新型羟基双氢青蒿素含硫酯类衍生物的制备及其应用
【专利摘要】本发明属于化学医药领域，涉及一类新型羟基双氢青蒿素含硫酯类衍生物的制备及其应用。具体地，本发明公开了一类结构如式I和式II所示的羟基双氢青蒿素衍生物或其药学上可接受的盐，或其对映异构体、非对映异构体或外消旋体，其中Alkyl or Aromatic group如本文中定义。本发明还公开了所述化合物在预防和/或治疗癌症疾病药物中的用途。
【专利说明】
新型羟基双氢青蒿素含硫酯类衍生物的制备及其应用
技术领域
[0001] 本发明属于化学医药领域。具体地说是涉及新型羟基双氢青蒿素含硫酯类衍生物 及其应用。
【背景技术】
[0002] 青蒿素是从菊科植物青蒿(Artemisia annua L.)中提取的抗疱活性成分，其结构 为含有过氧桥的倍半萜内酯。近年来，研究发现其除抗疟活性外，还具有抗肿瘤、抗病毒、抗 真菌、抗炎和免疫抑制等活性。其抗肿瘤活性具有选择性强、逆转多药耐药和放化疗增敏等 特点，其药效团为结构中的过氧桥。青蒿素的药代动力学数据显示，青蒿素脂溶性、水溶性 均较差，半衰期短，生物利用度低。为了克服这些缺点，化学家已经通过不同的修饰手段对 青蒿素的结构进行了改进，但目前青蒿素的修饰产物大多建立在其还原产物双氢青蒿素的 基础上，以此为原料进彳丁衍生。目前青高素衍生物的修饰位点多在C_ll，C_12和C_13位，在 其他位点修饰的衍生物较少，其原因也是由于过氧桥这个发挥活性的药效团不稳定导致 的。
[0003] 生物转化是利用生物体系包括细菌、真菌、植物、动物、植物或动物自制培养物、或 生物体系的酶制剂对外源性底物进行结构修饰所发生的化学反应。其转化条件温和，选择 性高，立体专一性强，可以完成化学方法通常不能进行的反应，而且方法简便。中国专利 CN1382805A(2002)利用浅灰色链霉菌ATCC13273对双氢青蒿素进行了生物转化获得了双氢 青蒿素羟基化的转化产物即9α_羟基双氢青蒿素，此产物同时具备两个羟基可修饰位点，使 得在六元环上进行结构修饰成为事实。
[0004] 现有技术主要是对青蒿素 C-12位的结构修饰发掘更有潜力（即高效低毒）的抗肿 瘤药物，本领域技术人员有必要研发一类结构新颖，C-9位为羟基，仅在C-12位修饰或者在 C-9位和C-12位同时修饰，抗肿瘤效果优异的新型青蒿素衍生物。
【发明内容】
[0005] 本发明涉及通式I和通式II所示的新型羟基双氢青蒿素含硫酯类衍生物或其药学 上可接受的盐，或其对映异构体、非对映异构体或外消旋体，
[0006]
I Ii
[0007]其中，
[0008] Alkyl group为任选含有不同个数碳原子的脂肪链。Aromatic group为任选含有 不同长度的碳链芳基或者含有不同长度的碳链及不同取代的芳基。
[0009] 本发明优选涉及定义如下的通式I和通式II所示的新型羟基双氢青蒿素含硫酯类 衍生物或其药学上可接受的盐，或其对映异构体、非对映异构体或外消旋体，
[0010] 其中，Alkyl group为CH2CH3,CH2CH2CH2CH3t3Aromatic group为CH2C6H5,C6H5OCH3, C6Hii0
[0011] 本发明还特别优选下列通式I和通式II所示的新型羟基双氢青蒿素含硫酯类衍生 物或其药学上可接受的盐，或其对映异构体、非对映异构体或外消旋体，
[0012] 9α，12α-双-(3-对甲氧基苯硫基苯甲酸)双氢青蒿素酯；
[0013] 9α-羟基-12α-(3-对甲氧基苯硫基苯甲酸)双氢青蒿素酯；
[0014] 9α，12α-双-(3-乙硫基苯甲酸)双氢青蒿素酯；
[0015] 9α-羟基-12α-(3-乙硫基苯甲酸)双氢青蒿素酯；
[0016] 9α，12α-双-(3-正丁硫基苯甲酸)双氢青蒿素酯；
[0017] 9α-羟基-12α-(3_正丁硫基苯甲酸)双氢青蒿素酯；
[0018] 9α，12α-双-(3-苄硫基苯甲酸)双氢青蒿素酯；
[0019] 9α-羟基-12α-(3_苄硫基苯甲酸)双氢青蒿素酯；
[0020] 9α，12α-双-(3-环己烷基苯甲酸)双氢青蒿素酯；
[0021] 9α-羟基-12α-(3_环己烷基苯甲酸)双氢青蒿素酯
[0022] 本发明包括药物组合物，该组合物含有通式I和II的羟基双氢青蒿素含硫酯类化 合物、其药学上可接受的盐及其对映异构体、非对映异构体、外消旋体作为活性成分，以及 药学上可接受的赋型剂。所述药学上可接受的赋型剂是指任何可用于药学领域的稀释剂、 辅助剂和/或载体。本发明的衍生物可以与其他活性成分组合使用，只要它们不产生其他不 利的作用。
