施例1:

一种白花蛇舌草组培工艺,包括:

外植体的选择与消毒步骤:选择生长4-5个月的白花蛇舌草植株,在7月下旬,整株采摘靠植株根部的种子(白花蛇舌草春播秋收,由根部到顶端边开花边结果,所以收集种子的时候尽量采摘靠根部的以保证种子的成熟度),切除顶端不成熟部分,将种子成熟部分的茎杆一起晒干后,碾压出种子(用包纱布的棒槌碾压),去掉蜡质种壳,筛除杂质和灰份,然后放到洁净烧杯并移至接种室,在无菌操作台上进行消毒;首先用75%的医用酒精浸泡30s(75%酒精相对其它消毒试剂消毒更彻底,时间更短),浸泡期间用镊子不断搅拌,接着用无菌水冲洗4次;最后用浓度为45%的次氯酸钠消毒6min,无菌水冲洗4次,得到无菌种子,放到超净工作台上的无菌盘里备用;

播种步骤:将无菌种子用高温灭菌后的勺子播种到第一1/2ms培养基上,消毒瓶盖后封好盖子,然后转到培养室中培养,培养室的温度为24-26℃,光照强度为2000-2500lx,光照时间为10小时/天,种子萌发后(7-10天左右种子开始萌发),继续培养至种苗长2-3cm(生长20天左右),获取一级母瓶;第一1/2ms培养基的成分如下:硝酸钾1890mg/l,硝酸铵1640mg/l,二水氯化钙440mg/l,七水硫酸镁370mg/l,磷酸二氢钾160mg/l,碘化钾0.8mg/l,硼酸6.0mg/l,四水硫酸锰22.3mg/l,七水硫酸锌8.6mg/l,钼酸钠0.2mg/l,五水硫酸铜0.025mg/l,氯化钴0.028mg/l,硫酸亚铁27.5mg/l,乙二胺四乙酸二钠23mg/l,肌醇96mg/l,烟酸0.2mg/l,盐酸吡哆醇0.25mg/l,盐酸硫胺素0.2mg/l,甘氨酸0.8mg/l,质量浓度为2%的蔗糖,琼脂粉4.8g/l,用酸碱指示剂将第一1/2ms培养基的ph调至5.8;

继代培养步骤:将一级母瓶在无菌操作台上转到第二1/2ms培养基后,在温度为24-26℃,光照强度为2000-2500lx,光照时间为12小时/天的条件下培养30天;第二1/2ms培养基的成分如下:硝酸钾1890mg/l,硝酸铵1640mg/l,二水氯化钙440mg/l,七水硫酸镁370mg/l,磷酸二氢钾160mg/l,碘化钾0.8mg/l,硼酸6.0mg/l,四水硫酸锰22.3mg/l,七水硫酸锌8.6mg/l,钼酸钠0.2mg/l,五水硫酸铜0.025mg/l,氯化钴0.028mg/l,硫酸亚铁27.5mg/l,乙二胺四乙酸二钠23mg/l,肌醇96mg/l,烟酸0.2mg/l,盐酸吡哆醇0.25mg/l,盐酸硫胺素0.2mg/l,甘氨酸0.8mg/l,吲哚乙酸0.2mg/l,6苄基腺嘌呤1.5mg/l,质量浓度为3%的蔗糖,琼脂粉4.8g/l,土豆汁35g/l,活性碳粉0.3g/l,用酸碱指示剂将第二1/2ms培养基的ph调至6.0;

生根培养步骤:将二级母瓶在无菌操作台上转至ms培养基中;ms培养基的成分如下:硝酸钾3790mg/l,硝酸铵3290mg/l,二水氯化钙870mg/l,七水硫酸镁730mg/l,磷酸二氢钾330mg/l,碘化钾1.62mg/l,硼酸12.0mg/l,四水硫酸锰44.6mg/l,七水硫酸锌17.2mg/l,钼酸钠0.4mg/l,五水硫酸铜0.05mg/l,氯化钴0.05mg/l,硫酸亚铁55mg/l,乙二胺四乙酸二钠46mg/l,肌醇192mg/l,烟酸0.4mg/l,盐酸吡哆醇0.5mg/l,盐酸硫胺素0.4mg/l,甘氨酸1.6mg/l,吲哚乙酸1.6mg/l,6苄基腺嘌呤0.4mg/l,质量浓度为3%的蔗糖,琼脂粉4.8g/l,土豆汁35g/l,香蕉汁25g/l,活性碳粉0.3g/l,用酸碱指示剂将ms培养基的ph调至6.0;

炼苗步骤:生根瓶苗在培养室培养70天后,生根良好,移到室外环境中放置15天(避免强光直射);接着打开瓶盖放置3天,将苗倒出并洗净培养基,用稀释了800倍的多菌灵稀释液浸泡白花蛇舌草瓶苗根部5min后,洗净阴干水分,得到移栽苗;

驯化移栽步骤:将移栽苗移栽到基质中进行驯化,基质由杀菌剂和锯末混合均匀而成,杀菌剂和锯末的质量比为1:20。

实施例2:

实施例2与实施例1的不同之处在于:在外植体的选择与消毒步骤中,选择生长4-5个月的白花蛇舌草植株,在8月上旬,整株采摘靠植株根部的种子,切除顶端不成熟部分,将种子成熟部分的茎杆一起晒干后,碾压出种子,去掉蜡质种壳,筛除杂质和灰份,然后放到洁净烧杯并移至接种室,在无菌操作台上进行消毒;首先用75%的医用酒精浸泡60s,浸泡期间用镊子不断搅拌,接着用无菌水冲洗3次;最后用浓度为45%的次氯酸钠消毒8min,无菌水冲洗5次,得到无菌种子,放到超净工作台上的无菌盘里备用。

