本发明涉及具有抗真菌活性的组合物。特别地，本发明涉及含有从十字花科(brassicaceae)和/或蝶形花科(fabaceae)获得的植物材料的组合物用于减少或抑制真菌生物的生长的用途。
发明背景
不同环境中的非预期的微生物生长通常是不合需要的，因为这可能导致腐败，降解和/或疾病。
真菌和霉菌在湿度太高的房屋和建筑物中是持续存在的问题，并且其存在可能导致受感染的房屋/建筑物的老化并导致人或动物感染各种疾病。可能难以检测房屋/建筑物中的霉菌，因为它们可能隐藏在建筑结构中，但它们仍然构成对建筑结构的老化和/或人或动物的疾病的严重威胁。例如霉菌的病理挑战是霉菌将孢子，菌丝碎片，微粒和挥发性化合物(mvoc)释放到空气中。房屋或建筑物中存在霉菌和孢子可能导致人们感到疲劳，头痛，呼吸困难和其他过敏症状。然而，也可能出现永久性损害，例如哮喘和持续性过敏。
真菌感染，例如霉菌感染，的另一个挑战是食品或饲料产品的感染和腐败。为了稳定食品或饲料产品，避免或推迟腐败，食品或饲料产品可以经历各种防腐处理，其中一些自古以来就已为人所知。提供各种防腐处理主要是为了抑制微生物生长，避免脂质氧化，或避免产品中的酶活性。
传统使用的防腐方法包括干燥，冷却，冷冻，煮沸，加热，加盐，加糖，烟熏，酸渍，碱渍，制成罐头，制成胶冻，装罐，掩埋，发酵，巴氏杀菌，真空包装，气调，辐照和人工食品添加剂。
传统使用的防腐方法影响感觉外观(例如气味，味道，外观，一致性等)，耗时或降低食品或饲料产品的营养益处，这是消费者并不总是希望的。
因此，工业上需要减少或限制真菌生长和发育的新方法。特别需要用于减少真菌生长的新方法和组合物，该方法快速，简便，廉价，并维持或甚至改善产品的营养价值，同时限制对感觉外观的影响，从而避免现有技术组合物和方法的一些缺点。
技术实现要素：
因此，本发明的目的涉及减少或限制真菌生长和发育的组合物和方法。
特别地，本发明的一个目的是提供减少真菌生长的组合物和方法，其解决了现有技术的上述问题，例如不希望的感觉外观(例如气味，味道，外观，一致性等)，食品或饲料产品的处理时间长或营养益处降低。
因此，本发明的一个方面涉及含有从十字花科(brassicaceae)和/或蝶形花科(fabaceae)获得的植物材料的组合物用于抑制或减少真菌生物的生长的用途。
本发明的另一方面涉及抗真菌组合物，其含有获自十字花科(brassicaceae)和/或蝶形花科(fabaceae)的植物材料。
本发明的又一方面涉及用于减轻、稳定或预防真菌生长的组合物，其中所述组合物含有植物材料，所述植物材料获自十字花科(brassicaceae)和/或蝶形花科(fabaceae)。
本发明的又一方面涉及用于治疗、减轻、稳定或预防哺乳动物(例如人或动物)中真菌生长的组合物，所述组合物含有植物材料，所述植物材料获自十字花科(brassicaceae)和/或蝶形花科(fabaceae)。
现在将在下面更详细地描述本发明。
发明详述
因此，真菌的意外发育和生长在许多领域经常是一个问题，并且持续关注减少、限制或避免意外生长，因为这可能影响生活质量或我们所吃食品的质量，影响食品的感觉体验，导致受感染的房屋/建筑物的老化以及人或动物感染各种疾病。
因此，本发明的一个方面涉及含有从十字花科(brassicaceae)和/或蝶形花科(fabaceae)获得的植物材料的组合物用于抑制或减少真菌生物的生长的用途。
另外，本发明的另一方面涉及抑制或减少真菌生物的生长的方法，通过使真菌生物体经受含有从十字花科(brassicaceae)和/或蝶形花科(fabaceae)获得的植物材料的组合物。
此外，本发明的另一方面涉及用于减轻、稳定或预防真菌生长的组合物，其中所述组合物含有植物材料，所述植物材料获自十字花科(brassicaceae)和/或蝶形花科(fabaceae)。