[0023] 本发明的药物组合物可配制成若干种剂型，其中含有药学领域中常用的一些赋形 剂;例如，口服制剂(如片剂，胶囊剂，溶液或混悬液）；可注射的制剂(如可注射的溶液或混 悬液，或者是可注射的干燥粉末，在注射前加入注射用水可立即使用）；局部制剂(例如软膏 或溶液）。
[0024] 用于本发明药物组合物的载体是药学领域中可得到的常见类型，包括：口服制剂 用的粘合剂、润滑剂、崩解剂、助溶剂、稀释剂、稳定剂、悬浮剂、无色素、矫味剂等;可注射制 剂用的防腐剂、助溶剂、稳定剂等;局部制剂用的基质、稀释剂、润滑剂、防腐剂等。药物制剂 可以经口服或胃肠外方式(例如静脉内、皮下、腹膜内或局部)给药，如果某些药物在胃部条 件下是不稳定的，可将其配制成肠衣片剂。
[0025] 我们已发现本发明化合物具有抑制肿瘤细胞增殖、抑制荷瘤小鼠肿瘤生长的抗肿 瘤活性。因此，它可以用作预防和/或治疗癌症的药物。尤其对于治疗肺癌、胃癌、前列腺癌、 乳腺癌有特殊疗效。
[0026] 根据本发明的衍生物可作为活性成分用于预防和/或治疗癌症，本发明也提供预 防和/或治疗上述疾病的方法，包括给予易患有或患有此病的病人治疗有效量的本发明的 衍生物。通式I和通式II的羟基双氢青蒿素含硫酯类衍生物用于患者的临床剂量必需依赖 被治疗的主体、给药的具体途径、被治疗疾病的严重性而变化，而最佳剂量由治疗具体患者 的医生确定。
[0027] 本发明活性化合物可作为唯一的抗癌药物使用，或者可以与一种或多种其它抗肿 瘤药物联合使用。联合治疗通过将各个治疗组分同时、顺序或隔开给药来实现。
[0028] 下文中提供的实施例和制备例进一步阐明和举例说明本发明化合物及其制备方 法。应当理解，下述实施例和制备例的范围并不以任何方式限制本发明的范围。
[0029] 合成路线A描述了本发明的通式I和II化合物的制备，所有的原料都是通过合成路 线A中描述的方法、通过有机化学领域普通技术人员熟知的方法制备的或者可商购。本发明 的全部最终化合物都是通过下面合成路线A中描述的方法或通过与其类似的方法制备的， 这些方法是有机化学领域普通技术人员熟知的。合成路线A中应用的全部可变因数如下文 的定义或如权利要求中的定义。
[0030] L0034J 路线 B
[0035] 上述路线A和B中，原料A-I由本实验室经过生物转化获得，原料B-I，B_2是通过商 购获得。本发明制备方法简单，制备的化合物具有明显的体内外抗肿瘤活性。
【附图说明】
[0036]图1为9α-羟基-12α-(3_对甲氧基苯硫基苯甲酸)双氢青蒿素酯对裸鼠肺癌A549皮 下肿瘤模型的抑制作用，A为实验过程中裸鼠体重变化情况，B为处死后裸鼠的肿瘤重量 [0037]图2为9α_羟基-12α_(3-对甲氧基苯硫基苯甲酸）双氢青蒿素酯对裸鼠胃癌SGC-7901皮下肿瘤模型的抑制作用，A为实验过程中裸鼠体重变化情况，B为处死后裸鼠的肿瘤 重量
【具体实施方式】
[0038]实施例旨在阐述而不是限制本发明的范围。衍生物的核磁共振氢谱和碳谱用 Bruker AVANCE-400或者Bruker 300测定，高分辨质谱用Aglient LC-Q-TOF-MS 6520Β测 定;所用溶剂均为分析纯或化学纯。
[0039]实施例1:9α，12α-双-(3-对甲氧基苯硫基苯甲酸)双氢青蒿素酯的制备
[0040] 将（lequiv)9a-羟基双氢青蒿素，（2equiV)3-对甲氧基苯硫基苯甲酸，（2.6equiv) DMAP和(3equiv)EDCI加入干燥的三颈圆底烧瓶，然后加入IOmL无水二氯甲烷溶解，温度自 然，搅拌反应12h，TLC检测反应完毕后，旋干，乙酸乙酯溶解，水洗，饱和氯化钠洗，无水硫酸 镁干燥，旋干，残留物经柱层析色谱分离得到目标化合物，洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯= 4:1 (V：V)〇
[0041] Yield:41.3%.White Powder-IiipJScC-lH NMR(400MHz，CDCl3)S = 7.89-7.82(m， 3H)，7.80-7.74(m，lH)，7.47-7.41(m，4H)，7.30(td，J=5.3，1.9Hz，4H)，6.95-6.89(m，4H)， 5.92(d，J = 9.8Hz，lH)，5.61(s，lH)，4.68(td，J=10.8,4.4Hz，lH)，3.83(s，3H)，3.82(s， 3H)，2.79-2.66(m，lH)，2.41(dd，J=18.5,8.8Hz，lH)，2.18(ddd，J = 15.0,9.7,5.3Hz，lH)， 2.14-2.06(m，lH)，2.00-1.88(m，2H)，1.78-1.51(m，4H)，1.44(s，3H)，0.99(d，J=6.2Hz， 3H)，0.86(d，J = 7.1Hz，3H) .13C