一种组合物及其在青蒿种子储藏中的应用的制作方法

本发明涉及种子贮藏领域，特别涉及一种组合物及其在青蒿种子储藏中的应用。

背景技术：

青蒿(Artemisiae annie L.)是我国传统的中药，属菊科艾属，其提取物之一青蒿素是治疗疟疾的最主要的有效的临床用药。药理学的深入研究表明，青蒿素及其衍生物是一种广谱性的天然药物。据统计，每年世界上有超过100万人死于疟疾。疟原虫耐药性，使得抗疟药物氯喹的药物效果受限,而青蒿素对疟疾具有低毒和速效的特点。

目前，青蒿素是公认有效的治疗疟疾首选药物，这使得提取青蒿素的原材料青蒿需求量非常大。青蒿萜类化合物的合成主要通过MVA和DXP两个途径，即甲羟戊酸(mevalonate pathway，MVA)途径和1-脱氧木酮糖5-磷酸合酶(1-deoxy-D-xylulose-5-phosphate synthase，DXS)或甲基赤藓醇4-磷酸(methylerythritol 4-phosphatepathway，MEP)DXP途径。

青蒿素化学结构含有过氧基团，是一种倍半萜内酯，青蒿素的多种衍生物如双氢青蒿素(dihydroanemisin)、青蒿琥酯(anesunatc)、蒿甲醚(ancmether)、蒿乙醚(aneether)，均是治疗疟疾的有效药物。研究表明，二氢青蒿素对大鼠C6细胞有选择性细胞毒作用，还可诱导肺癌细胞系PC-14细胞和SPC-A-1细胞凋亡。青蒿琥酯对人大肠癌细胞有抑制作用，能抑制大肠癌细胞增殖和促进凋亡。蒿甲醚、蒿乙醚和青篙琥酯作用于肿瘤细胞后，表达的mRNA与其对肿瘤细胞的抑制作用之间存在相关性。结果显示，青蒿素衍生物的药效作用方式与已知的抗癌药物不尽一致。随着对青蒿素类药物药理作用研究的不断深入，已证实其具有抗纤维化、抗弓形虫、抗疟、抗孕、抗血吸虫、肿瘤细胞毒性和抗心律失常等作用。虽然该类药物作用广泛，但其作用机制、特点和应用仍处于初级阶段，研究表明青蒿素可通过抑制肺组织局部炎性反应来减轻脓毒症大鼠的肺损伤。青蒿还含有挥发性成分，主要是挥发油包括篙酮、倍半褚醇、异篙酮、丁香烯、石竹烯氧化物、按油精、旅烯、左旋樟脑、龙脑等成分。其中，篙酮、樟脑、丁香烯异篙酮、龙脑等含量较高。挥发油具有抗菌消炎、解热镇痛、止咳平喘等功效。

鉴于青蒿素具有以上抗炎、抗肿瘤等多方面的药理作用，国内外市场对青蒿素的需求不断提高，培育青蒿素含量高的新品种成了当务之急。开展新品种的培育不仅需要优质的种子，同时也需要辅以适宜的储藏方法，才能提高青蒿种子的发芽率，新品种培育工作才能顺利进行。然而，传统的青蒿种子的储藏方法是将收获青蒿种子干燥后，置于常温、干燥的通风环境进行储藏，采用这种储藏方法青蒿种子虫咬、霉变较严重，导致青蒿种子发芽率极低，通常只有三成左右。

技术实现要素：

有鉴于此，本发明提供了一种组合物及其在青蒿种子储藏中的应用，以本发明提供的组合物提取获得的提取物处理青蒿种子后，发芽率相比传统的常温储藏方法可提高30～56％。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供的组合物，由包括如下重量份的原料制成：

在本发明的实施例中，组合物包括如下质量份的：

马利筋，为萝藦科马利筋亚科马利筋属马利筋Asclepias curassavica L.，属多年生宿根性亚灌木状草本植物，全草可入药。

毒堇，为锦葵科植物，是一种欧洲很常见的有毒香草《五十二病方》中有毒堇“叶实味苦”记载，本发明采用毒堇的叶片。

印第安眼草，又名哮喘草，为禾本科植物，印第安人常用来当烟草或茶叶，可治疗呼吸疾病。

彩叶芋，为天南星科彩叶芋属彩叶芋Caladium bicolosr，本发明采用彩叶芋的叶片。

络石，为夹竹桃科络石属络石Trachelospermum jasminoides(Lindl.)Lem.根、茎、叶、果实供药用，有祛风活络、利关节、止血、止痛消肿、清热解毒之效。本发明采用络石的叶片。