在本发明的一实施方案中，组合物还含有一种或多种乳酸菌菌株。
在本发明的一优选实施方案中，组合物可以是发酵组合物。优选地，一种或多种乳酸菌菌株可以用于提供发酵组合物。
因此，本发明的另一优选实施方案涉及用于抑制或减少真菌生物的生长的发酵组合物，其含有从十字花科(brassicaceae)和/或蝶形花科(fabaceae)获得的植物材料和一种或多种乳酸菌菌株，。
在本发明中，术语“真菌生物”涉及任何种类的不需要的或非预期的真菌生长或真菌发育，或在不需要的或非预期的地方的真菌生长。
在本发明的一实施方案中，真菌生物是酵母、霉菌和/或其孢子。酵母可以优选是引起或能够引起免疫受损的人中的致病作用或食品腐败的酵母。霉菌可优选能够引起食品腐败、性能下降或成为致病的霉菌。
根据本发明的组合物可以是植物材料本身(优选地，植物材料可以被研磨、切割、切断、切片和/或切碎)，植物材料的一部分或从所述植物材料获得的提取物。
本发明的另一方面可涉及抗真菌组合物，其含有获自十字花科(brassicaceae)和/或蝶形花科(fabaceae)的植物材料。
在本发明的上下文中，术语“抗真菌组合物”涉及能够杀死、抑制、减少、限制或避免真菌生物的生长或发育的组合物。此外，抗真菌组合物可能能够杀死真菌或真菌孢子(充当杀真菌剂)或能够抑制真菌生长(充当真菌抑制剂)
根据本发明的抗真菌组合物可以是或可以含有植物材料本身，植物材料的一部分或从所述植物材料获得的提取物。优选地，根据本发明的抗真菌组合物可含有植物材料的提取物。
在本发明的一实施方案中，组合物或抗真菌组合物可以是消毒剂，医疗产品或成分。
优选地，根据本发明的成分可以形成食品，饲料产品，医疗产品或消毒剂的一部分。
在本文中，术语“食品”涉及适合人消费的物质。
在本文中，术语“饲料产品”涉及适合动物消费的物质。
在本发明的一实施方案中，食品或饲料产品可以是发酵食品或发酵饲料产品。优选地，发酵食品或发酵饲料产品除植物材料外还含有一种或多种乳酸菌菌株。
食品或饲料产品可含有基于干物质的0.1-15％(w/w)的选自十字花科、蝶形花科植物科或其组合的植物材料，例如0.5-13％，例如1-12％，例如2-11％，例如3-10％，例如5-9％，例如6-8％。
在本发明的另一实施方案中，发酵食品或发酵饲料产品可以是肉制品或是含肉制品。
在发酵食品的又一实施方案中，肉制品或含肉制品可以是防腐产品，例如香肠。
在本发明的上下文中，术语“医疗产品”涉及适合于治疗、减轻、稳定或预防哺乳动物(例如人或动物)中真菌生长的物质。
因此，本发明的一实施方案涉及用于治疗、减轻、稳定或预防哺乳动物(例如人或动物)中真菌生长的组合物，所述组合物含有植物材料，所述植物材料可以是从十字花科(brassicaceae)和/或蝶形花科(fabaceae)获得。
在本发明的另一实施方案中，医疗产品可以是油，乳膏或软膏的形式。
在本发明的上下文中，术语“消毒剂”涉及适合于破坏、中和或抑制真菌生长，特别是携带疾病真菌的生长的物质。
本发明的消毒剂的一个优点是它是一种天然产品，其环境压力非常低，并且没有对环境有害的有害化学物质或成分被排放到环境中。
