专利名称：一种从多花蒿中提取阿格拉宾的方法
技术领域：
本发明涉及天然产物的提取方法，具体涉及一种从多花蒿中提取阿格拉宾的方法。
背景技术：
阿格拉宾(Arglabin，结构式如式I所示)，化学名为1，10β -环氧-愈创-3 G)-烯-6，12-内酯。阿格拉宾首先是由哈萨克斯坦科学家S. Μ.阿德克诺夫从当地苦艾属植物亮绿蒿的花瓣和叶子提取得到的，并研究发现该化合物具有抗肿瘤活性。1996年，阿格拉宾二甲胺盐酸盐冻干制剂由哈萨克斯坦塔比法尔公司开发在哈萨克斯坦共和国上市，随后该药又陆续在前苏联的一些国家上市，主要用于治疗肝癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌。由哈萨克斯坦塔比法尔公司申请的W09848789中记载了以亮绿蒿为原料提取阿格拉宾的方法。该专利首先对采用多种溶剂如水、石油醚-乙醚1 1、苯、乙醚、氯仿、乙醇等对亮绿蒿的提取效率进行了考察，结果显示采用氯仿作为溶剂，提取效率最高；其次为乙醇，乙醚、苯、石油醚-乙醚、乙醚、水。该专利实施例以氯仿作为提取溶剂进行了阿格拉宾的制备，提取过程如下采用氯仿为溶剂对亮绿蒿药材进行逆流加热提取，提取物经醇沉处理后，得到的提取物再上硅胶柱经苯洗脱、将得到的阿格拉宾粗品进行正己烷重结晶， 得阿格拉宾单体，得率为0. 27%。本专利记载的植物材料亮绿蒿分布于我国新疆，资源匮乏，不能满足药物开发需要；而且本专利方法需用到特殊的逆流提取设备，设备成本高；所优选提取剂、洗脱剂采用高毒性的氯仿和苯，不利于工人健康和环保。 香港大学的 Ho-Fao Wong 禾口 Geoffrey D. Brown 在 Dimeric guaianolides and a fulvenoguaianolide from Artemisia myriantha(Journal of Natural Products. 2002,
65(4) :481-486)中报道了采用多花蒿为原料，用二氯甲烷充氮气条件下室温提取，得到的提取物上硅胶柱经正己烷、乙酸乙酯、甲醇洗脱，所得乙酸乙酯部分流份经正相液相分离， 得阿格拉宾单体，得率为0.037%。虽然该方法采用了在我国资源相对丰富的多花蒿为原料，但其收率太低，而且所用溶剂二氯甲烷毒性大。 PCT申请W02008035958中报道了以亮绿蒿为原料，用超临界二氧化碳提取方法 (压力为150士2-105帕，温度为60°C )获得阿格拉宾的方法。该方法可将阿格拉宾的含量提高到0. 8%。但是该方法需要用到特殊的提取设备，无疑增加了生产成本。
发明内容
从现有技术报道来看，阿格拉宾主要存在于亮绿蒿和多花蒿中，并且在亮绿蒿中的含量明显高于多花蒿，但亮绿蒿在中国分布很少，不能满足药物开发的需要，而依照现有的以多花蒿为原料提取制备阿格拉宾的工艺，远远不能满足规模化生产的需要。为了解决现有技术中存在的问题，本发明人以在中国植物来源相对丰富的多花蒿为原料，对阿格拉宾的提取工艺进行了研究。经过大量的试验研究，发明人发现在使用普通提取设备的情况下，采用多花蒿为植物来源，可与采用亮绿蒿为植物来源得到收率相当甚至更高的阿格拉宾，且提取方法简单、环保，生产成本低。因此，本发明提供了一种从多花蒿中提取阿格拉宾的方法，所述方法是将多花蒿药材粉碎后，用乙醇提取，然后进行预分离，过滤，浓缩，最后将浓缩物进行分离、纯化，得到阿格拉宾，所述分离采用硅胶柱分离，所用洗脱系统为石油醚-乙酸乙酯系统、正己烷-乙酸乙酯系统、石油醚-丙酮系统、正己烷-丙酮系统。其中所述乙醇选自30 100%的乙醇水溶液，优选为95%的乙醇水溶液。所用乙醇与药材的料液比(V/W)为任何适宜比例，优选为6 12倍。提取温度为任何适宜温度，优选为20-100°C，更优选为70-90°C。所述洗脱系统优选为石油醚-乙酸乙酯系统，更优选为9 1(V/V)的石油醚-乙酸乙酯系统。所述预分离可采用以下任意一种方法进行醇沉处理、水沉处理、水沉和醇沉混合处理、醇沉和有机溶剂萃取混合处理，优选采用水沉和醇沉混合处理以及醇沉和有机溶剂萃取混合处理，更优选采用醇沉和水沉混合处理。