专利名称：一种青蒿中青蒿素含量的测定方法
技术领域：
本发明涉及一种青蒿中青蒿素含量的测定方法，特别涉及一种采用紫外分光光度分析青蒿中青蒿素含量的测定方法。
背景技术：
青蒿素以及以青蒿素为原料合成的蒿甲醚、双氢青蒿素和青蒿琥酯等青蒿素类抗疟药已被世界卫生组织推荐为目前可能取代奎宁治疗疟疾的最安全有效的药物。由于不同地区出产的青蒿药材所含青蒿素的量差异很大(2‰～12‰)，具显著的生态地域性，因此必须对青蒿药材进行质量控制，特别是在药材收购的时候，供、需双方均需要有方法对青蒿的质量进行快速评价，即急需快速测定青蒿素含量的方法。
目前国内外现有的青蒿素含量测定方法有多种。如高效液相色谱法、薄层色谱法、超临界流体色谱法、光度酶联免疫分析法，这些方法主要用于含量较高、纯度较高的青蒿素的测定，但是要求仪器设备高、操作复杂、耗时长，不适合现场快速质量评价；另外还有紫外分光光度法，主要是针对纯度很高的青蒿素检测，虽然操作简便，但是耗时长，也不适合直接用于现场快速质量评价。
发明内容
本发明的目的在于提供一种操作简便、快速检测青蒿中青蒿含量的方法。
本发明的目的是这样实现的一种青蒿中青蒿素含量的测定方法，其特征在于不完全提取待测青蒿中的青蒿素，采用紫外分光光度分析法测取青蒿素含量数据M(mg/g)，代入通过与对青蒿素完全提取后采用液相色谱法测取的青蒿素含量数据的对应关系所建立的线性模型，经计算得到所测青蒿中青蒿素的实际含量X(mg/g)。
上述青蒿素不完全提取采用超声萃取方法提取；上述青蒿素完全提取采用常规索氏提取法提取。
上述青蒿素含量数据的对应关系所建立的线性模型为X＝(M+0.3995)/0.748。
上述青蒿素不完全提取步骤如下称量0.5±0.01g，60～80目待测青蒿粉样品，在其中加入15ml石油醚，在温度为30～60℃条件下，超声12～17min，记录石油醚体积V；精密量取经过超声处理过的石油醚溶液0.3ml于10ml刻度试管中，放入沸水中直至石油醚完全挥发；再对留存下来的残渣进行衍生加入3ml的95％乙醇进行溶解，用0.2％NaOH溶液定容到10ml，混匀，在50±1℃温度下水浴30min，得待测样品溶液。
上述紫外分光光度分析法测取青蒿素含量数据Mmg/g是以经过衍生处理的空白溶液为参比，在紫外分光光度计检测波长292nm处，测定经过衍生处理的青蒿素标准品溶液和待测样品溶液吸光度，测得吸光度分别为A标准和A样品。
以标准对照法计算青蒿素含量，计算公式为M＝(A样品×V×2)/(A标准×3)其中，A样品为测得的待测样品的吸光度值；V为超声后样品石油醚的体积，以ml计；A标准为0.1mg/ml青蒿素标准品的吸光度值。
上述空白溶液的衍生处理将3ml95％乙醇溶液，用0.2％NaOH溶液定容到10ml，混匀，再在50±1℃温度下水浴30min；所述青蒿素标准品溶液的衍生将含有青蒿素标准品0.1mg/mL的1ml溶液中加入2ml95％乙醇溶液，用0.2％NaOH溶液定容到10ml，混匀，再在50±1℃温度下水浴30min，然后冷却至室温，用0.22μm滤膜过滤而得。
本发明以超声快速不完全提取代替传统长时间回流(通常需15～30小时)提取青蒿的方式，简化了操作程序，缩短了提取时间，并用紫外-可见分光光度分析法直接测定青蒿粗提物中青蒿素，在1.5小时内就可完成青蒿素的含量测定，所需仪器简单、操作方便，节约了试剂、减小了污染由于建立青蒿素的紫外快速检测数据与青蒿素的索氏(完全)提取-高效液相色谱法(HPLC)检测数据的相关线性模型，保证了计算处理得到的青蒿素含量数据的可靠性，因此，本发明可以真正实现在青蒿药材收购现场进行青蒿素含量的快速检测。
图1本发明不完全提取-紫外分光光度分析法与索氏(完全)提取-高效液相色谱法检测所测青蒿素含量数据的线性回归图。
图2不完全提取的提取时间与青蒿素含量的变化曲线。
具体实施例方式
实施列1选取22种不同青蒿素含量的青蒿药材分为一式两份，一份采用本发明不完全提取、紫外分光光度分析法测取青蒿素含量数据M，另一份采用索氏液相检测法测取青蒿素含量数据Ms，然后将两组数据进线性回归分析，得到其相关线性模型。
