一种新型水溶性纳米粒子的制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种新型水溶性纳米粒子的制备方法，它是以果胶（PET）为载体，果胶的羧基与熊果酸（UA）的羟基酯化形成高分胶束，再自组装形成纳米粒子PET?UA·NPs，自组装过程中通过包裹双氢青蒿素疏水药物或10?羟基喜树碱，形成PET?UA(DHA)·NPs或PET?UA(HCPT)·NPs，形成具有核壳结构的纳米粒子。本发明的水溶性纳米粒子的载药量可调，靶向性强，较好的稳定性，生物相容性好，毒性低，具有缓释功能的纳米药物。本发明属于生物制药和纳米技术领域，制备工艺简单，操作方便，周期短。
【专利说明】
一种新型水溶性纳米粒子的制备方法
技术领域
[0001] 本发明属于生物制药和纳米技术领域，涉及药物递送系统，具体涉及一种新型水 溶性纳米粒子的制备方法。
【背景技术】
[0002] 熊果酸(Ursolic acid，简称UA)、双氢青蒿素(Dihydroartemisinin，简称DHA)难 溶于水，直接口服对身体有一定程度的毒副作用，不能针对单一的癌症进行治疗，对癌细胞 无识别能力，杀死癌细胞的同时也杀死正常细胞，而且生物利用度较差，这些都限制了 UA在 药学领域的广泛应用，因此，解决其水溶性的问题、增加药物稳定性、提高对单一癌细胞缓 释杀伤能力是UA临床应用的关键。
[0003] 果胶(Pectin)是存在于植物细胞壁中的多糖类大分子物质。广泛存在于苹果、柑 橘等水果中，易于提取，与组织器官有很好的相容性，吸收好，无毒副作用，近年来，针对果 胶的巨大医学潜力引起了国内外很多学者对果胶的广泛研究，大多是以辅料的形式携载药 物到达病灶或通过改性的方法递送药物，其大分子的扩散性差、易聚集等因素限制果胶的 生物医药利用。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种新型水溶性纳米粒子的制备方 法，PET-UA在水介质中可自组装形成纳米粒子，解决UA的水溶相差，生物利用度低等问题， 自组装过程同时包裹DHA或HCPT，形成PET-UA(DHA).NPs和PET-UA(HCPT).NPs，增大系统的 载药量，包裹的药物有很宽的选择，大量的疏水性药物都以实现自组装的同时包裹药物，包 裹的药物前后对纳米粒子的粒径影响不大，使用果胶为药物载体，靶向性好，载药量高，避 免药物的不完全释放和突释情况对患者带来的毒副作用。
[0005] -种新型水溶性纳米粒子的制备方法的技术方案如下： 一种新型水溶性纳米粒子的制备方法，其特征在于，以果胶(PET)为载体，果胶的羧基 与熊果酸(UA)的羟基酯化形成高分胶束，再自组装形成纳米粒子PET-UA · NPs，自组装过程 中通过包裹双氢青蒿素疏水药物或10-羟基喜树碱，形成PET-UA(DHA) · NPs或PET-UA (HCPT)· NPs，形成具有核壳结构的纳米粒子。所述的新型水溶性纳米粒子的具有如下式所 示的结构：
式中，所述果胶酯化度50~75%。
[0006] 所述的一种新型水溶性纳米粒子的制备方法，其纳米粒子中UA的载药量为0. 1%-12%，纳米粒子的质量百分比0.01%-90%，纳米粒子半径10-200nm。
[0007] 本发明所述的一种新型水溶性纳米粒子的制备方法，包括以下步骤： (1) 取一定量的果胶，缓慢加入冰醋酸、乙酸酐和硫酸，冰浴下反应一段时间，然后升温 至50°C，搅拌至溶液澄清，混合物旋蒸，乙醇洗至中性，冷冻干燥，得到乙酰化果胶粉末A; (2) 取一定量的步骤（1)中的粉末A溶于二甲基亚砜(DMS0)，果胶与DMS0的固液比1:20 ~l:50(g/ml)，加入激活剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)，催化剂4-二甲氨基吡啶(DMAP)，按照一定比例加入双氢青蒿素，搅拌反应30~50h，得到反应混合液； (3 )对(2 )中反应后的药物进行纯化，向反应后的混合液中加入3V的乙醚/乙醇（1:1，v/ v)沉淀，4000rpm离心去上清液，乙醚/乙醇洗涤沉淀5次，离心除去上清液，45 °C下真空干燥 24h，收集粉末B; (4)取30mg(3)中的粉末B溶于5ml二甲基亚砜，溶解30min，逐滴滴入高速搅拌的100ml 去离子水中，搅拌5min，得到的纳米粒子溶液在roS溶液中透析12h，每2h换一次透析液，透 析膜中的透析液冷冻干燥，得到粉末C，包裹过程是取25mg( 3)中冷干物，与5mgDHA或5mg HCPT混合，溶于搅拌的二甲基亚砜中，溶解30min，逐滴滴入高速搅拌的100ml去离子水中， 搅拌5min，得到的纳米粒子溶液在PBS溶液中透析12h，每2h换一次透析液，透析膜中的透析 液冷冻干燥，分别得到粉末D和E。
[0008] 优选地，步骤(2 )所述的UA与EDC、DMAP的摩尔比为1:0.8:0.2; 优选地，步骤(4)所述的高聚物PET-UA与DHA和HCPT的摩尔比为1:0.5~1:1和1:0.1~ 1:2； 优选地，步骤(4)所述的UA的载药量为0.1%-12%，纳米粒子的质量百分比0.01%-90%，纳 米粒子半径1 〇_200nm; 相对现有技术，本发明具有以下有益效果： 本发明的水溶性纳米粒子的载药量可调，靶向性强，较好的稳定性，生物相容性好，毒 性低，具有缓释功能的纳米药物。