NMR(100MHz，CDC13)S = 165.64，164.71，160.26，160.23， 140.08,139.89,135.92(X2),135.90(X2),132.46,132.24,130.72,130.19,129.00, 128 · 87，128·74，128·71，127·25，126·68，123·18，123·10,115.40(X4)，104.58,92.34， 91·22,79·08,76·26,55·40(Χ2)，49·09,42·77,41·33,36·08,31·63,27·48,25·88,24·54， 15.44,12.05.HR-ESI-MS m/z 807.2262[M+Na] + , (calcd for C43H44NaOioS2,807.2268).
[0042] 实施例2:9a-羟基-12a-(3_对甲氧基苯硫基苯甲酸)双氢青蒿素酯的制备
[0043] 按照实施例1的方法，制备标题化合物。
[0044] Yield:59.7% .White powder.mp.erC .1H 匪R(400MHz，CDCl3)S = 7.90(d，J = 0·9Ηζ，1H)，7.89-7.85(m，1H)，7.47-7.40(m，2H)，7·33-7.27(m，2H)，6.97-6.88(m，2H)， 5.95(d，J = 9.8Hz，lH)，5.57(s，lH)，3.84(s，3H)，3.25(td，J=10.6,4.3Hz，lH)，2.77-2.58 (m，lH)，2.40(td，J = 14.4,3.9Hz，lH)，2.09(ddd，J = 8.9,4.5，1.7Hz，lH)，1.90(ddd，J = 16.4,8.6,5.1Hz，lH)，1.83(dd，J=9.3,4.9Hz，lH)，1.64-1.47(m，3H)，1.44(s，3H)，1.40-1.29(m，2H)，1.08(d，J = 6.1Hz，3H)，0.88(d，J = 7.1Hz，3H) .13C 匪R(100MHz，CDC13)S = 164.75,160.21，139.85,135.91，135.88,132.44,130.24,129.18,128.87,127.29,123.18， 115.22(X2)，104.54,92.50,91.31，79.45,73.81，55.40，49.10,44.15，42.99,36.12， 31.60,31.07,25.90,24.49,15.43,12.15.HR-ESI-MS m/z 565.1858[M+Na] +, (calcd for C29H34NaO8S, 565.1867).
[0045] 实施例3:9α，12α-双-(3-乙硫基苯甲酸)双氢青蒿素酯的制备
[0046] 按照实施例1的方法，用3-乙硫基苯甲酸代替实施例1中的原料3-对甲氧基苯硫基 苯甲酸制备标题化合物。柱层析色谱洗脱剂为石油醚:乙酸乙酯=8:1(V:V)。
[0047] Yield:34.2% .White ρ(^(1θΓ·πιρ·69-72Γ .1H NMR(400MHz，CDCl3)S = 8.21(dt，J =26·8，1·7Ηζ，2Η)，8.06-7.96(m，2H)，7.76-7.68(m，2H)，7.40-7.30(m，2H)，6.01(d，J= 9.7Hz，lH)，5.65(s，lH)，4.76(td，J = 10.8,4.3Hz，lH)，3.01(q，J = 7.4Hz，2H)，2.99(q，J = 7.5Hz，2H)，2.85-2.74(m，lH)，2.43(dt，J=14.4,3.8Hz，lH)，2.26-2.17(m，lH)，2.12(t，J = 12.4Hz，lH)，2.00-1.91(m，2H)，1.83-1.51(m，4H)，1.46(s，3H)，1.34(t，J=11.4Hz，3H)， 1.32(t，J=11.4Hz，3H)，1.03(d，J = 6.3Hz，3H)，0.93(d，J = 7.1Hz，3H).13C NMR(100MHz， CDCl3)S=165.73,164.81，136.68,136.38,136.16,133.18,132.60,130.07(X2)，128.73， 128.18，127.41，122.60，122.46，104.65,92.37,91.27,79.02,76.53,49.07,42.79,41.33， 36.08,31.68,29.69,27.55(X2),25.86,24.55,15.50,14.20(X2),12.11.HR-ESI-MS m/z 651.2061[M+Na] +，（calcd for C33H4〇Na08S2,651.2057).