在本发明的一实施方案中，发酵组合物或发酵抗真菌组合物含有基于干物质的至少2μmol/g的硫代葡萄糖苷含量。在本发明的另一实施方案中，发酵组合物或发酵抗真菌组合物可具有基于干物质的至少3μmol/g的硫代葡萄糖苷含量，例如基于干物质的至少4μmol/g，例如基于干物质的至少5μmol/g，例如基于干物质的至少7.5μmol/g，例如基于干物质的至少10μmol/g，例如基于干物质的至少12.5μmol/g，例如基于干物质的至少15μmol/g，例如基于干物质的至少17.5μmol/g，例如基于干物质的至少20μmol/g，例如基于干物质的至少25μmol/g，例如基于干物质的至少30μmol/g，例如基于干物质的至少40μmol/g，例如基于干物质的至少50μmol/g，例如基于干物质的至少60μmol/g，例如基于干物质的至少70μmol/g，例如基于干物质的至少80μmol/g，例如基于干物质的至少90μmol/g，例如基于干物质的至少100μmol/g。
在本发明的一实施方案中，存在于发酵组合物或发酵抗真菌组合物中的硫代葡萄糖苷含量可以是天然存在于植物材料中的硫代葡萄糖苷的至少10％(w/w)，例如至少10％(w/w)，例如至少20％(w/w)，例如至少30％(w/w)，例如至少40％(w/w)，例如至少50％(w/w))，例如至少60％(w/w)，例如至少65％(w/w)，例如至少70％(w/w)，例如至少75％(w/w)，例如至少80％(w/w)，例如在天然存在于植物材料中的硫代葡萄糖苷的10-95％(w/w)，例如15-75％(w/w)，例如20-50％(w/w)，例如30-85％(w/w)，例如50-75％(w/w)。
在本发明的上下文中，术语“天然存在于植物材料中的硫代葡萄糖苷”涉及在发酵之前待发酵的植物材料中的硫代葡萄糖苷的测定/分析含量。如果在发酵之前未对植物材料进行测定或分析或不能进行测定或分析，则“天然存在于植物材料中的硫代葡萄糖苷”涉及文献中发现的针对特定植物材料的硫代葡萄糖苷量。
植物材料
根据本发明的植物材料获自十字花科(brassicaceae)，蝶形花科(fabaceae)，或十字花科(brassicaceae)和蝶形花科(fabaceae)的组合。
优选地，十字花科选自芸苔属种(brassicaspp.)，十字花科植物，卷心菜物种和/或芥菜物种。
在本发明的一实施方案中，芸苔属种可优选地选自油菜物种，花茎甘蓝物种和/或花椰菜物种中的一种或多种。优选地，油菜物种是菜籽产品，例如菜籽粕或菜籽饼，优选菜籽饼。
在本发明的另一实施方案中，芸苔属种可选自一种或多种物种，例如欧洲油菜(brassicanapus)；甘蓝(brassicaoleracea)；芸苔(brassicacampestris)；和/或芜青(brassicarapa)。
在本发明的一实施方案中，植物材料含有从十字花科获得的2种或更多种植物材料种类的组合，例如3种或更多种，例如4种或更多种，例如5种或更多种，例如6种或更多种。
优选地，蝶形花科可以选自蝶形花亚科(faboideae)。甚至更优选地，蝶形花科和/或蝶形花亚科可以选自大豆属(glycine)。甚至更优选地，蝶形花科选自大豆(glycinemax)物种。甚至更优选地，蝶形花科可以选自大豆植物。
在本发明的一优选实施方案中，植物材料不含有海藻材料或藻类材料。
在本发明的一实施方案中，植物材料不合有除从十字花科获得的植物材料之外的其他植物材料。
在本发明的一实施方案中，植物材料不含有除从蝶形花科获得的植物材料之外的其他植物材料。
在本发明的另一实施方案中，植物材料含有从十字花科获得的植物材料和从蝶形花科获得的植物材料的组合。优选地，植物材料不含有除从十字花科获得的植物材料和从蝶形花科获得的植物材料之外的其他植物材料。优选地，植物材料含有至少50％(w/w)的从十字花科获得的干物质植物材料，例如至少65％(w/w)，例如至少75％(w/w)。
一种或多种乳酸菌菌株