1、不完全提取、紫外分光光度分析法的实施1.1仪器与试剂天平(0.01g)，KQ2200B型超声波清洗器，具塞150ml锥型瓶，具塞10ml刻度试管，25ml量筒，电炉，恒温水浴箱，752紫外分光光度计，0.22μm水性过滤器，石油醚(30～60℃)，95％乙醇，0.2％氢氧化钠(NaOH)溶液。
1.2试验步骤1.2.1溶液的配制a、青蒿素标准溶液精密称量青蒿素标准品10mg于10ml容量瓶中，加入95％乙醇溶解稀释，定容到10ml，得到1mg/ml的对照品贮备液，4℃冰箱保存；b、0.2％NaOH溶液精密称量NaOH1g于500ml试剂瓶中，加入500ml蒸馏水溶解，混匀，室温保存；1.2.2空白、标准溶液的配制a、空白溶液的配制取3ml95％乙醇溶液于10ml刻度试管中用0.2％NaOH溶液定容到10ml，混匀，即得空白溶液；b、标准溶液的配制吸取贮备液1ml于10ml刻度试管中，混匀，即得0.1mg/ml标准溶液。
1.2.3青蒿样品溶液的制备.
a、取青蒿放入粉碎机粉碎，分别过80和60目筛，得到60～80目青蒿粉；b、称量0.5±0.01g青蒿样品(60～80目)于150ml具塞锥加入15ml石油醚(30～60℃)，超声15min；c、超声后将石油醚溶液倒入量筒，记录石油醚体积V；d、精密量取经过超声处理过的石油醚溶液0.3ml于10ml刻度试管中，放入不再加热的沸水中挥干。
1.2.4青蒿素衍生a、在1.2.3、d挥干的试管中，加入3ml的95％乙醇，溶解残渣，0.2％NaOH溶液定容到10ml，混匀，50±1℃水浴30min；b、空白溶液衍生取空白溶液，50±1℃水浴30min；c、标准溶液衍生取0.1mg/ml标准溶液1ml于10ml试管中，加入2ml95％乙醇溶液，0.2％NaOH溶液定容到10ml，混匀，50±1℃水浴30min。
衍生后冷水冷却到室温，0.22μm滤膜过滤，滤液用于紫外分光光度计测定吸光度。
1.2.5青蒿素检测以空白溶液为参比，在检测波长292nm处，测定青蒿素标准品溶液和青蒿样品溶液吸光度，测得吸光度分别为A标准和A样品。
1.3青蒿素含量计算以标准对照法计算青蒿素含量，计算公式为M(mg/g)＝(A样品×V×2)/(A标准×3)上述公式中A样品为青蒿样品溶液测得值；V为超声后青蒿样品石油醚的体积，以ml计，A标准为0.1mg/ml青蒿素标准品溶液吸光度。
按上述检测方法所测得的22种不同青蒿药材的青蒿素含量M数据见表1。
表1 样品的测定结果
2、索氏液相检测法的实施2.1仪器与试剂索氏提取器，美国Agilent 1100高效液相色谱仪，无水乙酸钠，冰醋酸，乙腈，双蒸水。
2.2试验步骤2.2.1青蒿索氏提取取1g青蒿样品，用滤纸包好，至于索氏提取器中，加石油醚(30～60℃)70ml(水浴过程中可酌情加入一定量的石油醚)，65±1℃水浴索式提取30小时，提取完毕后，测量样品溶液的体积V，取0.5ml样品溶液，在不加热的沸水中挥干。
2.2.2青蒿素的衍生在挥干的试管中，加入3ml的95％乙醇，溶解残渣，0.2％NaOH定容到10ml混匀，50±1℃水浴30min。
2.2.3青蒿素的检测衍生后冷水冷却到室温，取定量衍生溶液与0.08mol/l醋酸溶液等体积混合，进样50μl，HPLC检测。
色谱条件色谱柱Agilent Eclipse XDB C8柱(5μm，4.6×150mm)流动相的乙腈∶醋酸缓冲液(调pH值为5.8)＝23∶77温度30℃流速1ml/min波长260nm2.3检测结果的处理青蒿素含量计算公式Ms(mg/g)＝(A样品×V×2)/(A标准×5)其中，A样品为青蒿样品峰面积值，V为青蒿样品的体积，A标准为0.1mg/ml青蒿素标准品峰面积值。
按上述检测方法所测得的22种不同青蒿药材的青蒿素含量Ms数据见上表1。