[0048] 实施例4:9a-羟基-12a-(3_乙硫基苯甲酸)双氢青蒿素酯的制备
[0049] 按照实施例3的方法，制备标题化合物。
[0050] Yield:36.1% .White PowderJS-TTcC-1H NMR(400MHz，CDCl3)S = 8.26-7.88(m， 1H)，8.08-8.01(m，lH)，7.72-7.48(m，lH)，7.42-7.30(m，lH)，6.01(d，J=9.7Hz，lH)，5.65 (s，lH)，4.76(td，J=10.8,4.3Hz，lH)，3.00(q，J = 7.4Hz，2H)，2.84-2.72(m，lH)，2.39(dt， J=14.4,3.7Hz，lH)，2.26-2.16(m，lH)，2.10(d，J=14.4Hz，lH)，1.97(dd，J = 21.4， 11.6Hz，2H)，1.85-1.53(m，4H)，1.45(s，3H)，1.32(t，J = 7.8Hz，3H)，1.03(d，J = 6.3Hz， 3H)，0.91(t，J = 8.3Hz，3H) .13C NMR(1〇〇MHz，CDC13)S = 164.83，136.35，133.59，133.02， 129·93，127·40，122·45，104·58,92·71，91·37,79·46,73·80,49·11，44·16,42·98,36·12， 31.65,31.09,27.55,25.89,24.50,15.43,14.21，12.21.HR-ESI-MS m/z 487.1712[M+Na ] + ,(calcd for C24H32NaO7S,487.1761).
[00511 实施例5:9α，12α-双-(3-正丁硫基苯甲酸)双氢青蒿素酯的制备
[0052]按照实施例1的方法，用原料3-正丁硫基苯甲酸代替实施例1中的原料3-对甲氧基 苯硫基苯甲酸而制备标题化合物。柱层析色谱洗脱剂为石油醚:乙酸乙酯=7:1(V:V)。
[0053] Yield:30.3% .White Powder-Iiip-IlS-IlScC-lH NMR(400MHz，CDCl3)S = 8.00(dt， J = 24.0，1.6Hz，2H)，7.92-7.86(m，lH)，7.84-7.80(m，lH)，7.54-7.48(m，2H)，7.36(dd，J = 17.1，7.8Hz，2H)，6.00(d，J = 9.8Hz，lH)，5.65(s，lH)，4.74(td，J=10.9,4.4Hz，lH)，2.97 (q，J = 5.6Hz，4H)，2.83-2.73(m，lH)，2.49-2.38(m，lH)，2.22(dt，J=12.8,4.4Hz，lH)， 2.10(dd，J=15.0,3.8Hz，lH)，2.03-1.91(m，2H)，1.77(td，J=10.8,6.1Hz，lH)，1.72-1.55 (m，9H)，1.51-1.46(m，2H)，1.45(s，3H)，1.04(d，J = 6.3Hz，3H)，0.92(d，J = 7.2Hz，3H)， 0.93(t，J = 7.3Hz，3H)，0.94(t，J = 7.3Hz，3H).13C NMR(100MHz，CDC13)S = 165.74，164.82， 138.25,138.05,133.45,133.12,130.67,130.12,129.86,129.32,128.86,128.73,127.27， 126·67，104·60，92·36，91·27，79·10，76·22，49·12，42·82，41·38，36·09，33·13，33·09， 31.68,31.08,31.05,27.55,25.88,24.56,21.93(X2),15.49,13.63,13.61,12.12.HR-ESI-MS m/z 707.2700[M+Na] +，（calcd for C37H48Na08S2,707.2683)·
[0054] 实施例6:9a-羟基-12a-(3_正丁硫基苯甲酸)双氢青蒿素酯的制备
[0055] 按照实施例5的方法，制备标题化合物。柱层析色谱洗脱剂为石油醚:乙酸乙酯=2 ：l(V：V)〇
[0056] Yield:33.7% .White Powder-IiipJS-TScC-lH NMR(300MHz，CDCl3)S = 8.04(t J = 1.6Hz，lH)，7.94-7.87(m，lH)，7.51(ddd，J = 7.8，1.7，l.lHz，lH)，7.35(t，J = 7.8Hz，lH)， 6.01(d，J = 9.8Hz，lH)，5.57(s，lH)，3.25(td，J=10.7,4.3Hz，lH)，3.02-2.92(m，2H)， 2.83-2.67(m，lH)，2.48-2.31(m，lH)，2.07(dt，J=13.7,4.2Hz，2H)，1.86(m，2H)，1.7卜 1.45(m，6H)，1.43(s，3H)，1.40-1.24(m，2H)，1.10(d，J = 5.9Hz，3H)，0.94(d，J = 7.1Hz， 3H)，0.95(t，J = 7.2Hz，3H) .13C NMR(100MHz，CDC13)S = 164.84，138.03，133.42，130.19， 129·85，128·73，127·26，104·54,92·50,91·36,79·46,73·81，49·11，44·17,43·01，36·14， 33.13,31.65,31.12,31.07,25.89,24.50,21.93,15.43,13.61，12.21.HR-ESI-MS m/z 515.2078[M+Na]+,(calcd for C26H36Na〇7S,515.2074).