在本发明的另一实施方案中，存在于组合物或发酵组合物中的一种或多种乳酸菌菌株可选自乳杆菌属(lactobacillus)，明串珠菌属(leuconostoc)，片球菌属(pediococcus)，乳球菌属(lactococcus)，链球菌属(streptococcus)，气球菌属(aerococcus)，肉杆菌属(carnobacterium)，肠球菌属(enterococcus)，酒球菌属(oenococcus)，四联球菌属(teragenococcus)，漫游球菌属(vagococcus)和魏斯氏菌属(weisella)。优选地，存在于组合物或发酵组合物中的一种或多种乳酸菌菌株优选是肠球菌属，乳杆菌属，片球菌属，乳球菌属或其组合的乳酸菌。
在本发明的另一实施方案中，一种或多种乳酸菌菌株可选自一种或多种肠球菌属种，乳杆菌属种，乳球菌属种，片球菌属种，以及它的组合。优选地，所述一种或多种乳酸菌菌株选自屎肠球菌(enterococcusfaecium)，鼠李糖乳杆菌(lactobacillusrhamnosus)，植物乳杆菌(lactobacillusplantarum)，乳酸片球菌(pediococcusacidililactili)，戊糖片球菌(pediococcuspentosaceus)，乳酸乳球菌(lactococcuslactis)，乳酸乳球菌乳脂亚种(lactococcuscremoris)，乳酸乳球菌丁二酮亚种(lactococcusdiacetylactis)，乳脂明串珠菌(leuconostoccremoris)及其组合中的一种或多种。
在本发明的又一实施方案中，存在于组合物或发酵组合物中的主要乳酸菌菌株可以是戊糖片球菌；乳酸片球菌；植物乳杆菌；鼠李糖乳杆菌；或屎肠球菌。优选地，存在于组合物中的主要乳酸菌可以是植物乳杆菌。
在本发明的另一实施方案中，一种或多种乳酸菌菌株可以选自屎肠球菌mcimb30122，鼠李糖乳杆菌ncimb30121，戊糖片球菌hts(lmgp-22549)，乳酸片球菌ncimb30086和/或植物乳杆菌lsi(ncimb30083)中的一种或多种。
为了提供所需的效果，发酵组合物应具有高含量的活乳酸菌。在本发明的一实施方案中，发酵组合物含有一种或多种乳酸菌菌株，其总量为105-1012cfu/g，例如106-1012cfu/g，例如107-1011cfu/克，例如108-1011cfu/g，例如109-1010cfu/g。
在本发明的一实施方案中，一种或多种乳酸菌菌株可以以足以超过任何微生物的浓度添加到植物材料中，所述任何微生物例如最初存在于植物材料中的细菌和/或真菌。
为了改善发酵过程和发酵组合物的效果，发酵组合物可含有切碎的植物材料。植物材料可以通过研磨，切割，切断，切片和/或切碎而切碎，提供切碎的植物材料。
提供组合物的方法
本发明的一方面涉及制备根据本发明的发酵组合物的方法，特别是含有植物材料(具有益生元活性)和一种或多种乳酸菌菌株(具有益生菌活性)的发酵抗真菌组合物。该方法包括以下步骤：
(i)提供植物材料；
(ii)提供一种或多种乳酸菌菌株；
(iii)通过将步骤a)中提供的植物材料与步骤b)中提供的一种或多种乳酸菌菌株组合，对植物材料进行发酵，
(iv)继续发酵直至提供ph值低于5.0的发酵组合物。
在本发明的一实施方案中，一种或多种益生菌可以是产乳酸细菌，乳酸菌。
乳酸菌可以产生乳酸和其他代谢产物，其有助于发酵组合物的感官，质地，营养和药理学特征。
因此，取决于使用本发明组合物的方式和位置，并且取决于所用组合物的浓度，可以控制发酵过程以限制或降低组合物对最终产品的影响，特别是关于最终产品的感官，质地，营养或药理学性质中的一种或多种。
乳酸菌的工业重要性可以通过它们通常被认为是安全的(gras)状态来证明，因为它们在食品中无处不在以及它们对人体粘膜表面健康微生物区系的贡献。含有乳酸菌并且可用于本发明的属是乳杆菌属，明串珠菌属，片球菌属，乳球菌属，和链球菌属，气球菌属，肉杆菌属，肠球菌属，酒球菌属，四联球菌属，漫游球菌属和魏斯氏菌属；这些属属于乳杆菌目(lactobacillales)。
