本发明涉及一种菌肥，更具体的说涉及一种青蒿幼苗培育方法及其专用深绿木霉K菌肥。技术背景木霉(Trichodermaspp.)属半知菌类丛梗抱目、丛梗抱科真菌，广泛存在于土壤、根围、叶围、种子和球茎等生态环境中。木霉菌落生长迅速，呈不定型棉絮状或致密丛束状。其表面的颜色多呈绿色。菌丝有隔分枝。厚垣孢子有或无。分生孢子梗是菌丝的短侧枝。侧枝上对称或互生分枝，形成2级和3级分枝。分枝角度为锐角或近于直角，在分枝末端形成瓶状小梗。分生孢子多为卵圆形。无色或绿色，簇生于小梗顶端。木霉菌是一种嗜温真菌，生长适温为20-28℃，在37℃条件下能生长，但在48℃条件下不能生长，在6℃或32℃仍生长良好。木霉的生长要求较高湿度，其营养生长的相对湿度要求92％以上，孢子的形成需要93％-95％的湿度，因而木霉在潮湿土壤中的生命力较干性土壤中强。光照以对数比例增强可以促进分生孢子的产生.有研究发现380nm和440nm波长的光诱导力最强，木霉经日光处理3min或经紫外线光处理10-30S诱导产孢的效果更好。木霉的最适生长pH值为5-5.5，在pH值为1.5或9.0的培养基上也可能生长，但酸性条件比碱性条件下的萌发率更高。CO2对木霉生长的影响取决于CO2的浓度和培养基的PH值，在碱性基质中，高浓度的CO2有利于木霉菌的生长。木霉菌株能够利用多种有机物作为碳源，较理想的是单糖、双糖、多糖、嘌呤、嘧啶和氨基酸等。铵是木霉菌最易利用的氮源，其他氮源如氨基酸、尿素、硝酸盐、亚硝酸盐也能维持其正常生长。以天冬门素为氮源生长特别好，含氮量低，会促进抱子形成，对高浓度硝酸盐的负影响由于硫酸镁的存在可以得到补偿。无机盐对木霉的生长很重要。对绿色木霉来说，镁离子能促进其生长，铜离子能促进分生抱子色素形成，铁离子对抱子的形成也很重要。自1932年Weindling发现木素木霉(T.lignorum)寄生于多种植物病原真菌后，木霉菌作为一类生防菌显示出巨大的应用潜力。许多研究者观察到在藻类、半知菌、子囊菌和担子菌中有木霉寄生物。木霉菌能寄生的植物病原菌即拮抗对象包括丝核菌属((Rhimetonia)、小核菌((Selerolium)、核盘菌属(Sclerotinia)、长蠕抱属(Helminth)、镰刀菌属(Fusarium)、毛盘抱属(Colletotriehum)、轮枝抱属(Yerticillium),黑星菌属(Venturia)、内座壳属(Endothia),腐霉属((Pythium)、疫霉属(Phytophlhora),闻座壳属(Diaporthe)和黑星孢属((Fusicladium)等。因此，木霉具有抗病害作用；此外，木霉具有很强的分解纤维素能力，有利于作物吸收利用，具有促进植物生长的作用；木霉还降解农药；且对环境无危害性。总之，木霉是研发有机菌肥的优质菌种之一。有机菌肥是将一种或多种有益微生物植入有机物中制备而成的一种新型肥料，多效有机菌肥的有机物既是肥力的基础，又是有益微生物的培养基质。这种新型肥料兼具促生长、抗病、改善土质、无农残等多重优点，目前已在国内外得到大量应用，且取得了显著效果。国内研究者王慧中、赵培洁等对木霉的微生物肥料作用研究得较为透彻，据赵培洁报道，浙江大学从1991年起研发的以哈茨木霉发酵液为主要成分的微生物多效有机菌肥，对作物增产效果显著，并于1997年通过省级鉴定，获肥料登记和国家专利。所登记的高效微生物态氮由哈茨木霉深层发酵液经减压浓缩精制而成，蛋白质含量为45％。生产流程为哈茨木霉菌种→平板培养→液体振荡培养→深层发酵→测定→过滤→沉渣(弃去)→清夜→减压浓缩配制→干燥→粉碎→样品。其产品经过大田试验，发现与使用传统的尿素、厩肥相比，对白菜的增产效果明显，且使用简单，在蔬菜上具有广阔的应用前景。浙江大学生物技术研究所研制推广的威绿达(VIRIDA)菌肥以绿色木霉为主，毛壳菌、枯草芽抱杆菌为辅混配制成，主要应用于绿色蔬菜生产、旱地作物、草地保护，也可以作花卉肥料。