[0057] 实施例7:9α，12α-双-(3-苄硫基苯甲酸)双氢青蒿素酯的制备
[0058] 按照实施例1的方法，用原料3-苄硫基苯甲酸代替实施例1中的原料3-对甲氧基苯 硫基苯甲酸而制备标题化合物。柱层析色谱洗脱剂为石油醚:乙酸乙酯=6:1(V:V)。
[0059] Yield: 17.2% .White Powder-IiipjScC-lH NMR(400MHz，CDCl3)S = 8.00(dt J = 33.1，1.7Hz，2H)，7.93-7.89(m，lH)，7.86-7.82(m，lH)，7.47(tdd，J=8.8，1.9，l.lHz，2H)， 7.36-7.21(m，12H)，6.00(d，J = 9.8Hz，lH)，5.65(s，lH)，4.73(td，J=10.9,4.4Hz，lH)， 4.18(s，2H)，4.15(s，2H)，2.82-2.72(m，lH)，2.50-2.40(m，lH)，2.20(dt，J=12.9,4.4Hz， lH)，2.11(dt，J=7.2,6.2Hz，lH)，2.02-1.92(m，2H)，1.79-1.54(m，4H)，1.46(s，3H)，1.01 (d，J = 6.3Hz，3H)，0.90(d，J = 7.1Hz，3H) .13C 匪R(100MHz，CDC13)S = 165.58，164.67， 137·35,137.16,136.91，134.49,134.16,130.90,130.66,130.36,130.11，128.84(X6)， 128.73,128.57(X4),127.97,127.40,127.35(X2),104.61,92.34,91.26,79.07,76.18, 49.09,42.78,41.36,38.81(X2),36.09,31.66,27.52,25.88,24.57,15.51,12.12.HR-ESI-MS m/z 775.2388[M+Na] + ,(calcd for C43H44NaO8S2,775.237).
[0060] 实施例8:9a-羟基-12a-(3-苄硫基苯甲酸)双氢青蒿素酯的制备
[0061] 按照实施例7的方法，制备标题化合物。柱层析色谱洗脱剂为石油醚:乙酸乙酯=4 ：l(V：V)〇
[0062] Yield:47.4%.White Powder-IIip-SScC-lH 匪R(300MHz，CDC13)S = 8.05(s，1H)， 7.91(d，J = 7.8Hz，lH)，7.46(d，J = 7.8Hz，lH)，7.31(dd，J = 8.8,5.6Hz，6H)，5.99(d，J = 9·8Ηζ，1Η)，5.57(s，lH)，4.16(s，2H)，3.25(td，J=10.6,4.2Hz，lH)，2.80-2.66(m，lH)， 2.40(dt，J=14.8,3.7Hz，lH)，2.12-1.99(m，2H)，1.96-1.77(m，2H)，1.61-1.45(m，2H)， 1.44(s，3H)，1.4卜1.24(m，2H)，1.08(t，J = 7.4Hz，3H)，0.91(d，J = 7. lHz，3H) .13C 匪R (75MHz，CDCl3)δ = 164.66,137.13,136.93,134.45,130.89,130.77,130.19,128.82， 128.69，128.55，127.95，127.84,127.31，104.51，92.48,91.33,79.41，73.82，49.11， 44.16,43.00,38.82,36.13,31.61，31.10,25.85,24.48,15.39,12.16.HR-ESI-MS m/z 549.1925[M+Na] + ,(calcd for C29H34NaO7S,549.1917).
