本发明涉及复合纳米粒子制备技术领域，具体涉及一种基于纳米载体包覆山梨酸-茶多酚复合纳米粒子。
背景技术：
纳米载体(植物固醇、明胶、壳聚糖、番茄红素)凭借其小分子化学特征除了具备药物本身的特征外，还具有很好的吸附特性、缓释特性、溶解特性和靶向特性，将山梨酸-茶多酚等功能性产物负载在纳米载体表面，可以使产物的生物活性得到增强，实现活性物质的靶向递送。项目涉及到多种纳米载体的可控合成及修饰，并筛选出负载能力强、生物兼容性佳的纳米载体。
山梨酸及其盐类对霉菌和酵母的生长有很好的抑制作用，已作为天然防腐剂被普遍应用。但山梨酸的抑菌效果主要由其未解离的酸分子决定。酸性越大，山梨酸分子的抑菌效果越好，而在碱性条件下，山梨酸的抑菌效果较差。由于山梨酸在水中溶解度较小，以及其抑菌作用的发挥受到ph的限制，这些都限制了山梨酸在食品中的直接应用。纳米粒子可以运载各种类型的物质，提高难溶性药物的溶解度，这是由于难溶性药物的溶解度与比表面积有关。
众所周知，茶多酚具有抗氧化作用，对多种肿瘤形成的各个阶段都有预防和抑制作用，可吸收放射性物质，被称为天然的紫外线过滤器。茶多酚具有较强的抑制血压转换相关酶活性的作用，因而可以起到降低或保持血压稳定的作用。然而，茶多酚粉末的稳定性较差，在潮湿、阳光、高温等条件下极易发生氧化、聚合、缩合等反应。茶多酚中的儿茶素等活性物质在非保护状态下生物利用率不高，直接作为保健药品服用时，经过肠胃消化结构会遭 到破坏，影响了其保健效果。
技术实现要素：
本发明的目的在于针对现有技术的缺陷和不足，提供一种设计合理的基于纳米载体包覆山梨酸-茶多酚复合纳米粒子，不仅具有山梨酸分子的防腐特性，赋予饮料的良好的保鲜功能，同时又保持茶多酚分子的抗肿瘤、抗辐射、抗氧化、预防心脑血管疾病等优势特点。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：它的制备方法如下：
一、制备筛选合适的纳米载体：采用植物固醇、明胶、壳聚糖、番茄红素四中作为纳米载体制备材料，通过改变纳米载体合成过程中的目标分子的浓度、引发剂的种类和含量、组装模式、微乳体系搅拌转速来制备出具有不同形貌和粒径的纳米载体，筛选出负载能力强、生物兼容性佳的纳米载体；
二、将山梨酸和茶多酚采用乳液聚合法、分子自组装法、模板聚合法或者乳化分散法进行合成，制备出复合纳米粒子；
三、对制备出来的复合纳米粒子进行过功能响应性能测试：用膜分离方法测定游离山梨酸的含量，通过uv-vis光谱读出254nm处吸光度值，根据标准曲线进而计算出山梨酸-茶多酚复合纳米粒子表面山梨酸的包封率和复合纳米粒子的体外释放性能；同时通过酒石酸铁比色法对复合纳米粒子表面茶多酚的包封率和体外缓释性能进行测试计算，考查茶多酚在室温悬浮液中的稳定性分析其生物利用效率，测试山梨酸-茶多酚复合纳米粒子的防腐性能和抗肿瘤性能，综合分析不同形貌和粒径山梨酸-茶多酚复合纳米粒子间的性能差异。
所述的步骤二中，通过优化山梨酸分子的修饰量、茶多酚分子的修饰量以及山梨酸和茶多酚的相对比例，制备具有不同性能特征的山梨酸-茶多酚复合纳米粒子，从反应动力学和热力学的角度研究纳米粒子表面形态、生长速度等因素对粒子的最终形貌及尺寸的影响，通过前躯体的浓度、反应时间和 反应温度调节生长速度，结合动力学的调控，研究形状、表面配体对最终所得纳米粒子形貌影响。