该生物制剂以城市生活垃圾为基物，掺混入木霉、毛壳菌及有益细菌，它既含有作物生长所需的有机和无机成分，又具有防病促进生长的作用，并且可以改良土壤，是一种多功能的生物菌肥。威绿达在国内外尚属首创，产品也具有良好的应用前景。以绿色木霉为主要成分的利江牌微生物肥(绿色木霉)，是利江实业公司在利江有机肥的基础上，引进技术研制而成的一种木霉微生物肥料。该菌肥对黄瓜、芹菜、油菜等都有显著的增产作用，并且能够促进早熟，改善作物品质，还可抑制病虫害的发生。可见，以绿色木霉为主要成分的木霉微生物肥料具有多种效果，而且符合当今农产品生产绿色环保无公害无农残及可持续发展的要求，具有广阔的市场前景。青蒿ArtemisiaannuaL.,又名黄花蒿,是菊科一年生药用草本植物。具有清热解暑，除蒸，截疟的功效。用于暑邪发热，阴虚发热，夜热早凉，骨蒸劳热，疟疾寒热，湿热黄疸。其提取物青蒿素对脑疟疾和氯喹疟疾具有高效低毒的抗疟性能,WHO已经认定复方青蒿素成药为目前最安全有效的抗疟药。目前该药物青蒿素虽然能人工合成,但成本很高,未能产业化。主要从青蒿植株中提取。青蒿原料主要来自人工栽培，因生产中长期大量施用化肥，导致土壤酸化，环境污染。亟待寻找绿色环保无农残的肥料进行替代。而我们分离出一株深绿木霉(,Trichodermaaureoviride)K菌株，对青蒿幼苗生长具有显著的促生作用。因此，用该菌株制作菌肥，可减少甚至避免青蒿幼苗生长时期化肥的施用，从而达到保护土壤和环境的目的。技术实现要素：针对青蒿幼苗生长中出现的问题，同时本领域还没有一种适用于青蒿育苗的菌肥的问题，本发明提供了一种青蒿幼苗培育方法及其专用深绿木霉K菌肥。其中，一种青蒿幼苗培育方法，为青蒿幼苗根际土中打小洞，灌施深绿木霉K菌肥后盖土。所述深绿木霉K菌肥的施用量为3g菌球/株。一种专用于青蒿幼苗培育的深绿木霉K菌肥，所述深绿木霉K菌肥的制备的步骤为：1)在无菌操作条件下，取深绿木霉K菌种接种于制备好的液体培养基；2)接深绿木霉K的液体培养基置于摇床，转速130转/分钟，环境温度25℃，培养时间6-8天，液体培养基中长满菌球后取出；3)滤去多余液体培养基，用清水悬浮菌球，得到深绿木霉K菌肥。所述深绿木霉K菌种的制备方法包括以下步骤：1)在当年6月，取无病斑健壮青蒿侧枝，剪成小段，洗去泥土灰尘，用洗衣粉水浸泡1分钟，流水冲洗后备用；2)在超净工作台上，用75％乙醇清洗，1/1000升汞消毒，无菌水清洗4-5次，用无菌滤纸吸干水分，剪成0.5-1厘米长小茎段；3)小茎段置于土豆葡萄糖平皿培养基上，25℃培养7±1天，挑取茎段周围长出的真菌菌丝；4)将真菌菌丝在土豆葡萄糖培养基上继续培养，直到得到纯化的真菌菌落为止；5)将上述真菌菌落做分子鉴定，选取深绿木霉K菌株作为深绿木霉K菌肥的菌种。所述土豆葡萄糖培养基的制备方法为：称取土豆200克切小块，煮汁水过滤，加入葡萄糖20克，琼脂粉7克，定容至1升，121℃灭菌30分钟后，在超净工作台上倒入平皿，冷却后备用。所述液体培养基制备方法为：称量土豆200克，切小块，煮沸20分钟，去渣取汁水，加入葡萄糖20克，加水定容至1升。分装1升三角瓶，250-500毫升/瓶。121℃灭菌30分钟得到。本发明的有益技术效果是：本发明提供了一种应用于青蒿幼苗培育的深绿木霉K菌肥，填补了青蒿种植领域的空白。同时采用深绿木霉菌K菌肥能够有效地促进青蒿幼苗的生长发育，且比化肥绿色环保。具体实施方式实施例1深绿木霉菌肥的制备1、深绿木霉K菌肥的制备(1)深绿木霉菌株K的筛选6月，取无病斑健壮青蒿侧枝，剪3厘米长小段，洗去泥土灰尘，用洗衣粉水浸泡1分钟，流水冲洗40分钟，在超净工作台上，用75％乙醇清洗1分钟，1/1000升汞消毒5分钟，无菌水清洗4-5次，用无菌滤纸吸干水分，剪成0.5-1厘米长小段，置于土豆葡萄糖PDA培养基上，25℃培养7天左右，挑取茎段周围长出的真菌在新的PDA培养基上继续培养，直到得到纯化的真菌菌落为止。