[0063] 实施例9:9α，12α-双-(3-环己烷基苯甲酸)双氢青蒿素酯的制备
[0064]按照实施例1的方法，用原料3-环己烷基苯甲酸代替实施例1中的原料3-对甲氧基 苯硫基苯甲酸而制备标题化合物。柱层析色谱洗脱剂为石油醚:乙酸乙酯=8:1(V:V)。
[0065] Yield:16.7% .White powder.mp.95-97°C .1H NMR(300MHz，CDCl3)S = 8.08(dt，J = 18.4，1.7Hz，2H)，7.91(dd，J = 20.2,7.7Hz，2H)，7.63-7.53(m，2H)，7.36(q，J = 7.7Hz， 2H)，6.01(d，J = 9.8Hz，lH)，5.65(s，lH)，4.74(td，J=10.7,4.3Hz，lH)，3.23-3.11(m，2H)， 2.86-2.72(m，lH)，2.52-2.35(m，lH)，2.24(dt，J=12.7,4.4Hz，lH)，2.06-1.93(m，8H)， 1.78(d，J = 4.6Hz，7H)，1.62(d，J=10.4Hz，6H)，1.45(s，3H)，1.43-1.22(m，6H)，1.04(d，J = 6.2Hz，3H)，0.93(d，J = 7.1Hz，3H) .13C 匪R(75MHz，CDC13)S = 165.67，164.75，136.43， 136.34,136.26,136.16,132.92,132.46,130.63,130.09,128.79,128.65,128.17,127.60， 104·56,92·35,91·25,79·07,76·24,49·12,46·61，42·81，41·36,36·08,33·24(X3)，33.20 (X3)，31.66,27.52,25.91(X3)，25.85，25.69(X2)，24.54,15.45,12.09.HR-ESI-MS m/z 759.3000[M+Na] +，（calcd for C4iH52Na08S2,759.2996).
[0066] 实施例10:9a-羟基-12a-(3_环己烷基苯甲酸)双氢青蒿素酯的制备
[0067]按照实施例9的方法，制备标题化合物。柱层析色谱洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯=2 ：l(V：V)〇
[0068] Yield:26.8% .White ρ(^(1θΓ·πιρ·90-92Γ .1H NMR(300MHz，CDCl3)S = 8.11(dd，J = 4.5,2.9Hz，lH)，7.98-7.91(m，lH)，7.6h7.55(m，lH)，7.37(q，J = 7.4Hz，lH)，6.00(d，J = 9.8Hz，lH)，5.57(s，lH)，3.32-3.10(m，2H)，2.83-2.68(m，lH)，2.40(dt，J=14.4,4.0Hz， lH)，2.11-1.95(m，5H)，1.92-1.72(m，4H)，1.67-1.47(m，4H)，1.43(s，3H)，1.4hl.24(m， 5H)，1.10(d，J = 5.9Hz，3H)，0.94(d，J = 7.1Hz，3H) .13C 匪R(75MHz，CDC13)S = 164.77， 136.40,136.15,132.90,130.16,128.65,128.16,104.50,92.48,91.33,79.42,73.81, 49.11,46.60,44.16,43.01,36.13,33.24,33.21,31.62,31.11,25.92(X2),25.86,25.70, 24.48,15.39,12.17.HR-ESI-MS m/z 541.2224[M+Na] + (calcd for C28H38NaO7S,541.223).