为了提高生产率和有效性，可以提供两种或更多种乳酸菌菌株，例如三种或更多种乳酸菌菌株，例如四种或更多种乳酸菌菌株，例如7种或更多种乳酸菌菌株，例如10种或者更多种乳酸菌菌株，例如15种或更多种乳酸菌菌株，例如20种或更多种乳酸菌菌株，例如25种或更多种乳酸菌菌株，例如30种或更多种乳酸菌菌株，例如35种或更多种乳酸菌菌株，例如40种或更多种乳酸菌菌株。
在本发明的一实施方案中，可以提供发酵剂培养物或接种物，其含有一种或多种如本文定义的乳酸菌菌株。
术语“接种物”涉及用于接种新培养物的源材料，例如一种或多种乳酸菌菌株。接种物可用于引发感兴趣的过程。
“接种”是指微生物(例如一种或多种乳酸菌菌株)的放置，当植入培养基例如含有待发酵培养基例如植物材料的发酵罐时，所述微生物将生长。
可以提供初级接种物，其是指在一系列重复相似的基本上相同的接种过程中产生初始接种物，例如一次或多次重复发酵过程。可以使用等分试样的发酵过程的产物来接种新的发酵过程。因此，接种可以是发酵的饲料产品，其含有足量的活乳酸产生细菌以引发另一种待发酵的饲料产品或类似饲料例如植物材料的乳酸发酵过程。
根据本发明的接种物可以是液体形式，干燥形式或基本上干燥形式。可以调节接种物的水分含量以优化发酵过程。在本发明的一实施方案中，接种物可以作为基本上纯的活细菌(例如冷冻干燥形式的细菌)或在施用前悬浮在合适培养基(例如水，缓冲液或生长培养基)中的细菌提供。
添加到植物材料中的接种物的比例可以变化。如果认为植物材料或发酵系统中不需要的微生物的负荷是显著的，则发酵混合物(接种物+植物材料+额外的水)中接种物的比例可以增加以确保发酵由接种物的微生物(例如乳酸菌)驱动。因此，可以在接种物中为接种物提供足以超过植物材料中存在的其他非乳酸菌，酵母或霉菌的乳酸菌浓度。
因此，在本发明的一实施方案中，步骤(iii)中定义的植物材料和一种或多种乳酸材料的组合中的接种物的比例为0.1至99.9体积％；例如1至99体积％；例如5至70体积％；例如10至50体积％；例如25至35体积％；例如0.1至10体积％；例如0.5至5体积％；例如1至2.5体积％；或约1至2体积％。
根据本发明的发酵过程可以优选是基本上同型发酵过程。“基本上同型发酵”是指驱动发酵的主要细菌菌群是同型发酵的。在本文中，术语“基本上同型发酵”涉及其中99％或更多的细菌是同型发酵的发酵过程，例如95％或更多的细菌是同型发酵的，例如90％或更多的细菌是同型发酵的，例如85％或更多的细菌是同型发酵的，例如80％或更多的细菌是同型发酵的，例如70％或更多的细菌是同型发酵的，例如60％或更多的细菌是同型发酵的。
在本发明的一实施方案中，发酵基本上是同型发酵，例如同型乳酸发酵。
当根据本发明使用时，术语“同型乳酸发酵”表明主要发酵产物是乳酸，并且乙酸和乙醇的水平低于味道阈值，约为味道阈值或略高于味道阈值。优选地，“基本上同型发酵”表示乳酸与乙酸或乳酸与乙醇的比例(mm/mm)大于1∶1，例如2∶1或更大，例如10∶1或更大，例如20∶1或更大，例如50∶1或更大，或例如100∶1或更大。
在本发明的另一实施方案中，根据本发明的方法是基本上异型发酵的发酵。
在本发明的上下文中，术语“基本上异型发酵”是指驱动发酵的主要细菌菌群是异型发酵的。在本文中，术语“基本上异型发酵”涉及其中99％或更多的细菌是异型发酵的发酵过程，例如95％或更多的细菌是异型发酵的，例如90％或更多的细菌是异型发酵的，例如85％或更多的细菌是异型发酵的，例如80％或更多的细菌是异型发酵的，例如70％或更多的细菌是异型发酵的，例如60％或更多的细菌是异型发酵的。