本发明将马利筋、毒堇、印第安眼草、彩叶芋、络石制成组合物。实验表明，将该组合物制成青蒿种子储藏剂，能够有效解决青蒿种子储藏过程中虫咬霉变的问题，大大提高青蒿种子的发芽率。

本发明所述的上述组合物，由蒸馏法制备得到，具体制备方法如下：

将马利筋、毒堇、印第安眼草、彩叶芋、络石粉碎，经灭菌、烘干后，加入乙醇水溶液浸泡，蒸馏后收集馏出液，获得组合物。

本发明中，所述粉碎至粒度为100目。

本发明中，所述乙醇水溶液中乙醇的体积分数为40％；所述马利筋、毒堇、印第安眼草、彩叶芋、络石质量之和与乙醇水溶液的质量比为1:25。

本发明中，所述浸泡的时间为2h～4h。在一些实施例中，浸泡的时间为3h。

本发明中，蒸馏的温度为80-120℃、时间为2-5h、压强为1520mmHg。

本发明还提提供了上述组合物在制备青蒿种子储藏剂中的应用。

本发明还一种青蒿种子储藏剂，包括本发明提供的组合物和双蒸水；所述组合物与双蒸水的体积比为1:1000。

本发明还提供了一种储藏青蒿种子的方法，采用本发明提供的青蒿种子储藏剂，按照青蒿种子与储藏剂的重量比为10：1～20进行喷雾处理，室内吹风阴干，用透气白纱布包裹，置于室温通风干燥的阴凉处。在一些具体实施例中，采用本发明提供的青蒿种子储藏剂时，按照青蒿种子与储藏剂的重量比为10：1、10:5、10：10、10:20进行喷雾处理。

本发明提供了包括马利筋、毒堇、印第安眼草、彩叶芋、络石的组合物及其应用，并提供了一种青蒿种子储藏剂以及青蒿种子的储藏方法。实验表明，本发明提供的青蒿种子储藏剂能够有效解决青蒿种子储藏过程中虫咬霉变的问题，大大提高青蒿种子的发芽率，相比传统的储藏方法可提高37％～57％。

附图说明

图1为本发明实施例5的青蒿种子处理剂处理不同采收时间的青蒿种子后的发芽情况。

具体实施方式

本发明公开了一种组合物及其应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

本发明采用的试材皆为普通市售品，皆可于市场购得。

下面结合实施例，进一步阐述本发明：

实施例1本发明组合物

备料：新鲜的马利筋、毒堇、印第安眼草、彩叶芋、络石，分别清洗、粉碎成为100目后烘干备用。

配比：将烘干后的马利筋300g、毒堇200g、印第安眼草300g、彩叶芋100g、络石100g，混匀。

灭菌：辐照法灭菌。

混料：在60℃下加热烘干2.5小时，得混合物。

蒸馏：将所述混合物置于蒸馏装置中，加入25kg体积分数为40％的乙醇水溶液，浸泡3小时，然后蒸馏(温度120℃、时间3h、压强780mmHg)，收集馏出液，得到组合物。

实施例2本发明组合物

备料：新鲜的马利筋、毒堇、印第安眼草、彩叶芋、络石，分别清洗、粉碎成为100目后烘干备用。

配比：将烘干后的马利筋450g、毒堇100g、印第安眼草250g、彩叶芋800g、络石120g，混匀。

灭菌：辐照法灭菌。

混料：在60℃下加热烘干3小时，得混合物。

蒸馏：将所述混合物置于蒸馏装置中，加入25kg体积分数为40％的乙醇水溶液，浸泡3小时，然后蒸馏(温度110℃、时间2h、压强1020mmHg)，收集馏出液，得到组合物。