3、不完全提取、紫外分光光度分析法与索氏液相检测法所测青蒿素含量数据的线性模型的建立。
将表1中的两组数据进线性回归分析，得到其相关线性模型，即青蒿中青蒿素的真实含量计算公式为X＝(M+0.3995)/0.748。
公式中X为青蒿中青蒿素的真实含量，单位为mg/g；M为不完全提取的青蒿素的含量，单位为mg/g。
实施例2本实施例中，除对同一种青蒿药材进行不完全提取的时间分别为5、12、15、20、25、30min外，其它的与实施例1中不完全提取、紫外分光光度分析法的检测方法相同，所测得的同一种青蒿药材在不同提取时间条件的青蒿素含量数据见表2，不完全提取的提取时间与青蒿素含量的变化曲线见图2。从图2中可知，在12～17min的提取时间范围内，所测得的青蒿素含量数据基本上是稳定的。
表2
权利要求
1.一种青蒿中青蒿素含量的测定方法，其特征在于不完全提取待测青蒿中的青蒿素，采用紫外分光光度分析法测取青蒿素含量数据Mmg/g，代入通过与对青蒿素完全提取后采用液相色谱法测取的青蒿素含量数据的对应关系所建立的线性模型，经计算得到所测青蒿中青蒿素的实际含量Xmg/g。
2.如权利要求1所述的青蒿中青蒿素含量的测定方法，其特征在于所述青蒿素不完全提取采用超声萃取方法提取；所述青蒿素完全提取采用索氏提取法提取。
3.如权利要求2所述的青蒿中青蒿素含量的测定方法，其特征在于所述青蒿素含量数据的对应关系所建立的线性模型为X＝(M+0.3995)/0.748。
4.如权利要求1或2所述的青蒿中青蒿素含量的测定方法，其特征在于所述青蒿素不完全提取步骤如下称量0.5±0.01g，60～80目待测青蒿粉样品，在其中加入15ml石油醚，在温度为30～60℃条件下，超声15min，记录石油醚体积V；精密量取经过超声处理过的石油醚溶液0.3ml于10ml刻度试管中，放入沸水中直至石油醚完全挥发；再对留存下来的残渣进行衍生加入3ml的95％乙醇进行溶解，用0.2％NaOH溶液定容到10ml，混匀，在50±1℃温度下水浴30min，得待测样品溶液。
5.如权利要求4所述的青蒿中青蒿素含量的测定方法，其特征在于所述紫外分光光度分析法测取青蒿素含量数据Mmg/g是以经过衍生处理的空白溶液为参比，在紫外分光光度计检测波长292nm处，测定经过衍生处理的青蒿素标准品溶液和待测样品溶液吸光度，测得吸光度分别为A标准和A样品；以标准对照法计算青蒿素含量，计算公式为M＝(A样品×V×2)/(A标准×3)其中，A样品为测得的待测样品的吸光度值；V为超声后样品石油醚的体积，以ml计；A标准为0.1mg/ml青蒿素标准品的吸光度值。
6.如权利要求5所述的青蒿中青蒿素含量的测定方法，其特征在于所述空白溶液的衍生处理将3ml95％乙醇溶液，用0.2％NaOH溶液定容到10ml，混匀，再在50±1℃温度下水浴30min；所述青蒿素标准品溶液的衍生将含有青蒿素标准品0.1mg/ml的1ml溶液中加入2ml95％乙醇溶液，用0.2％NaOH溶液定容到10ml，混匀，再在50±1℃温度下水浴30min，然后冷却至室温，用0.22μm滤膜过滤而得。
全文摘要
本发明涉及一种青蒿中青蒿素含量的测定方法。它是一种不完全提取待测青蒿中的青蒿素，采用紫外分光光度分析法测取青蒿素含量数据M(mg/g)，代入通过与对青蒿素完全提取后采用液相色谱法测取的青蒿素含量数据的对应关系所建立的线性模型，经计算得到所测青蒿中青蒿素的实际含量X(mg/g)。本发明简化了操作程序，缩短了提取时间，在1.5小时内就可完成青蒿素的含量测定，所需仪器简单、操作方便，节约了试剂、减小了污染；由于建立了相关的线性模型，保证了计算处理得到的青蒿素实际含量数据的可靠性，因此，本发明可以真正实现在青蒿药材收购现场进行青蒿素的含量快速检测。
文档编号G01N30/86GK1904591SQ20061009501
公开日2007年1月31日 申请日期2006年8月9日 优先权日2006年8月9日
发明者尚京川, 杨俊卿, 母昭德, 蒋青松, 周歧新 申请人:重庆医科大学