所得菌落送华大基因公司做分子鉴定，鉴定出一株内生真菌为深绿木霉，将其接种于试管培养基(成分同土豆葡萄糖培养基)，25℃培养备用，定名为深绿木霉K。(2)深绿木霉K菌肥的制备在超净工作台上，无菌操作条件下，取深绿木霉K的试管菌种一小块，接种于制备好的三角瓶液体培养基，然后置于摇床，培养条件设置为25℃,转速130转/分钟，培养6-8天。待液体培养基中长满菌球后取出。用纱布滤去多余液体培养基(因该液体对青蒿幼苗生长有抑制作用)，用少量清水悬浮菌球，得到深绿木霉K菌肥。2、对照深绿木霉L菌肥的制备深绿木霉是重寄生菌，可侵染其他真菌，因此我们培养活性较弱的羊肚菌菌丝，以吸引空气中的深绿木霉孢子，从而分离得到深绿木霉菌株。其培养步骤如下：(1)深绿木霉菌株L的筛选①羊肚菌麦粒种培养小麦粒浸泡于清水24小时，浸泡过心，沥干水分，装罐头瓶，121℃灭菌40分钟，在超净工作台上接种羊肚菌试管菌种，封口，于25℃培养7天左右。待麦粒长满羊肚菌菌丝后备用。②深绿木霉L菌种的培养腐殖土装罐头瓶，121℃灭菌40分钟，将羊肚菌麦粒种分散成粒后，埋入土中约1-2厘米，塑料膜封口，于15℃培养约7天，羊肚菌菌丝长满土面后揭开塑料膜，于20℃培养，待土面长出青绿色孢子后，取孢子，在超净工作台上接种于土豆葡萄糖培养基平皿(土豆葡萄糖培养基制作方法：土豆200克切小块，煮汁水过滤，加入葡萄糖20克，琼脂粉7克，定容至1升，121℃灭菌30分钟后，在超净工作台上倒入平皿冷却后备用)，25℃培养4-7天，长出菌落后，取菌落边缘菌丝接种于土豆葡萄糖培养基平皿，这样多次纯化后，得到的菌种送华大基因公司进行分子鉴定，确认为深绿木霉后，接种于试管培养基(成分同土豆葡萄糖培养基)，25℃培养备用，定名为深绿木霉L。(2)深绿木霉L菌肥的制备在超净工作台上，无菌操作条件下，取深绿木霉L试管菌种一小块，接种于制备好的三角瓶液体培养基，然后置于摇床，培养条件设置为25℃,转速130转/分钟，培养6-8天。待液体培养基中长满菌球后取出。用纱布滤去多余液体培养基(因该液体对青蒿幼苗生长有抑制作用)，用少量清水悬浮菌球，得到深绿木霉L菌肥。实施例2深绿木霉K菌肥在青蒿幼苗培育中的应用试验在当年4-6月进行，此时温度利于深绿木霉菌丝体生长。将青蒿幼苗分为3组，每组55株，分别为对照组、深绿木霉K菌肥组和深绿木霉L菌肥组，在青蒿幼苗根际土中打小洞，分别灌施实施例1中得到的深绿木霉K菌肥和深绿木霉L菌肥(约3克菌球/株)后盖土。另设一组仅以清水浇灌，作为对照。25天后，统计青蒿幼苗各项生长发育指标，具体如表1所示。对表1的数据进行显著性分析，结果如表2所示。从表2可见，除根长以外，其余所有生长发育指标，深绿木霉L菌肥相对对照组没有实际的技术效果；施用深绿木霉K菌肥的青蒿苗均显著优于深绿木霉L菌肥组及对照组青蒿苗。表1施用深绿木霉菌肥对青蒿幼苗生长的影响表2深绿木霉对青蒿促生长作用肥效显著性分析结果编号根长cm株高cm根粗mm茎粗mm地下鲜重g地上鲜重g地下干重g地上干重g总鲜重g总干重g对照组26.3036a3.0491b1.1302b1.0889b0.2582b0.2556b0.0296b0.0425b0.5138b0.0722b深绿木霉K菌肥组26.0882ab3.7418a1.3198a1.2138a0.3445a0.3009a0.0437a0.0515a0.6454a0.0952a深绿木霉L菌肥组25.7245ab3.1358b1.1332b1.1105b0.2748b0.2548b0.0302b0.0456b0.5203b0.0885b当前第1页1 2 3