在本发明的一实施方案中，根据本发明的异型发酵导致大部分发酵产物是乙酸和乙醇，并且乙酸和乙醇与乳酸的比例(mm/mm)大于1∶1，例如2∶1或更大，例如10∶1或更大，例如20∶1或更大，例如50∶1或更大，或例如100∶1或更大。
在本发明的另一实施方案中，步骤iv)中提供的发酵组合物具有至少50mm的乙酸和/或乙醇浓度，例如至少100mm，例如100-1000mm，例如100-500mm，例如100-300mm，例如100-200mm，例如150-500mm，例如200-500mm，或例如300-500mm的乳酸。
根据本发明的发酵可以持续10天或更短，例如9天或更短，例如8天或更短，例如7天或更短，例如6天或更短，例如5天或更短，例如4天或更短，例如3天或更短，例如2天或更短，例如36小时或更短，例如24小时或更短。
即使发酵应该尽可能快地继续，发明人还发现可能需要一定的发酵时间来提供发酵组合物的所需营养和/或药理学作用。因此，在本发明的一实施方案中，发酵应持续超过2小时，例如超过5小时，例如超过8小时，例如超过10小时，例如超过12小时，例如超过15小时，例如超过17小时，例如超过20小时，例如超过24小时，例如24小时至10天，例如20小时至8天，例如15小时至6天，例如12小时至4天，例如10小时至2天，例如8小时至36小时，例如8小时至24小时，例如2小时至20小时，例如6小时至15小时。
控制温度可以是改善发酵组合物的质量和效果的最佳方式之一。在本发明的一实施方案中，发酵在低于50℃的温度下进行，例如低于47℃，例如低于45℃，例如低于43℃，例如15-45℃，例如18-43℃，例如25-40℃，例如30-40℃，例如15-20℃或例如40-45℃。
发酵过程可以优选地涉及温度梯度，所述温度梯度包括3个阶段；起始温度，温度升高和稳态发酵温度。
在本发明的一实施方案中，起始温度可以在18-30℃，例如20-28℃，例如22-26℃，例如24-25℃。
本发明的发酵过程的温度升高可以优选为从起始温度到稳态发酵温度的缓慢升温。在本发明的一实施方案中，提供温度升高而不加热。在本发明的上下文中，术语“不加热”涉及发酵温度升高，其中所提供的热量是通过发酵本身产生的，而不使用基于电，机械或燃料的热量。
在本发明的一实施方案中，稳态发酵温度可以低于50℃，例如低于47℃，例如低于45℃，例如低于43℃，例如20-45℃，例如22-43℃，例如25-40℃，例如30-40℃，例如40-45℃。
在本发明的又一实施方案中，发酵可以是植物材料的一步发酵。
在本文中，术语“一步发酵”涉及发酵过程，其中相同类型的植物材料经历相同的发酵条件或基本相同的发酵条件。因此，术语“一步发酵“不包括这样的选择：在发酵过程中取出一部分植物材料，留下剩余的植物材料进一步发酵，然后将取出的部分与其他发酵材料混合。
在本发明的另一实施方案中，发酵组合物不涉及随后向发酵组合物中补充植物材料和/或一种或多种乳酸菌菌株。
待发酵的植物材料的水分含量可以是控制发酵过程和所得发酵组合物的另一个相关参数。因此，在本发明的一实施方案中，发酵过程中的水分含量可以在20-60％(w/w)，例如30-50％(w/w)，例如优选35-45％(w/w)。
在本发明的一优选实施方案中，可以继续发酵直至发酵组合物具有低于ph6.5的ph值，例如低于ph6.0，例如低于ph5.5，例如低于ph5.0，例如ph3.0-6.5，例如ph3.0-6.0，例如ph3.1-5.5，例如ph5.0-3.2，例如3.3-4.2，例如3.4-4.0，例如3.5-3.8，例如3.7-4.2，例如3.7-4.0，或者例如3.8-4.2。