其中，所述水沉和醇沉混合处理可以任选先后顺序进行，即可以将乙醇提取物进行水沉处理后再经醇沉处理，也可以将乙醇提取物先经醇沉处理再进行水沉处理；所述醇沉和有机溶剂萃取混合处理也可以任选先后顺序进行，即可以将乙醇提取物进行醇沉处理后再进行有机溶剂萃取，也可以将乙醇提取物先进行有机溶剂萃取再进行醇沉处理。所述醇沉处理所用醇为任何适宜比例的乙醇-水混合液，优选为60 80%的乙醇，更优选为70%的乙醇；所述萃取的有机溶剂选自乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷中任意一种，优选为乙酸乙酯。所述纯化可采用任何适宜的方式进行，优选采用重结晶方法进行纯化，所用重结晶溶剂选自正己烷、石油醚、乙醇、甲醇、异丙醇、丙酮、水中的一种或两种以上的混合溶剂； 当预分离方法为醇沉处理、水沉和醇沉混合处理、醇沉和有机溶剂萃取混合处理时，重结晶溶剂为正己烷或石油醚；当预分离方法为水沉处理时，所用重结晶溶剂为正己烷或石油醚与体积比为11的乙醇-水。为了得到本发明的阿格拉宾提取方法，发明人主要进行了如下研究采集5月份生长的多花蒿，晒干后粗碎机粉碎，备用。1、提取溶剂的选择每份取IOg药材，分别采用石油醚、正己烷、二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙醇、甲醇几种溶剂，每个处理两个重复，加入15倍于药材(V/W)的溶剂，冷浸提取48h，将提取液过滤，浓缩后用甲醇定容至250ml，HPLC检测其含量(g/g生药)，实验结果如
图1所示。 实验结果显示乙醇与甲醇提取效率最高，考虑溶剂毒性和回收利用等因素，选择乙醇作为提取溶剂。2、乙醇浓度的选择每份取IOg药材，分别加入IOOml 30%、50%、70%、80%、90%和95%浓度的乙醇进行回流提取，每个浓度两个重复，加热回流提取三次，每次lh，溶剂量分别为10、8、8倍于生药(V/W)，将提取液合并浓缩后定容至250ml，HPLC检测，结果如图2所示。实验结果显示30 95%乙醇浓度中，95%乙醇提取效率最高。3、液料比的选择每份称取IOg药材，置于圆底烧瓶中，每个实验两个重复，分别加入生药(V/W)量的6倍、8倍、10倍和12倍的95%乙醇，回流提取lh，提取液浓缩后定容至250ml，HPLC检测阿格拉宾含量，结果如图3所示。实验结果表明液料比越高，阿格拉宾的提取效率越高。4、多花蒿乙醇提取物预分离方法的考察①醇沉处理取乙醇提取物77g，采用4倍于生药(V/W)的乙醇溶解提取物后加水稀释至醇浓度为70 %，沉淀24h后过滤，得到滤液，减压蒸干，得到干物质约60. Sg, 95%乙醇定容，HPLC检测。②水沉处理取乙醇提取物77g，采用2倍于生药的水对提取物进行溶解后静置 24h,得到沉淀约36g，用95%乙醇溶解定容，HPLC检测。③先醇沉处理再水沉处理取乙醇提取物77g，采用4倍于生药(V/W)的乙醇溶解提取物后加水稀释至醇浓度为70%，沉淀24h后过滤，得到滤液，浓缩后采用2倍于生药的水进行水沉处理，得到沉淀约20g，用95%乙醇溶解定容，HPLC检测。④先水沉处理再醇沉处理取乙醇提取物77g，采用2倍于生药的水对提取物进行溶解后静置Mh，得到沉淀，将沉淀加入4倍于生药的乙醇进行溶解后，加水稀释至醇浓度为70%，静置24h后过滤，得到滤液，减压浓缩，称重，约20. 5g，95%乙醇定容，HPLC检测。⑤醇沉后乙酸乙酯萃取取乙醇提取物77g，采用4倍于生药(V/W)的乙醇溶解提取物后加水稀释至醇浓度为70%，沉淀24h后过滤，得到滤液，浓缩后采用2倍于生药的水进行溶解，溶液采用等量的乙酸乙酯进行萃取三次，得到萃取液，浓缩后(约20. 3g) 95 %乙醇定容，HPLC检测。⑥乙酸乙酯萃取后醇沉取乙醇提取物77g，加入适量水溶解后，用等量的乙酸乙酯进行萃取三次，将得到的萃取液浓缩后，加入4倍于生药(V/W)的乙醇溶解提取物后加水稀释至醇浓度为70%，沉淀24h后过滤，得到滤液，减压干燥，得到19. Sg提取物，95%乙醇定容后，HPLC检测。⑦醇沉后氯仿萃取取乙醇提取物77g，采用4倍于生药(V/W)的乙醇溶解提取物后加水稀释至醇浓度为70%，沉淀24h后过滤，得到滤液，浓缩后采用2倍于生药的水进行溶解，溶液采用等量的氯仿进行萃取三次，得到萃取液，浓缩后(约19. 5g)95%乙醇定容， HPLC检测。