所述的步骤二中，采用tem、扫描电子显微镜(sem)对山梨酸-茶多酚复合纳米粒子的形貌和分散性进行表征，分析形貌变化趋势，建立粒径统计分析数据，优化多种包覆剂的用量，通过高速离心、改变缓冲液离子强度等手段考察山梨酸-茶多酚复合纳米粒子的稳定性，减小纳米粒子在实际应用过程中的非特异性吸附和聚集，通dls、uv-vis等手段观察山梨酸-茶多酚复合纳米粒子的粒径分布、表面电荷性质变化，通过冷冻电子显微镜和三维断层扫描重构技术(cryo-tem-tomography)对山梨酸-茶多酚复合纳米粒子的表面形态计算重构，分析纳米粒子构象变化和表面形态。
本发明有益效果为：本发明所述的一种山梨酸-茶多酚复合纳米粒子的制备方法，制备出的成品不仅具有山梨酸分子的防腐特性，赋予饮料的良好的保鲜功能，同时又保持茶多酚分子的抗肿瘤、抗辐射、抗氧化、预防心脑血管疾病等优势特点，本发明具有结构简单，设置合理，制作成本低等优点。
具体实施方式
本具体实施方式采用的技术方案是：它的制备工艺如下：
一、制备筛选合适的纳米载体：采用植物固醇、明胶、壳聚糖、番茄红素四中作为纳米载体制备材料，通过改变纳米载体合成过程中的目标分子的浓度、引发剂的种类和含量、组装模式、微乳体系搅拌转速来制备出具有不同形貌和粒径的纳米载体，筛选出负载能力强、生物兼容性佳的纳米载体；；
二、将山梨酸和茶多酚采用乳液聚合法、分子自组装法、模板聚合法或者乳化分散法进行合成，制备出复合纳米粒子；
三、对制备出来的复合纳米粒子进行过功能响应性能测试：用膜分离方法测定游离山梨酸的含量，通过uv-vis光谱读出254nm处吸光度值，根据标准曲线进而计算出山梨酸-茶多酚复合纳米粒子表面山梨酸的包封率和复 合纳米粒子的体外释放性能；同时通过酒石酸铁比色法对复合纳米粒子表面茶多酚的包封率和体外缓释性能进行测试计算，考查茶多酚在室温悬浮液中的稳定性分析其生物利用效率，测试山梨酸-茶多酚复合纳米粒子的防腐性能和抗肿瘤性能，综合分析不同形貌和粒径山梨酸-茶多酚复合纳米粒子间的性能差异。
所述的步骤二中，通过优化山梨酸分子的修饰量、茶多酚分子的修饰量以及山梨酸和茶多酚的相对比例，制备具有不同性能特征的山梨酸-茶多酚复合纳米粒子，从反应动力学和热力学的角度研究纳米粒子表面形态、生长速度等因素对粒子的最终形貌及尺寸的影响，通过前躯体的浓度、反应时间和反应温度调节生长速度，结合动力学的调控，研究形状、表面配体对最终所得纳米粒子形貌影响。
所述的步骤二中，采用tem、扫描电子显微镜(sem)对山梨酸-茶多酚复合纳米粒子的形貌和分散性进行表征，分析形貌变化趋势，建立粒径统计分析数据，优化多种包覆剂的用量，通过高速离心、改变缓冲液离子强度等手段考察山梨酸-茶多酚复合纳米粒子的稳定性，减小纳米粒子在实际应用过程中的非特异性吸附和聚集，通dls、uv-vis等手段观察山梨酸-茶多酚复合纳米粒子的粒径分布、表面电荷性质变化，通过冷冻电子显微镜和三维断层扫描重构技术(cryo-tem-tomography)对山梨酸-茶多酚复合纳米粒子的表面形态计算重构，分析纳米粒子构象变化和表面形态。
采用上述结构后，本发明有益效果为：本发明所述的一种山梨酸-茶多酚复合纳米粒子的制备方法，制备出的成品不仅具有山梨酸分子的防腐特性，赋予饮料的良好的保鲜功能，同时又保持茶多酚分子的抗肿瘤、抗辐射、抗氧化、预防心脑血管疾病等优势特点，本发明具有结构简单，设置合理，制作成本低等优点。
以上所述，仅用以说明本发明的技术方案而非限制，本领域普通技术人 员对本发明的技术方案所做的其它修改或者等同替换，只要不脱离本发明技术方案的精神和范围，均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。