[0069] 实施例11:本发明产物的体内外抗肿瘤活性研究
[0070] 1.本发明产物的体外抗肿瘤活性筛选
[0071] 1.1细胞复苏
[0072] 从液氮罐中迅速取出所需细胞冻存管，放入37°C温水中，快速摇晃，使其尽可能快 的融化（最好控制在Imin左右）。完全融化后，1000 rpm，离心5min。小心弃掉冻存管中上清 液，加入培养基，轻轻吹打，将细胞悬液转移至培养瓶中，37°C、5 %⑶2孵育培养，24h后换 液。
[0073] 1.2细胞培养及传代
[0074] 实验所用肿瘤细胞株A549、SGC-7901、MDA-MB-435s以含10%胎牛血清的DMEM培养 基在37 °C，5 % CO2条件下培养。当细胞密度达到8 X IO5个/mL时，进行传代培养(离心法），即 以lOOOrpm，离心5min，弃掉上清，以新鲜的10%DMEM培养基重悬细胞，以2 X IO5个/mL的密 度传代接种。
[0075] PC-3细胞株培养在含10%胎牛血清的F_12k培养基中，培养方法同上。
[0076] 1.3 MTT法测定本发明产物的抗肿瘤活性
[0077] 将肿瘤细胞用含有10%胎牛血清的培养基悬浮，以2 X IO3个细胞/孔的细胞密度 接种96孔培养板（I80μ!7孔），37°C、5%⑶:^培养过夜，每孔加入不同浓度的本发明产物，阴 性对照组加入等体积不加药物且含有1%〇DMSO的培养基，37°C、5%⑶ 2培养72h后检测本发 明产物对细胞的抑制率。
[0078]本发明产物对细胞的抑制率采用MTT比色法检测。MTT是一种四甲基偶氮唑盐，其 水溶液外观呈淡黄色，被活细胞摄入后，在细胞内形成蓝紫色结晶甲瓒。甲瓒可用DMS0、无 水乙醇或酸化异丙醇等溶解，在酶标仪上进行比色，所检测OD值的大小可反映细胞代谢活 性的强弱。检测时将本发明产物处理后的细胞培养液弃掉，按照终浓度0.5mg/ml加入MTT在 培养箱中孵育3h后去除MTT溶液，加入150yL DMSO，振荡器震荡IOmin使结晶溶解，酶标仪 570nm，650nm双波长检测。利用GraphPad Pr ism 5 · 0软件，计算药物的IC5q (半数抑制浓度）。
[0079] 本发明产物对四种肿瘤细胞系？〇3,36(：-79014549和]\0^-]\?-4358的生长抑制作 用见表1，结果显示，本发明产物对肿瘤细胞生长具有较强的抑制作用，具有开发成抗肿瘤 药物的潜力。
[0080] 表1本发明产物体外抗肿瘤活性筛选
[0082] NA：no activity
[0083] 2.实施例2中9α-羟基-12α-(3_对甲氧基苯硫基苯甲酸)双氢青蒿素酯的体内抗肺 癌活性
[0084] 2.1裸鼠人肺癌模型建立
[0085] BALB/c裸鼠，6~8周龄，雌雄兼用，购自扬州大学比较医学中心，饲养于SPF级动物 实验室。将A549细胞在37 °C、5 %⑶2，含10 %胎牛血清的DMEM培养基中培养，将处于对数生 长期的细胞用〇. 25 %胰蛋白酶消化，用无菌PBS液重悬制成5 X IO7个/mL的单细胞悬液，每 只裸鼠于右侧腹股沟区皮下接种〇.2mL细胞悬液，每天观察各注射点有无红肿破溃。造模7 天后，注射局部出现明显皮丘，所有裸鼠均出现直径大于5mm的皮下结节，移植瘤模型建立。
[0086] 2.2裸鼠重量、瘤重及抑瘤率测定
[0087] 将裸鼠随机分成治疗组和对照组(每组6只裸鼠）。如_羟基-12α_(3-对甲氧基苯硫 基苯甲酸)双氢青蒿素酯给药剂量为I〇mg/kg (低）、30mg/kg(中）、90mg/kg (高），给药频率为 隔天给药，给药方式为灌胃给药，持续30天。阳性对照组给予药物5-氟尿嘧啶(5-FU)，给药 剂量为30mg/kg。对照组注射生理盐水。观察肿瘤体积和生长速度，并隔天测量裸鼠体重。停 药后第2天处死裸鼠，分离瘤组织，称取瘤质量，计算抑瘤率。抑瘤率=(1-试验组平均瘤质 量/对照组平均瘤质量）X100%。
[0088] 9α-羟基-12α-(3-对甲氧基苯硫基苯甲酸）双氢青蒿素酯对人肺癌A549裸鼠肿瘤 生长的抑制作用见表2及图1，结果显示，与阳性药5-FU相比，9α_羟基-12α_(3-对甲氧基苯 硫基苯甲酸)双氢青蒿素酯治疗组体重无下降趋势，表明此化合物对裸鼠无明显的毒副作 用。从肿瘤重量的变化情况可以看出，其可以剂量依赖的抑制肺癌Α549细胞在动物体内的 生长，且高剂量抑制效果可与阳性药5-FU相比。与对照组相比低、中、高剂量组均有显著性 差异。