⑧氯仿萃取后醇沉取乙醇提取物77g，加入适量水溶解后，用等量的氯仿进行萃取三次，将得到的萃取液浓缩后，加入4倍于生药(V/W)的乙醇溶解提取物后加水稀释至醇浓度为70 %，沉淀24h后过滤，得到滤液，减压干燥，得到19. 3g提取物，95 %乙醇定容后，HPLC检测。实验结果如图4所示，实验结果表明几种预分离方法中，只采用水沉处理可以去除大部分的杂质，但是该方法不能除去影响阿格拉宾分离的油脂类物质，在后续分离过程中需要再进行除油处理后才能得到阿格拉宾，无疑会增加阿格拉宾的损失率；其它处理方法获得的提取物含量相当，但只采用醇沉的方法虽然除去了油脂类物质，但获得的提取物中含有大量水溶性物质，增加了后续分离的工作量(如增加硅胶的使用量和分离次数)。因此，本发明优选采用水沉和醇沉混合处理方法以及醇沉和有机溶剂萃取混合处理方法；考虑到萃取方法涉及使用有机溶剂，增加了安全隐患，因此，更优选采用水沉和醇沉混合处理方法。5、乙醇提取物醇沉处理中乙醇浓度考察分别采用60^^70^^80%作为最终醇浓度对醇沉实验中乙醇浓度进行考察。实验采用4倍于生药的乙醇(L/kg)进行溶解后，加水稀释至相应的浓度。室温静置1天，过滤，HPLC检测滤液中阿格拉宾含量，与进行醇沉处理前提取物中的阿格拉宾含量进行对比， 实验结果如表1所示表1醇沉处理中乙醇浓度对阿格拉宾含量的影响
权利要求
1.一种从多花蒿中提取阿格拉宾的方法，其特征在于将多花蒿药材粉碎后，用乙醇提取，然后进行预分离，过滤，浓缩，最后将浓缩物进行分离、纯化，得到阿格拉宾，所述分离采用硅胶柱分离，所用洗脱系统为石油醚-乙酸乙酯系统、正己烷-乙酸乙酯系统、石油醚-丙酮系统、正己烷-丙酮系统。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所用洗脱系统为体积比9 1的石油醚-乙酸乙酯系统。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述预分离方法选自醇沉处理、水沉处理、水沉和醇沉混合处理、醇沉和有机溶剂萃取混合处理中的任意一种。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于所述水沉和醇沉混合处理为先水沉处理再醇沉处理。
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于所述水沉和醇沉混合处理为先醇沉处理再水沉处理。
6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于所述醇沉和有机溶剂萃取混合处理为先醇沉处理再有机溶剂萃取。
7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于所述醇沉和有机溶剂萃取混合处理为先有机溶剂萃取再醇沉处理。
8.根据权利要求3或6或7所述的任意一种方法，其特征在于所述萃取的有机溶剂为乙酸乙酯。
9.根据权利要求3所述的方法，其特征在于所述纯化用重结晶方法进行纯化，当预分离方法为醇沉处理、水沉和醇沉混合处理、醇沉和有机溶剂萃取混合处理时，重结晶溶剂为正己烷或石油醚。
10.根据权利要求3所述的方法，其特征在于所述纯化用重结晶方法进行纯化，当预分离方法为水沉处理时，所用重结晶溶剂为正己烷或石油醚与体积比为1 1的乙醇-水。
全文摘要
本发明涉及一种从多花蒿中提取阿格拉宾的方法，该方法是将多花蒿药材粉碎后，用乙醇提取，然后进行预分离，过滤，浓缩，最后将浓缩物进行分离、纯化，得到阿格拉宾。其中，所述分离采用硅胶柱分离，所用洗脱系统为石油醚-乙酸乙酯系统、正己烷-乙酸乙酯系统、石油醚-丙酮系统、正己烷-丙酮系统；预分离可采用醇沉处理、水沉处理、水沉和醇沉混合处理、醇沉和有机溶剂萃取混合处理等方法进行。本发明方法所用原料植物来源丰富，方法简单、环保、生产成本低，更适合于规模化工业生产。
文档编号C07D493/10GK102372723SQ20101026019
公开日2012年3月14日 申请日期2010年8月19日 优先权日2010年8月19日
发明者刘翠艳, 李晓花, 李清娟, 白晓雪, 郭文敏, 陈卫平 申请人:石药集团中奇制药技术(石家庄)有限公司