在另一实施方案中，步骤iv)中提供的发酵组合物具有至少50mm的乳酸浓度，例如至少100mm，例如至少250mm，例如至少500mm，例如至少750mm，例如至少1000mm，例如100-1000mm，例如100-500mm，例如100-300mm，例如100-200mm，例如150-500mm，例如200-500mm或者例如300-500mm的乳酸。
由于认为一种或多种乳酸菌菌株的益生菌作用在2小时至20天后达到峰值，例如3小时至15天，例如6小时至10天，例如12小时至9天，例如18小时至8天，例如24小时至7天，例如2-6天，例如3-5天后，例如4-5天后，例如6小时至4天，例如6小时至3天，例如6小时至2天，例如6小时至24小时，例如6小时至18小时，例如6小时至12小时，可以在该时间段内停止发酵过程。在停止发酵后，可以干燥发酵组合物以延长一种或多种乳酸菌菌株的活力(cfu)。
根据本发明的发酵组合物可以是液体，浆液或干粉。
根据本发明的过程还可包括将水分含量从发酵过程获得的水分含量降低至发酵组合物水分含量的步骤。在本发明的一实施方案中，可以对组合物进行干燥。
可以使用任何对发酵组合物的益生元和益生菌组分敏感的降低水分方法，以保持发酵组合物中组分的活性并确保发酵组合物中存在的乳酸菌的高活力。如wo2013/029632中所述的降低水分含量的方法可能是优选的(wo2013/029632在此通过引用并入)。
在本发明的一实施方案中，根据本发明的组合物的水分含量可以为至多10％(w/w)，例如至多8％(w/w)，例如至多6％(w)/w)，例如至多4％(w/w)，例如至多2％(w/w)。
为了改善发酵过程，根据本发明，可以在步骤(iii)中所述的将植物材料与一种或多种乳酸菌菌株组合之前预处理植物材料。
这种预处理可以包括研磨，切割，切段，切片和/或切碎植物材料。
在本发明的一实施方案中，植物材料，特别是欧洲油菜或者芸苔，可经历预处理，其程度导致平均直径为植物材料平均直径的至多75％，例如至多50％，例如至多25％，例如为平均直径的至多10％。
在本发明的另一实施方案中，可以对植物材料进行预处理，提供平均直径为3mm或更小的预处理植物材料，例如平均直径为2mm或更小，例如平均直径为1mm或更小，例如平均直径为25μm至3mm，例如0.1mm至2.5mm，例如平均直径为0.5mm至2.25mm，例如平均直径为1.0mm至2mm。
应当注意，在本发明的一个方面的上下文中描述的实施例和特征也适用于本发明的其他方面。
现在将在以下非限制性实施例中进一步详细描述本发明。
实施例
实施例1
本实施例的目的是分析干燥，发酵的油菜籽和/或大豆补充饲食对怀孕，哺乳母猪和仔猪的真菌发育的健康影响。
测试的母猪和仔猪
该实施例在波兰卢布斯卡(lubuskie)省lipowiec的一个养猪场进行。关于发酵油菜籽和/或豆粕的使用的研究分为两个阶段。第一阶段是在怀孕和哺乳期间对40头波兰大白猪和波兰长白猪品种的母猪进行，而第二阶段则是对来源于用于实施例第一阶段的母猪的180只断奶仔猪(28天)进行。研究包括第二次和第三次哺乳后的母猪。实验室分析在lublin的生物化学和毒理学系(departmentofbiochemistryandtoxicology)以及动物饲养和染色学研究所(instituteofanimalfeedingandbromatologyup)进行。第二阶段是关于来源于用于该实施例的第一阶段的母猪的一百八十只断奶仔猪，从仔猪生命的第29天开始。
实施例设计