其它与具体实施例1相同。

实施例3:

实施例3与实施例1的不同之处在于:

在播种步骤中:将无菌种子用高温灭菌后的勺子播种到第一1/2ms培养基上,消毒瓶盖后封好盖子,然后转到培养室中培养,培养室的温度为24-26℃,光照强度为2000-2500lx,光照时间为12小时/天,种子萌发后,继续培养至种苗长2-3cm,获取一级母瓶;第一1/2ms培养基的成分如下:硝酸钾1900mg/l,硝酸铵1650mg/l,二水氯化钙445mg/l,七水硫酸镁375mg/l,磷酸二氢钾170mg/l,碘化钾0.83mg/l,硼酸6.2mg/l,四水硫酸锰23.0mg/l,七水硫酸锌9.0mg/l,钼酸钠0.25mg/l,五水硫酸铜0.028mg/l,氯化钴0.03mg/l,硫酸亚铁29mg/l,乙二胺四乙酸二钠25mg/l,肌醇100mg/l,烟酸0.3mg/l,盐酸吡哆醇0.35mg/l,盐酸硫胺素0.3mg/l,甘氨酸0.9mg/l,质量浓度为2%的蔗糖,琼脂粉4.8g/l,用酸碱指示剂将第一1/2ms培养基的ph调至6.0。

其它与具体实施例1相同。

实施例4:

实施例4与实施例1的不同之处在于:

在继代培养步骤中:将一级母瓶在无菌操作台上转到第二1/2ms培养基后,在温度为24-26℃,光照强度为2000-2500lx,光照时间为10小时/天的条件下培养40天;第二1/2ms培养基的成分如下:硝酸钾1900mg/l,硝酸铵1650mg/l,二水氯化钙445mg/l,七水硫酸镁375mg/l,磷酸二氢钾170mg/l,碘化钾0.83mg/l,硼酸6.2mg/l,四水硫酸锰23.0mg/l,七水硫酸锌9.0mg/l,钼酸钠0.25mg/l,五水硫酸铜0.028mg/l,氯化钴0.03mg/l,硫酸亚铁29mg/l,乙二胺四乙酸二钠25mg/l,肌醇100mg/l,烟酸0.3mg/l,盐酸吡哆醇0.35mg/l,盐酸硫胺素0.3mg/l,甘氨酸0.9mg/l,吲哚乙酸0.2mg/l,6苄基腺嘌呤1.5mg/l,质量浓度为3%的蔗糖,琼脂粉4.8g/l,土豆汁35g/l,活性碳粉0.3g/l,用酸碱指示剂将第二1/2ms培养基的ph调至5.8。

其它与具体实施例1相同。

实施例5:

实施例5与实施例1的不同之处在于:

在生根培养步骤中:将二级母瓶在无菌操作台上转至ms培养基中;ms培养基的成分如下:硝酸钾3800mg/l,硝酸铵3300mg/l,二水氯化钙880mg/l,七水硫酸镁740mg/l,磷酸二氢钾340mg/l,碘化钾1.66mg/l,硼酸12.44mg/l,四水硫酸锰46mg/l,七水硫酸锌18mg/l,钼酸钠0.5mg/l,五水硫酸铜0.06mg/l,氯化钴0.06mg/l,硫酸亚铁58mg/l,乙二胺四乙酸二钠50mg/l,肌醇200mg/l,烟酸0.6mg/l,盐酸吡哆醇0.7mg/l,盐酸硫胺素0.6mg/l,甘氨酸1.8mg/l,吲哚乙酸1.6mg/l,6苄基腺嘌呤0.4mg/l,质量浓度为3%的蔗糖,琼脂粉4.8g/l,土豆汁35g/l,香蕉汁25g/l,活性碳粉0.3g/l,用酸碱指示剂将ms培养基的ph调至5.8。

其它与具体实施例1相同。

实施例6:

实施例6与实施例1的不同之处在于:

在炼苗步骤中:生根瓶苗在培养室培养65天后,生根良好,移到室外环境中放置20天;接着打开瓶盖放置5天,将苗倒出并洗净培养基,用稀释了1000倍的多菌灵稀释液浸泡白花蛇舌草瓶苗根部10min后,洗净阴干水分,得到移栽苗。

其它与具体实施例1相同。

效果评价及性能检测

取纯种的白花蛇舌草种子,分别采取传统直播方式进行育苗,和采用实施例组培工艺进行育苗。对试验结果进行记录,结果如下表1所示。

表1白花蛇舌草种子进行传统直播和培培育苗的试验结果记录表

从表1的记录可得,白花蛇舌草种子采用实施例1-6的初代培养基进行组培育苗,萌发时间大大小于传统直播方式育苗方式,而萌发率和成活率均大大高于传统直播方式,且实施例1-6的伪品混淆率均为0%。另外,白花蛇舌草种苗采用实施例1-6的继代培养基进行组培育苗,生长到3-5cm需要的时间大大小于传统直播方式育苗方式,仅为传统直播育苗方式的一半;而增殖率和成活率均大大高于传统直播方式,且实施例1-6的伪品混淆率均为0%。并且,白花蛇舌草种苗采用实施例1-6的生根培养基进行组培育苗,长出根系需要的时间大大小于传统直播方式育苗方式,仅为传统直播育苗方式的一半左右;而结果率和种植时间均大大高于传统直播方式,且实施例1-6的伪品混淆率均为0%。实施例1-6的生根培养基能够有效保证白花蛇舌草品种的纯正。

上述实施方式仅为本发明的优选实施方式,不能以此来限定本发明保护的范围,本领域的技术人员在本发明的基础上所做的任何非实质性的变化及替换均属于本发明所要求保护的范围。

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