专利名称：生物复合酶法提取青蒿素的工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种用生物复合酶法从青蒿中提取高纯度青蒿素的方法。
背景技术：
青蒿素是从菊科植物艾属的黄花蒿(Artemisiaarmua L俗称青蒿)中提取的一种 高效、安全的抗虐药。目前青蒿素的生产方法主要有溶剂汽油法、丙酮提取_柱层析法、稀醇法、甲醇提 取-石油醚萃取法、超临界萃取法、微波萃取法等。以上这些方法均存在一定程度的问题， 如有的提取收率低(传统方法在80%左右)，有的生产周期长，溶剂损耗大，有的对设备有 特殊要求，生产成本高等。
发明内容
本发明所用设备简单，生产流程短，溶剂消耗少，生产成本低，收率较传统方法大 巾畐提尚。本发明采用生物酶解技术，破坏细胞壁等使青蒿素提取率提高10%，破坏蜡油成 分，避免了脱蜡或柱层析操作，适宜溶剂提取浓缩即可得青蒿素结晶。本发明通过以下技术方案予以实现生物复合酶法提取青蒿素的工艺，首先在青蒿叶面喷洒青蒿重量的0. 0.3%的生物复合酶，堆积在温度45士2°C的暗室内，堆头上面覆盖一层塑料薄膜使之发酵 1 2天。将发酵酶解好的青蒿叶片晾干或烘干；将青蒿干叶投入提取罐内，每次加5倍量 的溶剂A，提取3次，每次2小时，提取温度60 士 5°C;合并提取液过滤，滤液浓缩至原体积的 5% 10%，并回收溶剂A ；浓缩液静置，自然冷却结晶，待溶液温度为30°C以下时，滤取结 晶并收集滤液，滤饼(粗品结晶)用提取溶剂A洗涤2次后抽干，入烘箱中干燥，滤液投入 提取罐中，作下一批生产的提取溶剂。将干燥的粗品结晶用100倍量溶剂B溶解，滤过，浓 缩至原体积的10%并回收溶剂B ；浓缩液静置冷却结晶，待溶液温度为30°C以下时，滤取结 晶并收集母液，结晶以溶剂B洗涤3次，抽干，入烘箱中干燥，即得含量99%以上的青蒿素； 母液依同法反复浓缩冷却析晶得99%以上的青蒿素。所述的生物复合酶包括为纤维素酶，脂肪酶，果胶酶等两种或两种以上的组合。所述的溶剂A为石油醚(30 60，60 90，90 120)，六号溶剂油，120号汽油， 正己烷，乙酸乙酯等。所述的溶剂A溶剂B为高浓度酒精。有益效果本发明摆脱了一般方法中对提取环境的苛求，而且能有效提高青蒿素的提取率， 使得成品率较传统方法提高了 10%左右，并避免使用柱层析法纯化，大大简化了生产工艺， 并可显著减少有机溶剂的消耗。
具体实施例方式下面举实例对本发明进行详细描述。实施例一为对低含量草的青蒿素提取青蒿草干叶500kg(青蒿素含量0. 49% )，均勻喷洒800g生物复合酶配制的一定 浓度的溶液，堆积在温度44°C的暗室内，堆头上面覆盖一层塑料薄膜使之发酵2天，叶片为 黑色时取出晾干，投入多功能提取罐内，用乙酸乙酯65°C提取3次，每次2hr，提取溶剂用 量2500L/次，合并提取液浓缩至约300L时放料至粗品结晶罐自然冷却结晶，监测结晶溶液 30°C时，放罐抽滤得粗品结晶2. 74kg。同样方法再生产3批。4批共投青蒿2013kg，得粗品结晶10. 1kg，用1000L95%乙醇溶解，过滤，滤液浓缩 至100L，放至精品结晶罐冷却结晶，监测结晶溶液30°C时滤取针状结晶，母液浓缩至原体 积的一半，同样放置结晶，如此反复四次，使绝大部分青蒿素结晶析出。合并青蒿素结晶烘 干，称重得9. 02kg,含量99. 0 %。青蒿素得率90. 5 %。实施例二为对中等含量草的青蒿素提取青蒿草干叶503kg (青蒿素含量0. 74% )，均勻喷洒600g生物复合酶配制的一定 浓度的溶液，堆积在温度45°C的暗室内，堆头上面覆盖一层塑料薄膜使之发酵1天半。叶片 为黑色时取出晾干，投入多功能提取罐内，用六号溶剂油63°C提取3次，每次2hr，提取溶剂 用量2500L/次，合并提取液浓缩至约500L时放料至粗品结晶罐自然冷却结晶，监测结晶溶 液30°C时，放罐抽滤得粗品结晶3. 74kg。同样方法再生产3批。