在实验的第一阶段，母猪(确诊怀孕后)被平均分为两组，基于体重和它们下一代生殖周期类似产生分组(表1)。来自cl组的动物在妊娠期间喂食常规型pr-预混合物(妊娠预混合物)和在哺乳期喂食la-预混合物(哺乳期预混合物)。营养素含量符合猪的饲喂指南和食品价值(2014年)。来自frl组的动物饲喂食与第1组(cl组)相同的预混合物，但饲食中添加4％的发酵油菜籽(表1)。
表1.第一阶段和第二阶段实验的设计
cl-对照母猪；
frl-接受实验混合物的母猪
co-仔猪对照组(来自未接受实验组合的母猪)
c-仔猪对照组(来自接受实验组合的母猪)
s-适用于实验组的起始预混合物
fr-接受含有发酵油菜的实验混合物的仔猪
fs-接受含有发酵大豆的实验混合物的仔猪
该实施例的第二阶段对来源于第一阶段母猪的仔猪进行。这一阶段在母猪分娩仔猪后的第二天开始，一旦仔猪达到30公斤体重就结束。
来自两个母猪组——cl和frl——的分别30头仔猪组成两个相应的对照组-对照co和c。来自对照组co和c的仔猪接受起始预混合物(没有实验因素)，其中营养物含量符合猪的饲养指南和食品价值(2014)。四组(fr；fr/fs；fs/fr和fs)来自于120头来源于frl母猪的仔猪组。来自这四组的仔猪接受与对照组仔猪相同的起始预混合物，但添加8％的实验组分(发酵油菜，发酵豆粕或其两种不同组合)。fr组接受添加8％发酵油菜籽补充剂的预混合物，fr/fs组接受添加6％发酵油菜籽补充剂和添加2％发酵豆粕补充剂的预混合物，fs/fr组接受添加2％发酵油菜籽补充剂和添加6％发酵豆粕补充剂的预混合物，fs组用含有8％发酵豆粕补充剂的预混合物喂养。
怀孕期间的母猪被饲养在五个畜栏中，但是在分娩和哺乳期间，它们是分开饲养的。干燥预混合物(或含有发酵组合物的预混合物)以1∶2.5的比例湿润。针对一个栏中两头母猪称重喂食量。母猪在怀孕和哺乳期间可以自由使用安抚物(soothiepacifier)。仔猪和猪可以自由食用预混合物，一直可以获取饮用水。养猪场的条件符合rokicki，kolbuszewski1996所描述的推荐的动物园规范，并且动物在兽医的不断医疗护理下。
微生物分析
用于微生物分析的材料由小肠内容物和仔猪粪便组成。分析粪便直至实验结束，并在实验结束时从每组中选择的，屠宰的个体收集小肠的内容物。将肠和粪便样品收集到无菌容器中并冷却至4℃。将材料均质化以产生批次组，对于实施例中的每个组分开。称取20g制备的材料并放入含有180ml林格氏溶液的无菌瓶中。将该溶液涡旋5分钟，然后静置沉淀15分钟。从获得的溶液中组成系列稀释液，然后接种到具有足够微生物基质的培养皿中。
接下来，将培养皿培养，使真菌和霉菌在dg18基质上生长，在25℃的温度下培养5-7天。
在特定的孵育时间后，用自动计数器计数生长的菌落，并相应地转换成pn-iso4832，pn-eniso7218标准。为了鉴定酵母样真菌，宏观地评估生长的菌落，然后减数筛选到sabourauda基质上。对菌落进行宏观和显微镜观察，然后进行革兰氏染色。最终鉴定基于可用的测试api20caux(biomérieuxpoland)进行。
所有测试均按照pn-iso4832，pn-eniso7218进行。
统计分析
获得的数据进行统计分析，使用statistica第5版程序，单因素方差分析anova，重要性水平为0.05和0.01
结果：
干燥，发酵的油菜籽和/或大豆补充饲食对怀孕，哺乳母猪和仔猪的真菌发育的分析结果总结在下表2和表3中，并在所附图1和图2中示出。
表2.仔猪小肠的真菌发育
表3.仔猪粪便的真菌发育
在从表2和表3获得的上述数字中(并且如图1和图2中所示)，在仔猪的肠和粪便中都显示出真菌发育的明显且显著的减少。单独发酵的油菜对肠道中的真菌发育具有最强的作用，而发酵的大豆或发酵的大豆与发酵的油菜的组合显示对粪便的真菌计数具有最强的影响。