[0089]表2 9α-羟基-12α-(3_对甲氧基苯硫基苯甲酸)双氢青蒿素酯的体内抗肺癌活性
[0091] 3.实施例2中9α-羟基-12α-(3-对甲氧基苯硫基苯甲酸)双氢青蒿素酯的体内抗胃 癌活性
[0092] 3.1裸鼠人胃癌模型建立
[0093] BALB/c裸鼠，6~8周龄，雌雄兼用，购自扬州大学比较医学中心，饲养于SPF级动物 实验室。将SGC-7901细胞在37°C、5%⑶2,含10%胎牛血清的DMEM培养基中培养，将处于对 数生长期的细胞用0.25%胰蛋白酶消化，用无菌PBS液重悬制成5 X IO6个/mL的单细胞悬 液，每只裸鼠于右侧腹股沟区皮下接种〇.2mL细胞悬液，每天观察各注射点有无红肿破溃。 造模7天后，注射局部出现明显皮丘，当肿瘤体积达到100mm 3,移植瘤模型建立。
[0094] 3.2裸鼠重量、瘤重及抑瘤率测定
[0095] 将裸鼠随机分成治疗组和对照组(每组6只裸鼠）。如_羟基-12α_(3-对甲氧基苯硫 基苯甲酸)双氢青蒿素酯给药剂量为I〇mg/kg (低）、30mg/kg(中）、90mg/kg (高），给药频率为 隔天给药，给药方式为灌胃给药，持续30天。阳性对照组给予药物5-氟尿嘧啶(5-FU)，给药 剂量为30mg/kg。对照组注射生理盐水。观察肿瘤体积和生长速度，并隔天测量裸鼠体重。停 药后第2天处死裸鼠，分离瘤组织，称取瘤质量，计算抑瘤率。抑瘤率=(1-试验组平均瘤质 量/对照组平均瘤质量）X100%。
[0096] 9α-羟基-12α-(3-对甲氧基苯硫基苯甲酸)双氢青蒿素酯对人胃癌SGC-7901裸鼠 肿瘤生长的抑制作用见表3及图2,结果显示，与阳性药5-FU相比，9α_羟基-12α_(3-对甲氧 基苯硫基苯甲酸)双氢青蒿素酯治疗组体重无下降趋势，表明此化合物对裸鼠无明显的毒 副作用。从肿瘤重量的变化情况可以看出，其可以剂量依赖的抑制胃癌SGC-7901细胞在动 物体内的生长，且与对照组相比有显著性差异。
[0097] 表3 9α-羟基-12α-(3_对甲氧基苯硫基苯甲酸)双氢青蒿素酯的体内抗胃癌活性
【主权项】
1. 一种结构如通式I和通式II所示的新型羟基双氢青蒿素含硫酯类衍生物或其药学上 可接受的盐，或其对映异构体、非对映异构体或外消旋体，其中， Alkyl group为任选含有不同个数碳原子的脂肪族碳链。Aromatic group为任选含有 不同长度的碳链芳基或者含有不同长度的碳链及不同取代的芳基。2. 权利要求1所述的通式I和II的衍生物、其药学上可接受的盐，或其对映异构体、非对 映异构体或外消旋体，其中， Alky 1 group 分别独立地优选 CH2CH3，CH2CH2CH2CH3。3. 权利要求1所述的通式I和II的衍生物、其药学上可接受的盐，或其对映异构体、非对 映异构体或外消旋体，其中， Aromat i c group分别独立地优选CH2C6H5，C6H5OCH3，C6Hii 〇4. 权利要求1所述的通式I和II的衍生物、其药学上可接受的盐，或其对映异构体、非对 映异构体或外消旋体， 9α，12α-双-(3-对甲氧基苯硫基苯甲酸)双氢青蒿素酯； 9α-羟基-12α_(3-对甲氧基苯硫基苯甲酸)双氢青蒿素酯； 9α，12α-双-(3-乙硫基苯甲酸)双氢青蒿素酯； 9α-羟基-12α_(3-乙硫基苯甲酸)双氢青蒿素酯； 9α，12α-双-(3-正丁硫基苯甲酸)双氢青蒿素酯； 9α-羟基-12α_(3-正丁硫基苯甲酸)双氢青蒿素酯； 9α，12α-双-(3-苄硫基苯甲酸)双氢青蒿素酯； 9α-羟基-12α_(3-苄硫基苯甲酸)双氢青蒿素酯； 9α，12α-双-(3-环己烷基苯甲酸)双氢青蒿素酯； 9α-羟基-12α_(3-环己烷基苯甲酸)双氢青蒿素酯。5. -种药用组合物，包括权利要求1-4中任何一项的新型羟基双氢青蒿素含硫酯类衍 生物、其药学上可接受的盐，或其对映异构体、非对映异构体或外消旋体，作为活性成分以 及药学上可接受的赋型剂。6. 权利要求1-5中任何一项的新型羟基双氢青蒿素含硫酯类衍生物、其药学上可接受 的盐，或其对映异构体、非对映异构体或外消旋体，预防和/或治疗癌症疾病药物中的用途。
【文档编号】A61K31/357GK105859742SQ201610294122
【公开日】2016年8月17日
【申请日】2016年4月29日
【发明人】刘吉华, 余伯阳, 许藏藏
【申请人】中国药科大学