4批共投青蒿2005kg，得粗品结晶15. 0kg，用1500L90 %乙醇溶解，过滤，滤液浓 缩至150L，放至精品结晶罐冷却结晶，Shr后滤取针状结晶，母液浓缩至原体积的一半，同 样放置结晶，如此反复四次，使绝大部分青蒿素结晶析出。合并青蒿素结晶烘干，称重得 13. 5kg，含量99. 4%。青蒿素得率90. 4%。实施例三为对高含量草的青蒿素的提取青蒿草干叶501kg(青蒿素含量0. 93% )，均勻喷洒500g生物复合酶配制的一定 浓度的溶液，堆积在温度44°C的暗室内，堆头上面覆盖一层塑料薄膜使之发酵1天。叶片为 黑色时取出晾干，投入多功能提取罐内，用120号汽油65°C提取3次，每次2hr，提取溶剂用 量2500L/次，合并提取液浓缩至约500L时放料至粗品结晶罐自然冷却结晶，监测结晶溶液 30°C时，放罐抽滤得粗品结晶4. 42kg。同样方法再生产3批。4批共投青蒿2008kg，得粗品结晶18. 2kg，用1800L95%乙醇溶解，过滤，滤液浓缩 至180L，放至精品结晶罐冷却结晶，监测结晶溶液30°C时滤取针状结晶，母液浓缩至原体 积的半，同样放置结晶，如此反复四次，使绝大部分青蒿素结晶析出。合并青蒿素结晶烘干， 称重得17. 1kg，含量99. 5%。青蒿素得率91. 1%。以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术 人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本 发明的原理，在不脱离本发明精种和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变 化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其 等效物界定。
权利要求
生物复合酶法提取青蒿素的工艺，其特征在于，按下述步骤进行a)在青蒿叶面喷洒青蒿重量的0.1％～0.3％的生物复合酶，堆积在温度45±2℃的暗室内，堆头上面覆盖一层塑料薄膜使之发酵1～2天；b)将发酵酶解好的青蒿叶片晾干或烘干；c)将青蒿干叶投入提取罐内，每次加5倍量的溶剂A，提取3次，每次2小时，提取温度60±5℃；d)合并提取液过滤，滤液浓缩至原体积的5％～10％，并回收溶剂A；e)将d)项的浓缩液静置，自然冷却结晶，待溶液温度为30±1℃时；滤取结晶并收集滤液，滤饼(粗品结晶)用c)中的提取溶剂A洗涤2次后抽干，送入烘箱中干燥，滤液投入提取罐中，作下一批生产的提取溶剂；f)将e)项干燥的粗品结晶用100倍溶剂B溶解，滤过，浓缩至原体积的10％并回收溶剂B；g)将f)中的浓缩液静置冷却结晶，待溶液温度为30±1℃时，滤取结晶并收集母液，结晶以溶剂B洗涤3次，抽干，送入烘箱中干燥，即得含量99％以上的青蒿素；母液依同法反复浓缩冷却析晶得99％以上的青蒿素。
2.根据权利要求1所述的生物复合酶法提取青蒿素的工艺，其特征在于所述的生物复 合酶包括为纤维素酶，脂肪酶，果胶酶等两种或两种以上的组合配方。
3.根据权利要求1所述的生物复合酶法提取青蒿素的工艺，其特征在于所述的溶剂A 为石油醚，六号溶剂油，120号汽油，正己烷，乙酸乙酯等；溶剂B为高浓度酒精。
全文摘要
生物复合酶法提取青蒿素的工艺，用一种生物复合酶制剂从青蒿叶中提取高纯度青蒿素，使青蒿素提取得率大幅提高。其特征在于在青蒿草干叶上喷洒一定量复合酶溶液，堆积，使青蒿叶中的细胞壁，纤维组织及植物蜡油被酶分解，再用有机溶剂提取，浓缩结晶，适当溶剂重结晶干燥从而得到高纯度青蒿素。本发明成品率较传统方法提高了10％左右，并避免使用柱层析法纯化，大大简化了生产工艺，并可显著减少有机溶剂的消耗。
文档编号C07D493/20GK101962386SQ20101050856
公开日2011年2月2日 申请日期2010年10月15日 优先权日2010年10月15日
发明者肖文中, 黄凯 申请人:肖文中