实施例3本发明组合物

备料：新鲜的马利筋、毒堇、印第安眼草、彩叶芋、络石，分别清洗、粉碎成为100目后烘干备用。

配比：将烘干后的马利筋150g、毒堇300g、印第安眼草350g、彩叶芋120g、络石80g，混匀。

灭菌：辐照法灭菌。

混料：在70℃下加热烘干2小时，得混合物。

蒸馏：将所述混合物置于蒸馏装置中，加入25kg体积分数为40％的乙醇水溶液，浸泡3小时，然后蒸馏(温度90℃、时间2.5h、压强840mmHg)，收集馏出液，得到组合物。

实施例4本发明组合物

备料：新鲜的马利筋、毒堇、印第安眼草、彩叶芋、络石，分别清洗、粉碎成为100目后烘干备用。

配比：将烘干后的马利筋450g、毒堇100g、印第安眼草450g、彩叶芋80g、络石120g，混匀。

灭菌：辐照法灭菌。

混料：在50℃下加热烘干3小时，得混合物。

蒸馏：将所述混合物置于蒸馏装置中，加入30kg体积分数为40％的乙醇水溶液，浸泡3小时，然后蒸馏(温度100℃、时间3.5h、压强960mmHg)，收集馏出液，得到组合物。

实施例5青蒿种子储藏剂

取实施例1制得的组合物100mL，与100L双蒸水混合制得青蒿种子储藏剂，塑料袋分装成500g。

实施例6青蒿种子储藏剂

取实施例2制得的组合物100mL，与100L双蒸水混合制得青蒿种子储藏剂，塑料袋分装成500g。

实施例7青蒿种子储藏剂

取实施例3制得的组合物100mL，与100L双蒸水混合制得青蒿种子储藏剂，塑料袋分装成500g。

实施例8青蒿种子储藏剂

取实施例4制得的组合物100mL，与100L双蒸水混合制得青蒿种子储藏剂，塑料袋分装成500g。

实施例9发芽对比试验

试验组：10月上旬采收青蒿种子，将采收后2周的青蒿种子与本发明实施例5～8制备的青蒿种子处理剂按照质量比为10:1、10:5、10：10、10:20喷雾处理，室内吹风阴干，用透气白纱布包裹，置于室温通风干燥的阴凉处进行储藏。

对照组：采用同重量双蒸水对核桃种子进行喷雾处理，室内吹风阴干，用透气白纱布包裹，置于室温通风干燥的阴凉处进行储藏。

次年3月下旬---4月中旬进行发芽试验。试验方法：选取温、光、水、肥和土条件一致的田地2块，面积均为0.1亩。1块播种本发明实施例5～8所述的青蒿种子处理剂处理的青蒿种子，另外1块播种同重量双蒸水处理的青蒿种子。结果如表1所示。

表1发芽率比较

结果显示，本发明实施例5～8提供的青蒿种子处理剂在不同的处理浓度下，对采收后两周的青蒿种子进行处理后，均能够大大提高青蒿种子的发芽率，相比对照组发芽率可提高37％～57％。

实施例10不同采收时间的青蒿种子处理后的发芽率比较

分别将刚采收、采收后1周、采收后2周和采收后3周的青蒿种子与本发明实施例5制备的青蒿种子处理剂按照质量比为10:1、10:5、10：10、10:20喷雾处理，室内吹风阴干，用透气白纱布包裹，置于室温通风干燥的阴凉处进行储藏。

对照组：采用同重量双蒸水对核桃种子进行喷雾处理，室内吹风阴干，用透气白纱布包裹，置于室温通风干燥的阴凉处进行储藏。

次年3月下旬---4月中旬进行发芽试验。试验方法：选取温、光、水、肥和土条件一致的田地2块，面积均为0.1亩。1块播种本发明实施例5所述的青蒿种子处理剂处理的青蒿种子，另外1块播种同重量双蒸水处理的青蒿种子，出芽情况如图1所示。

由图1可知，本发明提供的青蒿种子储藏剂对不同采收时间(刚采收、采收后1周、采收后2周、采收后3周)的青蒿种子进行处理后，均能够有效解决青蒿种子储藏过程中虫咬霉变的问题，大大提高青蒿种子的发芽率，相比对照组可提高30％～56％。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。