【附图说明】
[0009] 图1为合成高分子化合物PET-UA的核磁图 图2为纳米粒子的透射电镜形貌图。
【具体实施方式】
[0010]下面结合【具体实施方式】，对本发明作进一步说明。
[0011] 实施例1、一种新型水溶性纳米粒子的制备方法： (l)PET的乙酰化 取lg的PET(酯化度50%~80%)，缓慢加入25ml冰醋酸、15ml乙酸酐和0.6ml硫酸，冰浴下 反应一段时间，然后升温至50°C，搅拌至溶液澄清，混合物旋蒸，乙醇洗至中性，冷冻干燥， 得到乙酰化果胶粉末A。
[0012] (2)PET-UA 的合成 取（1)中PET O.lg，缓慢加入含4ml吡啶的25ml圆底烧瓶中，并超声lOmin，搅拌溶解 20min，然后在溶液中加入O.lg激活剂1-(3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐 化0〇、0.028催化剂4-二甲氨基吡啶(0嫩?），搅拌301^11，加入0.18的1^，水浴反应4811，得到 PET-DHA聚合物混合液。
[0013] (3)PET-UA 的纯化 对(2 )中反应后药液进行纯化，向反应后的混合液中加入3V的乙醚/乙醇（1:1，v/v)沉 淀，4000rpm离心去上清液，乙醚/乙醇洗涤沉淀5次，离心除去上清液，45 °C下真空干燥24h， 收集粉末B; (4)PET-UA与DHA和HCPT的自组装 取30mg(3冲的粉末B溶于5ml二甲基亚砜，溶解30min，逐滴滴入高速搅拌的100ml去离 子水中，搅拌5min，得到的纳米粒子溶液在PBS溶液中透析12h，每2h换一次透析液，透析膜 中的透析液冷冻干燥，得到粉末C，包裹过程是取25mg (3 )中冷干物，与5mgDHA或5mg HCPT混 合，溶于搅拌的二甲基亚砜中，溶解30min，逐滴滴入高速搅拌的100ml去离子水中，搅拌 5min，得到的纳米粒子溶液在PBS溶液中透析12h，每2h换一次透析液，透析膜中的透析液冷 冻干燥，分别得到粉末D和E粒径大小为20~lOOnm。
[0014] 实施例2、一种新型水溶性纳米粒子的制备方法： 在本实例中，通过与实施例1相同的合成方法及步骤，PET 0.1g，UA 0.5g，测得粒径大 小为20~80nm〇
[0015] 实施例3、一种新型水溶性纳米粒子的制备方法： 在本实例中，通过与实施例1相同的合成方法及步骤，PET 0.1g，UA 0.05g，测得粒径大 小为30~130nm。
【主权项】
1. 一种新型水溶性纳米粒子的制备方法，其特征在于，W果胶(PET)为载体，果胶的簇 基与熊果酸(UA)的径基醋化形成高分胶束，再自组装形成纳米粒子阳T-UA ? NPs，自组装过 程中通过包裹双氨青葛素疏水药物或10-径基喜树碱，形成PET-UA(DHA) ? NPs或PET-UA 化CPT )? NPs,形成具有核壳结构的纳米粒子。2. 所述的新型水溶性纳米粒子的具有如式I所示的结构：式中，所述果胶醋化度50~75%。3. 如权利要求1所述的一种新型水溶性纳米粒子的制备方法，其特征在于，步骤如下： (1) 将一定量的果胶(PET)与冰醋酸、乙酸酢和硫酸在冰浴下反应，然后升溫至50°C，揽 拌至溶液澄清，混合物旋蒸，乙醇洗至中性，冷冻干燥，得到乙酷化果胶粉末A; (2) 取一定量的步骤（1)中的粉末A溶于二甲基亚讽(DMSO)，果胶与DMSO的固液比1:20 ~l:50(g/ml)，加入激活剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)，催化剂4- 二甲氨基化晚(DMAP)，按照一定比例加入双氨青葛素，揽拌反应30~50h，得到反应混合液； (3) 将步骤(2)中得到的反应混合液加乙酸/乙醇（1:1，v/v)沉淀，离屯、，多次洗涂，沉淀 物透析，冷冻干燥，得到粉末B(PET-UA); (4) 将步骤(3)中粉末B和双氨青葛素和10-径基喜树碱分别溶于二甲基亚讽，并滴入去 离子水中，所得纳米粒子溶液透析，透析过程每化换一次PBS液，冷冻干燥，得到所述纳米粒 子阳T-UA(DHA) ? NPs和阳T-UA化CPT )? NPs。4. 如权利要求1、2所述的一种新型水溶性纳米粒子的制备方法，其特征在于，所述的UA 与邸C、DMAP的摩尔比为1:0.8:0.2,高聚物阳T-UA与DHA和肥PT的摩尔比为1:0.5~1:巧口 1: 0.1 ~1:2。5. 如权利要求1、2、3所述的一种新型水溶性纳米粒子的制备方法，其特征在于，其纳米 粒子中UA的载药量为0.1%-12%，纳米粒子的质量百分比0.01%-90%，纳米粒子半径10- 200nm。6. 如权利要求1、2、3、4所述的一种新型水溶性纳米粒子的制备方法，具有缓释功能、癌 祀向性及稳定的粒径大小。
【文档编号】A61K9/51GK105902518SQ201610384851
【公开日】2016年8月31日
【申请日】2016年6月2日
【发明人】雷建都, 刘彦雪, 刘静, 何静, 王璐莹, 晋禄禄
【申请人】北京林业大学